NORMA TÉCNICA VIGILANCIA DE LABORATORIO INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DEPARTAMENTO LABORATORIOS DESALUD

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1 NORMA TÉCNICA MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA Ilustración1 VIGILANCIA DE LABORATORIO INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DEPARTAMENTO LABORATORIOS DESALUD

2 AUTORES DEPARTAMENTO LABORATORIOS DE SALUD SUBDEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA SECCIÓN MICOBACTERIAS SECCIÓN ESPIROQUETAS SECCIÓN BACTERIOLOGÍA SECCIÒN DE VIROLOGÍA SUBDPTO. COORDINACION DE LABORATORIO SECCION PARASITOLOGIA

3 INDICE Página Introducción 3 Vigilancia de Laboratorio de Campylobacter spp 4 Vigilancia de Laboratorio de Chlamydia psittaci 7 Vigilancia de laboratorio de Coxiella burnetti 9 Vigilancia de Laboratorio de Escherichia coli Productor de Toxina Shiga STEC Escherichia coli Verotoxigénico O157 y otros 12 Vigilancia de Laboratorio de Echrlichia spp. 16 Vigilancia de Labortorio de Legionella pneumophilia 19 Vigilancia de Laboratorio de Leptospira spp. 22 Vigilancia de Laboratorio de Listeria monocytogenes 26 Vigilancia de Laboratorio de Salmonella spp. 29 Vigilancia de Laboratorio de Shigella spp. 32 Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus agalactiae 35 Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus pneumoniae 38 Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus pyogenes 41 Vigilancia de Laboratorio de Treponema pallidum 44 Vigilancia de Laboratorio de Tripanosoma cruzi 48 Vigilancia de Laboratorio de Vibrio cholerae 54 Vigilancia de Laboratorio de Vibrio parahaemolyticus 57 Vigilancia de Laboratorio de Virus de la Hepatitis C 60 Vigilancia de Laboratorio de Virus de la Hepatitis B 64 Vigilancia de Laboratorio de Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) 68 Vigilancia de Laboratorio de Yersinia spp. 79 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana a Enterococcus spp. 76 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana de Haemophilus influenzae serotipo b 79 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana del Mycobacterium tuberculosis 82 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Neisseria gonorrhoeae 84 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Neisseria meningitidis 87 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Salmonella spp. 90

4 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Shigella spp. 92 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Streptococcus pneumoniae 94 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Staphyloccocus aureus 96

5 Introducción La Epidemiología es básicamente, el estudio de los problemas de salud o los eventos que ocurren a las personas, tomadas a nivel de población, obteniendo tasas que son comparables en el tiempo, para ser usadas en el control y prevención de las enfermedades. Esta ciencia tiene como sustento la notificación del fenómeno estudiado, y para ello, históricamente, se ha usado en nuestro país fundamentalmente la vigilancia de morbilidad, es decir, una notificación basada en hallazgos clínicos, siendo los resultados de laboratorio usados solamente para confirmar el diagnóstico ya hecho por los médicos tratantes u otros profesionales de la salud. Sin embargo desde 1999, en que se inicia la revisión del Reglamento sobre Notificación de Enfermedades de Declaración Obligatoria, que había sido aprobado en 1983, se incluyen además del Sistema de Vigilancia de Morbilidad, el Sistema de Vigilancia Ambiental y el Sistema de Vigilancia de Laboratorio. Este último define el rol de los laboratorios públicos y privados en la vigilancia epidemiológica de las enfermedades transmisibles, y establece la obligatoriedad de notificar la detección en el laboratorio de los agentes etiológicos allí definidos, todo lo cual se plasma en el Decreto Nº 712 del año 2000 y modificado el año 2002 como decreto Nº 139. La última actualización del listado oficial de las enfermedades sujetas a vigilancia nacional, incluyendo los agentes etiológicos que deben notificar los laboratorios públicos y privados, se aprueba el 22 de octubre del 2004, en el Decreto Nº 158. En esta importante tarea, el Instituto de Salud Pública de Chile tiene la obligación de organizar, evaluar, confirmar y analizar la información procedente de los laboratorios públicos y privados del país, para a su vez, notificar definitivamente al Ministerio de Salud. Para cumplir con este objetivo se han diseñado las Fichas de Notificación de Laboratorio contenidas en esta Norma Técnica, las que deben ser utilizadas por los laboratorios del país, en su rol a nivel local, en la vigilancia epidemiológica de las enfermedades transmisibles. Las fichas de esta norma técnica corresponden a todas las enfermedades bajo Vigilancia de Laboratorio, para lo cual se encuentran disponibles formularios correspondientes para el envío de cepas o datos, según corresponda ( es importante no olvidar que ademas existen otros agentes bajo notificación (Vigilancia Universal, decreto ley Nº 158,2004) en el cual existe un componente de laboratorio en el proceso de su reporte. Cualquier agente aislado de este grupo de enfermedades debe obligatoriamente ser enviado al Laboratorio Nacional de Referencia Instituto de Salud Pública de chile. Dr. Julio García Moreno Jefe Departamento Laboratorios de Salud 3

