Legionella IFA (En Español) IFA para Legionella

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1 (En Español) IFA para Legionella REF IF0950 Rev. L Ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFA) para la detección de anticuerpos contra Legionella pneumophila en el suero humano Para diagnóstico in vitro PROPOSITO DE LA PRUEBA El IFA para Legionella de Focus Diagnostics está indicado para la detección cualitativa y la determinación semicuantitativa de anticuerpos contra Legionella pneumophila en el suero humano. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA La Legionella es un bacilo gram negativo que no forma esporas. El género Legionella comprende por lo menos 39 especies y 61 serogrupos 1. La Legionella pneumophila es responsable de más del 90% de los casos de enfermedad del legionario 1. La Legionella causa una amplia variedad de manifestaciones clínicas, que van desde una infección asintomática hasta una neumonía de progreso rápido. La legionelosis es una enfermedad que se notifica al CDC (sigla en inglés del Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades) y se asocia a dos enfermedades clínica y epidemiológicamente distintas: la enfermedad del legionario, que se caracteriza por fiebre, mialgia, tos, y neumonía, y la fiebre de Pontiac, una enfermedad más leve sin neumonía 2. No es posible distinguir clínicamente o radiológicamente la enfermedad del legionario de la neumonía causada por otros agentes, y la comprobación de una infección con otros agentes patógenos respiratorios no excluye la posibilidad de una infección concomitante por Legionella spp. Entre 5% y 30% de los casos de enfermedad del legionario son letales 1. Se cree que el principal modo de infección es la inhalación de aerosoles de agua contaminada con Legionella spp. No se ha observado transmisión de persona a persona 3. El riesgo de contraer legionelosis tras la exposición depende de una serie de factores que incluyen el tipo e intensidad de la exposición y el estado de salud de la persona expuesta 3. Cada uno de los siguientes factores se asocia independientemente a un resultado fatal: inmunosupresión, edad avanzada, enfermedad renal terminal, cáncer y adquisición hospitalaria de la enfermedad. El período de incubación de la enfermedad del legionario es generalmente de 2 a 10 días 3. Para los propósitos epidemiológicos del Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) de EE.UU., una legionelosis confirmada por el laboratorio en pacientes que han permanecido 10 o más días consecutivos en un hospital antes de la presentación de la enfermedad tiene un diagnóstico definitivo de enfermedad del legionario hospitalaria, mientras que una infección confirmada por el laboratorio que se presente entre 2 y 9 días después de una hospitalización tiene un diagnóstico posible de infección hospitalaria 3. La prevención de las infecciones hospitalarias por Legionella comprende la educación del personal del hospital y vigilancia, además de otras medidas 3. Si se comprueba un estado de transmisión continua de la enfermedad, se justifica una investigación ambiental para determinar la(s) fuente(s) de Legionella, además de otras medidas de control de la infección 3. Según el CDC, los casos pueden confirmarse utilizando los siguientes criterios: Confirmación en el laboratorio (CDC) 2 1. Aislamiento de Legionella a partir de secreciones respiratorias, tejido pulmonar, líquido pleural u otros líquidos corporales normalmente estériles, o 2. Detección mediante IFA de un aumento 4 veces del título de anticuerpos hasta valores 1:128 contra Legionella pneumophila del serogrupo 1 entre muestras de suero apareadas obtenidas en la fase aguda y de convalecencia, o 3. Detección de L. pneumophila del serogrupo 1 en secreciones respiratorias, tejido pulmonar o líquido pleural mediante pruebas de inmunofluorescencia directa, o 4. Demostración de antígeno de L. pneumophila del serogrupo 1 en orina mediante radioinmunoensayo o ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Según el European Working Group for Legionella Infections (EWGLI), los casos pueden confirmarse o sospecharse de acuerdo con los siguientes criterios: Confirmación microbiológica (EWGLI) 4 1. Aislamiento de Legionella a partir de secreciones respiratorias, tejido pulmonar o sangre. 