6 Vigilancia de Laboratorio de Campylobacter spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Campylobacter spp son considerados como una de la bacterias que más comúnmente causa enteritis en el mundo. En Chile no se conoce la importancia que tiene este agente a nivel nacional, por lo cual se hace necesario el estudio con el objeto de conocer su prevalencia y establecer su control como agente asociado a Enfermeda Trasmitida por Alimento (ETA). DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Campylobacter son bacilos gram-negativos con formas curvas sigmoídeos o espirales, pueden presentarse con formas esféricas o cocoides especialmente en cultivos viejos, son móviles por un flagelo único o bipolar, no forman esporas y generalmente son microaerófilos. Familia : Campylobacteraceae Genero : Campylobacter Especies a vigilar : C.jejuni, C. coli ENFERMEDAD HUMANA PRODUCIDA POR ESTE AGENTE La infección debido a C. jejuni y C. coli, produce un amplio espectro de la enfermedad desde pacientes asintomáticos hasta gastroenteritis severa, además pueden producir infecciones extraintestinales (bacteriemia, hepatitis, nefritis etc,) así como también complicaciones tardías de la enfermedad : síndrome de Guillain Barré y artritis reactiva. TIPO DE MUESTRAS REQUERIDAS -Deposición PERIODO OPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Ante sospecha de la enfermedad y previo al tratamiento antibiótico CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA Si el periodo de transporte es mayor a 2 horas la muestra debe ser colocada con tórula en medio de transporte como Cary-Blair, Stuart o Amies. TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Tinción Cristal violeta / Bicarbonato de sodio (VB) Cultivo 4

7 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de calidad. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Debe manipularse de acuerdo al nivel 2 de la Clasificación Internacional de Riesgo (Ref.Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004). ENVÍO A LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que realicen diagnóstico presuntivo a través de la tinción VB deben enviar al Instituto de Salud Pública las láminas que resulten positivas, acompañados del formulario correspondiente. Aquellos laboratorios que aíslen Campylobacter deben mandar la cepa aislada en medio de transporte Cary Blair dentro de 48 horas a temperatura ambiente, mediante formularios provistos por esta institución. 5

8 Vigilancia de Laboratorio Campylobacter spp. Laboratorio Local Muestra Medio de Transporte Cary Blair Negativa TINCION Violeta Bicarbonato Positiva Negativo CULTIVO Positivo Informe al paciente Enviar lámina ISP Informe presuntivo al paciente Informe al paciente Envío Cepa ISP Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL Informe al MINSAL Informe Laboratorio Local 6

9 Vigilancia de Laboratorio de Chlamydia psittaci JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La psitacosis es una infección respiratoria, frecuentemente ocupacional, que puede causar brotes en los lugares de trabajo y en ocasiones menos frecuentes intrafamiliares. La vigilancia se hace necesaria con el fin de conocer la prevalencia de en Chile, debido a que representa un problema de salud pública en otros países. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Las chlamydias son bacterias intracelulares obligadas, no crecen en medios de cultivo sintéticos, solamente en cultivos celulares. Familia : Chlamydiaceae Genero : Chlamydia Especie a vigilar : C. psittaci ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Psitacosis, neumonía atípica en muchos casos severa. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras: la primera en la fase aguda (primera semana) y la segunda tres a seis semanas después. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar a temperatura entre 4-8 C TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS - Inmunofluorescencia indirecta - ELISA - PCR CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Chlamydia psittaci debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada. Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente, para lo cual debe utilizar el Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología. 7

10 Vigilancia de Laboratorio Chlamydia psittaci Negativo Laboratorio Local que realiza la Técnica Positivo Notificar semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada Informe al paciente Informe al MINSAL Laboratorios que NO realizan la Técnica Muestra Negativo Laboratorio de Referencia ISP Positivo Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 8

11 Vigilancia de laboratorio decoxiella burnetti JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA C. burnetti produce una rickettsiosis febril aguda, que se puede presentar en forma repentina existiendo una enorme variabilidad en su gravedad y duración. En algunos casos se presenta neumonitis con tos, expectoración escasa, dolor torácico y signos físicos mínimos. Se debe realizar el diagnóstico diferencial con otras fiebres de origen desconocido. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Coxiella burnetti es un cocobacilo pleomórfico con una pared celular gram-negativa y que solo crece intracelularmente. Este microorganismo tiene dos fases antigénicas: la fase I aparece en la naturaleza y la fase II es detectable después de múltiples traspasos de laboratorio en huevos o cultivos celulares. Ambas fases son extraordinariamente estables en el ambiente y resistentes a muchos desinfectantes. Familia Género Especie a vigilar : Rickettsiaceae : Coxiella : C. burnetti ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Fiebre Q. La infección puede ser asintomática en el 50% de los casos, causar cuadros febriles agudos o crónicos. El período de incubación es de días. Fiebre aguda: Puede ser de tres tipos; autolimitada, o asociada con neumonía y/o hepatitis. Este cuadro se pueden complicar con meningitis aséptica y/o encefalitis. También puede complicar un embarazo. Fiebre crónica: Es la forma más seria y produce principalmente endocarditis, infección de prótesis vasculares, osteomielitis, hepatitis y fiebre prolongada. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras: la primera en la fase aguda y la segunda tres a seis semanas después. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar refrigerado entre 4 y 8 C. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS - Serológicas: Titulación de anticuerpos contra C. burnetti en muestras de suero pareado por métodos como: Fijación del complemento, ELISA o Inmunofluorescencia indirecta, siendo este último el de elección. - Detección directa : por Inmunofluorescencia desde tejidos o por PCR. 9

12 CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Las muestras de tejido y sangre deben manipularse de acuerdo al Nivel 3 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004), dado que Coxiella burnetti es altamente infecciosa. Las cepas de Coxiella burnetti constituyen un riesgo moderado para la persona y bajo para la comunidad. Debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de la Clasificación Internacional de Riesgo. ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada. Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente, para lo cual debe utilizar el Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología. 10

13 Vigilancia Laboratorio Coxiella burnetti Negativo Laboratorio Local que realiza la Técnica Positivo Notificar semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada Informe al paciente Informe al MINSAL Laboratorio que NO realizan la Técnica Muestra Negativo Laboratorio de Referencia ISP Positivo Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 11

14 Vigilancia de Laboratorio deescherichia coliproductor de Toxina Shiga STEC Escherichia coliverotoxigénico O157 y otros. JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Escherichia coli verotoxigénico, denominado actualmente Escherichia coli productor de Toxina Shiga (STEC), es considerado un agente emergente que puede causar enfermedad diarreica o brotes epidémicos con complicaciones severas. STEC es agente de vigilancia como patógeno emergente grave, debido a la alta letalidad producida por el cuadro clínico Síndrome Hemolítico Urémico (SHU). DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Escherichia coli es un bacilo gramnegativo, que crece bien en medios de cultivo tradicionales. Familia : Enterobacteriaceae Género : Escherichia Especie a vigilar : E. coli, Categoría Enterohemorrágico (ECEH), denominado E. coli Productor de Toxina Shiga (STEC). Las cepas de E. coli causantes de diarrea o enfermedades entéricas han sido clasificados en 6 categorías: E. coli enteropatógeno (ECEP), E. coli enterohemorrágico (ECEH ó STEC), E. coli enterotoxigénico (ECET), E. coli enteroinvasivo (ECEI), E. coli enteroagregativo (ECEAgg) y E. coli adherencia difusa (ECAD). El prototipo de STEC es el serotipo O157:H7, forma parte de la flora intestinal de animales bovinos, ovinos, porcinos, aves, etc. La infección puede ser por ingesta de alimentos contaminados, principalmente cárneos, lácteos o de persona a persona. ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE La infección por STEC es una zoonosis que puede causar casos esporádicos o brotes de diarrea, Colitis Hemorrágica (CH), Síndrome Hemolítico Urémico (SHU), Púrpura Trombocitopénica Trombótica (PTT). Se estima que alrededor del 10 % de la población pediátrica infectada por STEC desarrolla SHU, cuya mortalidad es de 3 a 5 % en niños menores de 5 años y un alto porcentaje en mayores de 60 años. El cuadro clínico de SHU producido por STEC, se caracteriza inicialmente por diarrea sanguinolenta, de 3 a 4 días de duración, acompañada de dolores abdominales, tenesmo y pujo. Se han descrito alrededor de 50 serogrupos capaces de producir SHU. En nuestro país algunos de los serogrupos identificados de cepas de pacientes con este cuadro clínico son: O157, O26, O55, O6, O111. TIPO DE MUESTRA REQUERIDA Deposición 12