2. Detección de un aumento 4 veces del título de anticuerpos contra L. pneumophila del serogrupo 1 mediante IFA o microaglutinación. 3. Detección de antígenos específicos de Legionella en orina mediante el uso de reactivos validados. Presunción microbiológica (EWGLI) 4 1. Detección de un aumento 4 veces del título de anticuerpos contra L. pneumophila u otros serogrupos u otras especies de Legionella mediante IFA o microaglutinación. 2. Detección de un solo título elevado de un anticuerpo sérico especifico contra L.pneumophila del serogrupo 1 o de otros serogrupos o de otras especies de Legionella. 3. Detección de antígenos específicos de Legionella en secreciones respiratorias o tinción directa del organismo mediante anticuerpos fluorescentes (DFA, Direct Fluorescence Antibody) en secreciones respiratorias o en tejido pulmonar utilizando reactivos monoclonales comprobados. 4. Detección del ADN de especies de Legionella mediante la reacción en cadena de la polimerasa. Un solo título elevado de anticuerpos no confirma un caso de enfermedad del legionario ya que se observan títulos IFA 1:256 en el 1% a 16% de los adultos sanos 3. Se generan anticuerpos de la clase IgA, IgG e IgM contra los antígenos de Legionella 5. En general, sólo un 80% de las personas con cultivos positivos desarrollan un aumento significativo del título de anticuerpos 5. En este 80%, pueden transcurrir hasta 9 semanas antes de un aumento significativo del título 5. Los anticuerpos IgM pueden permanecer detectables durante meses 5. El IFA para Legionella de Focus Diagnostics utiliza portas de 12 pocillos. Cada pocillo tiene dos áreas antigénicas separadas. Un área contiene L. pneumophila del serogrupo 1, y la otra contiene una combinación de L. Pneumophila de los serogrupos 2, 3, 4, 5, 6 y 8. L. pneumophila está fijada con formalina.

2 Página 2 PRINCIPIO DEL METODO El IFA para Legionella es un procedimiento "sandwich" en dos etapas. En la primera etapa, el suero del paciente se diluye en PBS, se pone en contacto con el antígeno en los pocillos de las portas y se incuba. Después de la incubación, se lava las portas con solución salina tamponada para eliminar el anticuerpo no unido. En la segunda etapa, cada pocillo de antígeno se cubre con anticuerpos contra inmunoglobulinas humanas (IgG, IgM, IgA) marcados con fluoresceína. Se incuba las portas para permitir que los complejos antígeno-anticuerpo reaccionen con los anticuerpos anti-ig marcados con fluoresceína. Después de lavar, secar y montar las portas, éste se examina en un microscopio de fluorescencia. Las reacciones positivas aparecen como barras fluorescentes de color verde manzana. Los títulos semicuantitativos de punto final se obtienen mediante la evaluación de diluciones seriadas de las muestras positivas. MATERIALES SUMINISTRADOS El kit de prueba de Focus Diagnostics contiene material suficiente para 120 determinaciones. Portas con sustrato REF IF0951 Ag Diez portas con doce pocillos cada uno. Cada pocillo tiene dos áreas antigénicas: una de estas áreas contiene L. pneumophila del serogrupo 1 y la otra contiene una combinación de L. pneumophila de los serogrupos 2, 3, 4, 5, 6 y 8. Conserve los paquetes de portas sellados a temperaturas comprendidas entre 2 y 8ºC. Las portas sellados son estables hasta el día indicado en las etiquetas del paquete. Para evitar la condensación, permítase que las portas alcancen la temperatura ambiente antes de abrir el paquete sellado. Nota: La mayoría de los microscopios fluorescentes invierten la imagen del portaobjetos. Cuando se visualicen a través del microscopio, los antígenos aparecerán en orden inverso con respecto al que se muestra a continuación. Conjugado polivalente, 3,5 ml REF IF0010 CONJ POLY Un vial de anticuerpos de cabra contra inmunoglobulinas humanas (IgG, IgM, IgA) marcados con fluoresceína. Contiene azul de Evans para tinción de contraste, estabilizador de proteínas y conservantes. Listo para ser usado. Estable entre 2 y 8ºC hasta la fecha indicada en la etiqueta. No use el producto si presenta turbidez, decoloración u otro signo de contaminación bacteriana. Antes de su uso, permita que alcance la temperatura ambiente. Control Detectable, 0,30 ml REF IF0914 CONTROL > Un vial de suero humano preparado a la dilución de la prueba. Contiene conservante. Estable entre 2 y 8ºC hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No use el producto si presenta turbidez, decoloración u otro signo de contaminación bacteriana. Antes de su uso, permita que alcance la temperatura ambiente. No someta a pretratamiento ni diluya el contenido. Control No Detectable, 0,25 ml REF IF0913 CONTROL < Un vial de suero humano preparado a la dilución de la prueba. Contiene conservante. Estable entre 2 y 8ºC hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No use el producto si presenta turbidez, decoloración u otro signo de contaminación bacteriana. Antes de su uso, permita que alcance la temperatura ambiente. No someta a pretratamiento ni diluya el contenido. Medio de montaje, 2,5 ml REF IF0007 REAG MONT Un frasco cuentagotas con glicerol tamponado con PBS a ph 7,2 ± 0,1. Contiene conservante. Estable entre 2 y 8ºC hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del frasco. Antes de su uso, permita que alcance la temperatura ambiente. PBS REF IF0005 BUF Un vial de solución salina tamponada con fosfato (PBS) en polvo. Reconstituya con 1 litro de agua destilada (o purificada). La solución reconstituida es un tampón a 0,01 M a ph 7,2 ± 0,1. Conserve el PBS entre 2 y 8ºC antes y después de la reconstitución. Antes de su uso, permita que alcance la temperatura ambiente. No use el producto si presenta turbidez, decoloración u otro signo de contaminación bacteriana. MATERIALES REQUERIDOS, NO SUMINISTRADOS 1. Portas de 24 x 50 mm 2. Tubos de ensayo y soporte, tubos de microcentrífuga o placa de microtitulación para efectuar diluciones de suero. 3. Centrífuga clínica 4. Incubador de 35 a 37ºC o baño de agua para la incubación de portas 5. Frigorífico de 2 a 8 C 6. Frasco de plástico para el lavado 7 Pipetas calibradas o pipeteadores de pistón con puntas desechables 8. Cubetas Coplin o bandeja para tinción con soporte para portas. 9. Matraz aforado o cilindro graduado limpios, de 1 litro 10. Cámara húmeda para la incubación de portas 11. Agua destilada o purificada 12. Cronómetro 13. Papel absorbente para el secado de portas 14. Microscopio de fluorescencia. Parámetros recomendados: Filtro de excitación nm Filtro barrera nm Fuente de luz HBO 100W (mercurio) Objetivo 20-40X, calidad apropiada para fluorescencia, objetivo seco de gran aumento

3 Página 3 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1. Todos los productos sanguíneos deben ser tratados como potencialmente infecciosos. Las materias primas para la elaboración de este producto (incluyendo el control no detectable) han sido analizadas mediante métodos aprobados por la FDA para la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B, de anticuerpos contra la hepatitis C y contra el VIH-1/2 (SIDA), obteniéndose resultados negativos. No obstante, puesto que ningún método de análisis puede garantizar con un 100 % de certeza que los productos derivados de sangre humana no transmitirán estos u otros agentes infecciosos, todo el material que entre en contacto con estos reactivos, ya sean controles, muestras de suero o equipamiento, deben considerarse como potencialmente infecciosos y ser desechados tomando las precauciones de bioseguridad adecuadas. El CDC y los institutos nacionales de la salud recomiendan que los agentes potencialmente infecciosos estén manejados en el nivel 2 de Biosafety. 