15 PERIODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Ante la sospecha clínica de SHU o presencia de CH, obtener la muestra de deposición para estudio de STEC, lo antes posible (3 4 días), ya que la mayoría de los pacientes excretan el agente por períodos menores a siete días. El paciente no debe estar con tratamiento antimicrobiano. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS La muestra de deposición debe colocarse en un frasco limpio y ser cultivada dentro de las 2 horas de recolección. Si el tiempo entre la recolección de la muestra y la siembra es mayor, poner la deposición en medio de transporte Cary-Blair, a temperatura ambiente. TÉCNICAS UTILIZADAS POR EL LABORATORIO NIVEL LOCAL Realizar coprocultivo para estudio de E. coli a muestras provenientes de pacientes con cuadro clínico SHU o CH. Continuar con serología para los serogrupos de mayor frecuencia: O157, O26, O55, O6, O111 u otros asociados en Chile. Enviar al Laboratorio de Referencia toda cepa de E. coli aislada de SHU o CH independiente del resultado serológico. La patogenicidad de STEC está dada por la toxina Shiga. LABORATORIO DE REFERENCIA Confirmación Bioquímica de especie. Determinación de factores de virulencia por PCR: - Factor adherencia eae, Toxina Shiga Stx1 y Stx2, Enterohemolisina E-Hly Pruebas Serológicas: Somática O y Flagelar H. Biotipificación de cepas O157:H7. Pruebas biológicas para detección de citotoxina (cultivo celular línea Vero). CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El laboratorio debe estar adscrito a un sistema de control de calidad como el Programa de Evaluación Externo de Calidad (PEEC) del Instituto de Salud Pública u otro similar. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Escherichia coli debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) 13

16 ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar 3 cepas al Laboratorio de Referencia de E. coli Diarreogénico, donde se realizará su confirmación. Se deben estudiar todas las cepas de E. coli provenientes de enfermedad tóxico alimentaria, SHU y CH. Enviar las cepas en tubos de agar corriente u otro medio no inhibidor debidamente sellado y rotulado. Transportar a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de bioseguridad para material biológico. Todas las cepas deben venir con el formulario para Formulario para envío de cepas Sección Bacteriología con toda la información solicitada. Con el solo hecho de enviar una cepa, ésta se considera automáticamente notificada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmar, debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 14

17 Vigilancia de Laboratorio Escherichia coli productora de toxina Shiga STEC Muestra Deposición Cuadro : SHU, CH, ETA Cultivo Escherichia coli 3 colonias Negativo Envío al ISP Confirmación Positivo Informe al Laboratorio Local Informe MINSAL Informe Laboratorio Local SHU CH ETA : Síndrome hemolítico urémico : Colitis hemorrágica : Enfermedad transmitida por alimento 15