11,12 2. El azul de Evans es cancerígeno. Evite el contacto con la piel o los ojos. 3. No sustituya los reactivos con otros reactivos procedentes de kits de otros lotes o de otros fabricantes. 4. Use únicamente los protocolos descritos en este prospecto. 5. La contaminación cruzada de muestras del paciente en la porta puede dar lugar a resultados erróneos. Añada las muestras del paciente y manipule la porta cuidadosamente para evitar que los sueros de los pocillos adyacentes se mezclen. 6. La contaminación bacteriana de las muestras de suero o de los reactivos puede dar lugar a resultados erróneos. Use técnicas asépticas para evitar la contaminación bacteriana. 7. El medio de montaje contiene entre 30 y 60% de glicerol, lo que puede causar irritación si se inhala o entra en contacto con la piel. En caso de inhalación o contacto, deben tomarse inmediatamente medidas de primeros auxilios. PERÍODO DE VALIDEZ Y MANIPULACIÓN 1. Los kits son estables hasta el fin del mes indicado en la fecha de caducidad cuando se conservan a una temperatura comprendida entre 2 y 8 C. 2. No use el kit o sus reactivos después de la fecha de caducidad. 3. No exponga los reactivos a luz intensa durante su conservación o incubación. OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS El suero es la fuente de elección para la obtención de muestras. No se ha realizado realizó ninguna evaluación de la compatibilidad de este ensayo con otro tipo de muestras. El suero hiperlipémico, hemolizado o contaminado puede producir resultados erróneos; por lo tanto debe evitarse su uso. Obtención y manipulación de las muestras Obtenga las muestras de sangre asépticamente mediante técnicas aprobadas de punción venosa efectuadas por personal capacitado 6. Permita que las muestras de sangre se coagulen a temperatura ambiente antes de su centrifugación. Transfiera asépticamente el suero a un recipiente estéril bien cerrado para su almacenamiento a una temperatura comprendida entre 2 y 8 C. Si el análisis no se efectuará en un período de 5 días, la muestra deberia ser congelada a una temperatura no inferior a 20 C. Antes de su uso, descongele y mezcle bien las muestras. Preparación de las muestras La dilución de prueba del suero es de 1:16 en PBS. Para determinar los títulos de punto final, use PBS para realizar diluciones seriadas superiores a la dilución de prueba. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 1. Retire las portas del lugar de almacenamiento en frío. Para evitar la condensación, permítase que las portas alcancen la temperatura ambiente antes de abrir los paquetes. 2. Introduzca 25 µl de control detectable, sin diluir (tal como viene en el vial), en el pocillo de una porta. 3. Introduzca 25 µl de control no detectable sin diluir (tal como viene en el vial), en el pocillo de una porta. 4. Para cada muestra del paciente que se analice, añada aproximadamente 25 µl de muestra diluida (véase Preparación de las muestras, más arriba) en el pocillo de un portas. Tome notas para poder identificar cada pocillo durante la lectura de los resultados. 5. Incube el(los) portaobjeto(s) en una cámara húmeda durante 45 ± 2 minutos a una temperatura comprendida entre 35 y 37ºC. 6. Retire los cubreobjetos de la cámara húmeda y enjuague delicadamente cada portas con PBS. No aplique PBS directamente sobre los pocillos de las portas. Enjuague una fila cada vez para evitar que las muestras se mezclen. Lave las portas previamente enjuagados sumergiéndolos durante 20 minutos en una cubeta Coplin o en un recipiente para tinción de portas que contenga PBS. 7. Sumerja brevemente las portas en agua destilada o purificada y permita que se sequen al aire. 8. Añada aproximadamente 25 µl de conjugado a cada pocillo de las portas. 