18 Vigilancia de Laboratorio de Ehrlichia spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La ehrlichiosis es una enfermedad recientemente reconocida en el hombre, las manifestaciones varían desde cuadros muy leves hasta la enfermedad grave que puede ser mortal. Los síntomas suelen ser inespecíficos. El diagnóstico diferencial incluye fiebre de las Montañas Rocosas, enfermedad de Lyme, tularemia y otros cuadros febriles. La vigilancia de este agente permitirá conocer su importancia y controlar su diseminación en Chile. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Ehrlichia spp. Son bacterias gramnegativas, intracelulares obligadas, que infectan y se propagan mas eficientemente dentro de las vacuolas citoplasmáticas especialmente en fagocitos mononucleares y granulocíticos. Por análisis estructural dos distintas formas morfológicas se pueden identificar: core denso y forma reticulada. Familia : Rickettsiaceae Género : Ehrlichia Especies a vigilar : Ehrlichia spp. ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Ehrlichiosis; enfermedad bacteriana febril aguda, con síntomas inespecíficos como fiebre, anorexia, cefalea, náuseas, mialgias y vómitos. El reservorio parece ser la garrapata Rhipicephalus sanguineus, la cual transmite esta bacteria a los perros y eventualmente a los humanos por picaduras. Se puede presentar de tres formas: Ehrlichiosis Humana Monocitotrópica (EMH), el agente causal es E. chaffeensis, y es cuando afecta a los mononucleares. Se han notificado casos en estados meridionales de Estados Unidos. Ehrlichiosis Humana Granulocitotrópica (EGH), el agente causal es E. fagocitofila, en este caso hay hay predilección por los granulocitos. Se han notificado casos en Estados Unidos en estados del medio oeste y noroeste. Ehrlichiosis Sennetsu o fiebre Sennetsu, el agente causal es E. sennetsu. En este cuadro de fiebre es común la linfoadenopatía generalizada. Esta enfermedad se ha presentado en la parte occidental de Japón. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras; la primera en la fase aguda y la segunda tres a seis semanas después. 16

19 CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar refrigeradas entre 4 y 8 C. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Serología: Titulación de anticuerpos contra Ehrlichia en muestras de suero pareadas por el método de Inmunofluorescencia indirecta los que pueden ser provistos comercialmente o a través de laboratorios de salud pública. Moleculares: Reacción en cadena de polimerasa (PCR), el cual es un método rápido y específico que permite identificar el agente etiológico. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Ehrlichia spp debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada. Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente, para lo cual debe utilizar el Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología. 17

20 Vigilancia Laboratorio Ehrlichia spp Negativa Laboratorio Local que realiza la técnica Positiva Notificar semanalmente al ISP informando la técnica utilizada Informe al paciente Informe al MINSAL Laboratorio que no realiza la técnica Muestra Negativa Laboratorio de Referencia Instituto de Salud Pública Positiva Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 18

21 Vigilancia de Laboratorio de Legionella pneumophila JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La infección con Legionella pneumophila produce neumonía bacteriana aguda, que se puede presentar en brotes o episodios aislados, que en ausencia de tratamiento tiene una alta mortalidad. En Chile no se conoce su prevalencia a nivel nacional, por lo cual es motivo de vigilancia. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Bacilo gramnegativo, fastidioso, requiere de cisteína y otros nutrientes para su aislamiento desde muestras clínicas. Familia Genero Especie a vigilar : Legionellaceae : Legionella : L. pneumophila ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Legionella spp produce dos tipos de manifestaciones clínico-epidemiológicas identificadas y diferentes: enfermedad de los legionarios (neumonía) y fiebre de Pontiac ( cuadro febril inespecífico). Ambas se caracterizan por anorexia, malestar general, mialgia, cefalalgia, fiebre, tos seca, dolor abdominal y diarrea. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras; la primera en la fase aguda (primera semana) y la segunda tres a seis semanas después. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar a temperatura entre 4-8 C TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS - Inmunofluorescencia indirecta - Inmunofluorescencia directa - Técnicas de biología molecular CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Legionella pneumophila debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) 19

22 ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada. Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente, para lo cual debe utilizar el Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología. 20

23 Vigilancia de Laboratorio Legionella pneumophila Negativo Laboratorio Local que realiza la Técnica Positivo Notificar semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada Informe al paciente Informe al MINSAL Laboratorio que NO realizan la Técnica Muestra Negativo Laboratorio de Referencia ISP Positivo Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 21