9. Incube las portas en una cámara húmeda durante 30 ± 2 minutos a una temperatura comprendida entre 35 y 37ºC. 10. Repita los pasos de lavado 6 y Aplique algunas gotas de medio de montaje sobre las portas y cúbralo con un cubreobjetos de 24 x 50 mm. 12. Examine los pocillos a una magnificación final de 400X en un microscopio de fluorescencia correctamente equipado. Para obtener una fluorescencia óptima, examine las portas el mismo día de la realización del ensayo. Si esto no fuera posible, conserve las portas en la oscuridad, a una temperatura comprendida entre 2 y 8ºC, durante un máximo de 24 horas. CONTROL DE CALIDAD Cada serie de análisis (cada vez que se procesa un portas o grupo de portas) debe incluir controles detectables y no detectables. 1. El control Detectable debe producir un nivel de fluorescencia de 1+ a 4+ en ambas áreas antigénicas. 2. Si se desea obtener una lectura de 1+, diluya el control detectable a 1:16 (véase "PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA", más arriba) y lea comparando con L. pneumophila del serogrupo 1. Debido a las diferentes condiciones de laboratorio, incluido el equipamiento, la dilución para obtener un control de lectura de 1+ puede variar en ± una dilución doble. 3. El control no detectable debe exhibir reactividad insignificante a todos los puntos. La fluorescencia que no empareja la morfología y la distribución del control detectable se considera no detectable. Si no se observan estos resultados con los controles, los resultados del ensayo deben considerarse inválidos y el ensayo deberia repetirse. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL ENSAYO La características ópticas del microscopio y el tipo y condiciones de la fuente de luz determinarán la intensidad global de fluorescencia así como los títulos de punto final. En cada serie de análisis, lea primero los pocillos control para asegurar una correcta interpretación. Lectura de las portas Lea la intensidad de fluorescencia de las barras, y clasifique la fluorescencia de la siguiente manera: 2 a 4+ Fluorescencia verde manzana moderada a intensa. 1+ Fluorescencia visible, pero tenue. Negativo No hay fluorescencia o la fluorescencia es semejante a la del pocillo del control no detectable.

4 Página 4 Interpretación de los resultados de las muestras del paciente El inverso de la máxima dilución de suero que produce fluorescencia visible (1+) verde manzana se denomina título de punto final. 1:16 Un título de punto final 1:16 en una sola muestra debe considerarse como evidencia de exposición en un momento indefinido. Una segunda muestra tomada de 10 a 21 días después de la muestra original deberia analizarse en paralelo con la primera muestra. Si la segunda muestra presenta un incremento de cuatro veces con respecto al título de la primera muestra, esto indica exposición reciente. La ausencia de cambios en los títulos sugiere exposición en el pasado. <1:16 Títulos de punto final inferiores a 1:16 sugieren que el paciente no ha estado expuesto recientemente. LIMITACIONES 1. No se ha determinado el rendimiento de este ensayo en la población general. 2. No se ha determinado el rendimiento de este ensayo para descartar la exposición a otros organismos, como Streptococcus pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Hantavirus y otros organismos. El uso de otros métodos se recomienda en dichos casos. 3. No se ha determinado el rendimiento de este ensayo en matrices que no sean suero, o para el seguimiento del tratamientos con antibióticos. 4. Para evaluar el paciente, todos los resultados de esta prueba o de cualquier otra prueba serológica deben correlacionarse con la historia clínica, los datos epidemiológicos y otros datos disponibles. 5. Un único resultado positivo sólo indica que ha habido una exposición inmunitaria previa; el nivel de respuesta de anticuerpos no puede utilizarse para determinar la existencia de una infección activa ni el estadio de la enfermedad. VALORES ESPERADOS Los antígenos de Legionella inducen la producción de anticuerpos de clase IgA, IgG e IgM 5. En general, sólo un 80% de las personas con cultivos positivos desarrollan un aumento significativo del título de anticuerpos 5. En este 80 %, pueden transcurrir hasta 9 semanas antes de producirse un aumento significativo del título 5. Los anticuerpos IgM pueden permanecer detectables durante meses 5. En Estados Unidos, entre 1% y 16% de los adultos sanos tienen títulos únicos 1:256 en evaluaciones con IFA. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Reactividad con el panel de seroconversión de EE.UU. para legionella (n = 31) Un investigador interno evaluó la sensibilidad del ensayo Focus con 31 pares de seroconversión provistos por un laboratorio federal de salud pública de EE. UU. Los 31 pares de sueros se archivaron y mediante un IFA de referencia se demostró un aumento de 4 veces o más en el punto final entre los sueros de fase aguda y de convalecencia para Legionella pneumophila. En el IFA de referencia se utilizó un antígeno del serogrupo 1 y un conjugado polivalente (IgA, IgG e IgM). Entre los 31 pacientes, el IFA para Legionella de Focus demostró un aumento de 4 veces en la reactividad con un 93,5% (29/31) con una o ambas áreas antigénicas, en un paciente se observó un punto final bajo (1:64) para el antígeno del serogrupo 2-8 y un paciente fue negativo. Entre los 29 casos positivos mediante el IFA para Legionella de Focus, trece pacientes fueron positivos para el antígeno del serogrupo 1, un paciente fue positivo para el antígeno del serogrupo 2-8 y quince pacientes fueron positivos para ambos antígenos (positivos para Legionella indiferenciados). Reactividad con el panel de seroconversión de EE.UU. para Legionella (n = 31) Resultado para L. pneumophila % con Focus IC del 95% Aumento de 4 veces 93,5%*(29/31) 78,6-99,2% Reactividad baja (<1:256) 3,2% (1/31) 0,1-16,7% Negativo 3,2% (1/31) 0,1-16,7% * 13 pacientes fueron positivos para el serogrupo 1, uno fue positivo para el serogrupo 2-8 y quince fueron positivos para Legionella indiferenciados (positivos para los serogrupos 1 y 2-8). Reactividad con el panel de seroconversión de la UE para Legionella (n = 29) Un investigador externo evaluó la sensibilidad del ensayo de Focus con los 29 pares de seroconversión suministrados. Los 29 pares de suero se archivaron y mediante un IFA de referencia se demostró un aumento de 4 veces o más en el punto final entre los sueros de fase aguda y de convalecencia para Legionella pneumophila, para los serogrupos En los IFA de referencia se utilizaron áreas antigénicas separadas para los serogrupos 1-10 y se utilizó, además, un conjugado polivalente (IgA, IgG e IgM). Entre los 29 presuntos pacientes positivos agudos, el IFA de referencia detectó cuatro pacientes del serogrupo 1, doce pacientes del serogrupo 6, un paciente del serogrupo 2, un paciente del serogrupo 8 y once pacientes indiferenciados para Legionella. Entre los cuatro pacientes del serogrupo 1 según el IFA de referencia, el IFA de Focus detectó uno como presunto paciente agudo del serogrupo 2-10 y tres como presuntos pacientes agudos indiferenciados para Legionella. Entre los 12 pacientes del serogrupo 6 según el IFA de referencia, el IFA de Focus detectó seis como presuntos pacientes agudos del serogrupo 1, dos como presuntos pacientes agudos del serogrupo 2-10, tres como presuntos pacientes agudos indiferenciados para Legionella y uno como negativo. El único paciente del serogrupo 2 según el IFA de referencia, fue detectado como presunto paciente agudo del serogrupo 1 por el IFA de Focus. El único paciente del serogrupo 8 según el IFA de referencia, fue detectado como presunto paciente indiferenciado para Legionella por el IFA de Focus. Entre los once pacientes indiferenciados para Legionella según el IFA de referencia, el IFA de Focus detectó uno como presunto paciente agudo del serogrupo 1, tres como presuntos pacientes agudos del serogrupo 2-10 y siete como presuntos pacientes agudos indiferenciados para Legionella. Reactividad con el panel de seroconversión de la UE para Legionella (n = 29) Resultado para L. % con el IFA de IC del 95% pneumophila Focus Aumento 4 veces 96,6%*(28/29) 82,2-99,9% Reactividad baja (<1:256) 0,0% (0/29) 0,0-11,9% Negativo 3,4% (1/29) 0,1-17,87% * Mediante el IFA de referencia, cuatro pacientes fueron positivos para el serogrupo 1, doce correspondieron al serogrupo 6, uno al serogrupo 2, uno al serogrupo 8 y once pacientes fueron positivos para Legionella indiferenciados (positivos para los serogrupos 1 y 2-10). Reactividad con sueros de alta reactividad para Legionella de la UE (n=31) Un investigador externo evaluó la sensibilidad del ensayo Focus con 31 sueros de alta reactividad en el IFA de referencia para Legionella. En el IFA de referencia se utilizaron áreas antigénicas separadas para los serogrupos 1-10 y se utilizó, además, conjugado polivalente (IgA, IgG e IgM). Se archivaron los 31 sueros y el punto final estuvo por encima de la dilución de 1:128 con el IFA para Legionella de referencia. Entre los 31 sueros, el IFA de referencia detectó 20 sueros reactivos con una de las áreas antigénicas de los serogrupos 2-10, tres sueros reactivos sólo con el área antigénica del serogrupo 1 y ocho sueros correspondieron a pacientes indiferenciados para Legionella (reactividad en el rango de una dilución del doble entre el serogrupo 1 y otro serogrupo). La

5 Página 5 reactividad global con el IFA para Legionella de Focus (reactividad del serogrupo 1 y/o del serogrupo 2-8) estuvo en el rango de una dilución del doble de la del IFA de referencia para el 96,8% (30/31) de los sueros. El IFA para Legionella de Focus alcanzó el punto final por lo menos en una dilución 8 veces inferior con un suero. Reactividad con sueros de reactividad intermedia para Legionella de la UE (n=30) Un investigador externo evaluó la sensibilidad del ensayo Focus con 30 sueros de reactividad intermedia en el IFA de referencia para Legionella. En el IFA de referencia se utilizaron áreas antigénicas separadas para los serogrupos 1-10 y se utilizó, además, un conjugado polivalente (IgA, IgG e IgM). Se archivaron los 30 sueros y el punto final estuvo por encima de la dilución de 1:64 ó 1:128 con el IFA para Legionella de referencia. Entre los 30 sueros, el IFA de referencia detectó 26 positivos con una de las áreas antigénicas de los serogrupos 2-10 y cuatro sueros correspondieron a pacientes indiferenciados para Legionella (reactividad en el rango de una dilución del doble entre el serogrupo 1 y otro serogrupo). La reactividad global con el IFA para Legionella de Focus (reactividad del serogrupo 1 o del serogrupo 2-8) estuvo en el rango de una dilución del doble de la del IFA de referencia para el 93,3% (28/30) de los sueros. El IFA para Legionella de Focus fue cuatro veces más bajo con un suero y negativo con un segundo suero. Prevalencia en la población normal (n=30) Un investigador externo (un laboratorio de referencia localizado en Francia) evaluó la prevalencia con 30 sueros de una población normal mediante el ensayo de Focus. Los sueros eran negativos con el IFA para Legionella de referencia del investigador. Entre los 30 sueros, el 20% (6/30) mostró una reactividad baja (1:16 ó 1:32) con el antígeno del serogrupo 1 de Focus, y el 10% (3/30) mostró una reactividad baja (1:16 ó 1:32) con el antígeno del serogrupo 2-8 de Focus. Reactividad cruzada Un investigador externo (un laboratorio de referencia localizado en Francia), comparó la reactividad cruzada del IFA para Legionella de Focus con un IFA para Legionella de referencia, utilizando 16 sueros positivos para patógenos que causan neumonía. Entre los 16 sueros, cinco fueron IgM positivos para Mycoplasma pneumoniae, cinco fueron positivos para Chlamydia pneumoniae (uno de los cinco también fue IgM positivo para C. pneumoniae) y seis fueron IgG positivos para Streptococcus pneumoniae. En el IFA de referencia se utilizaron áreas antigénicas separadas para los serogrupos 1-10 y se utilizó, además, un conjugado polivalente (IgA, IgG e IgM). El IFA de Focus y el IFA de referencia tuvieron una reactividad baja (punto final 64) con un 33% (2/6) de positivos para S. pneumoniae. El IFA de Focus tuvo una reactividad baja, con un 40% (2/5) de positivos para M. pneumoniae (uno de los dos reactivos alcanzaron el punto final en la dilución de 1:128) y el IFA de referencia tuvo una reactividad baja, con un 60% (3/5) de positivos para M. pneumoniae. El IFA de Focus tuvo una reactividad baja (punto final 64), con un 80% (4/5) de positivos para C. pneumoniae y el IFA de referencia tuvo una reactividad baja, con un 60% (3/5) de positivos para C. pneumoniae. Población S. pneumoniae M. pneumoniae C. pneumoniae % de reactividad del IFA/legion. de Focus 33% (2/6) IC 95% 4,3-97,7% 40% (2/5) IC 95% 5,3-85,3% 80% (4/5) IC 95% 28,4-99,5% % de reactividad del IFA/legion. de referencia 33% (2/6) IC 95% 4,3-97,7% 60% (3/5) IC 95% 14,7-94,7% 60% (3/5) IC 95% 14,7-94,7% Reproducibilidad interensayo Un investigador externo evaluó la reproducibilidad interensayo determinando el punto final de dilución de tres sueros positivos en tres días distintos. El punto final estuvo siempre en el rango de una dilución al doble. Estabilidad Un investigador interno evaluó la estabilidad del IFA para Legionella de Focus. Los componentes fueron acelerados a un equivalente de 2 años a temperatura de entre 2 a 8 ºC. Los componentes acelerados se compararon con los componentes no acelerados utilizando 10 sueros de archivo. De entre los diez sueros, uno fue altamente reactivo ( 1:512), uno tuvo reactividad intermedia (1:128), seis tuvieron reactividad baja (de entre 1:16 y 1:64) y tres no mostraron reactividad. El punto final de los componentes acelerados estuvo siempre en el rango de una dilución del doble respecto a los no acelerados. REFERENCIAS 1. CDC. Legionellosis: Legionnaires Disease (LD) and Pontiac Fever. (December 2003). 2. CDC. Case Definitions for Infectious Conditions Under Public Health Surveillance/Legionellosis (September 1996). 3. CDC. Guideline for Prevention of Nosocomial Pneumonia. MMWR. 46(RR-1): (January 1997). 4. European Working Group for Legionella Infections. Case Definition. (2004). 5. Edelstein, P. Detection of Antibodies to Legionella in the Manual of Clinical Laboratory Immunology. Rose, N, E de Macario, J Fahey, H Friedman, G Penn (eds). 4th Ed NCCLS. Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens; Approved Guideline (NCCLS H18-A2). 2 nd ed. (1999). 7. CDC-NIH Manual. (1999) Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 4 th ed. And National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of Laboratory Workers from Instruments, Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids and Tissue (NCCLS M29-A). El manual de instrucciones del kit está disponible en francés, alemán, italiano y español en y en otros idiomas de su distribuidor local. AUTORIZADO REPRESENTANTE mdi Europa GmbH, Langenhagener Str. 71, Langenhagen-Hannover, Alemania INFORMACIÓN PARA COMPRAS Teléfono: (800) (U.S.A. only) (562) (International) Fax: (562) ASISTENCIA TÉCNICA Teléfono: (800) (U.S.A. only) (562) (International) Fax: (562) PI.IF0950-ES Rev. L Escrito el día: 20 abril 2011 Visite nuestra página de web en: Cypress, California 90630, U.S.A.