24 Vigilancia de Laboratorio Leptospira de spp CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES (CIE-10) A.27 Leptospirosis AGENTE ETIOLÓGICO Leptospira spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA LABORATORIO La vigilancia de este agente es importante, dado que corresponde a una zoonosis de amplia distribución geográfica, afectando a animales domésticos, silvestres y hombres. La enfermedad puede variar desde un proceso inaparente a uno grave que puede terminar con la muerte del paciente. En Chile la magnitud de esta enfermedad es desconocida, aunque han habido varios brotes diagnosticados, por lo que esta vigilancia activa permitirá tener un real conocimiento de ella, lo cual permite una mejor planificación de prevención y control De acuerdo al actual Reglamento de Notificación de Enfermedades Transmisibles de Declaración Obligatoria los laboratorios clínicos o bancos de sangre, públicos y privados, estarán obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública, en formularios en que debe quedar registrada la siguiente información: Identificación del paciente, tipo de muestra, procedencia (ver ficha adjunta). DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Clasificación: Orden: Spirochaetales. Familia : Leptospiraceae. Género : Leptospira. Especie: L. Interrogans. (Patógena) y L.biflexa (Saprófita) Serovariedades existen más de 200. Serogrupos existen alrededor de 23. Morfología: Microorganismo aeróbico obligatorio, de gran movilidad debido a un axostilo, de forma helicoidal, con una o ambas extremidades curvas, en forma de gancho. A diferencia de otras espiroquetas patógenas, se cultiva fácilmente en medios artificiales. El periodo de sobrevida de las leptospiras patógenas en agua varía según temperatura, ph, salinidad y grado de polución. La multiplicación óptima es a ph Experimentalmente se ha constatado la persistencia de leptospiras viables en agua hasta por 180 días. 22

25 ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE Leptospirosis La mayor parte de las personas infectadas cursan con un cuadro clínico benigno y moderado. Las manifestaciones clínicas son variables y con diferentes grados de severidad, la enfermedad subclínica o inaparente es más frecuente en zonas endémicas. La enfermedad se caracteriza por dos fases: La bacterémica (leptospirémica), que dura 7-10 días y que se presenta como cuadro febril tipo influenza y la leptospirúrica, que en un alto porcentaje tiene meningitis aséptica, que dura desde 1 semana a varios meses. Se distinguen dos tipos clínicos: el ictérico y el anictérico. El primero corresponde a la forma clásica o enfermedad de Weil que es la forma menos frecuente y más severa y que se relaciona con la variedad icterohemorragiae. La gravedad de la patología depende, en parte, de la variedad serológica infectante. La tasa de letalidad es baja, pero aumenta con la edad, alcanzando a un 20% en los pacientes con ictericia y falla renal que no hayan sido tratados adecuadamente, incluso con diálisis renal. La muerte se debe a falla hepatorrenal, hemorragia, síndrome de disfunción respiratoria del adulto o arritmias por miocarditis. TIPO DE MUESTRAS REQUERIDOS Las muestras apropiadas para un diagnóstico rápido son: Sangre en cantidad de 5 cc. Suero en cantidad de 1 a 2 cc. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Durante la primera semana de la enfermedad (fase leptospirémica) la espiroqueta se pesquisa en sangre y LCR por medio del cultivo y también por examen directo. Durante este período no hay anticuerpos circulantes detectables por las pruebas serológicas de rutina, pero es importante una serología basal, para posterior pareamiento serológico para una correcta interpretación de los resultados. En la segunda semana, del 8º-10º día post-infección (fase leptospirúrica) ya se pueden detectar los anticuerpos específicos. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA La muestra se debe conservar y transportar refrigerada a temperatura de 4-8 C. Recipiente primario: Tubo plástico con tapa rosca o tapón de goma. En ningún caso se aceptarán tubos o frascos tapados con algodón. Recipiente secundario: Recipiente metálico o plástico que debe contener material absorbente en cantidad suficiente para absorber todo el líquido o contenido biológico de la muestra en caso de fuga desde el recipiente primario. Envoltura externa: Protege al recipiente secundario de las influencias exteriores durante el transporte. 23

26 Identificación: En la parte externa del recipiente secundario debe adherirse el formulario u orden de examen indicando claramente la identificación del paciente y de la muestra. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL Puede realizar la técnica Elisa IgM o algún test rápido LABORATORIO DE REFERENCIA Técnica Elisa IgM Confirmación por la técnica de Microaglutinación MAT (estudio de serovar infectante) CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Leptospira spp debe manipularse de acuerdo al nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4º ED. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que obtengan exámenes con resultados positivos para leptospirosis están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar muestra de suero al Laboratorio de Referencia de Espiroquetas, donde se realizará la confirmación. Todas las muestras deben enviarse con el formulario Envío de muestras: sospecha de Leptospirosis a la Sección Espiroquetas con toda la información solicitada. En aquéllos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la muestra a confirmación, debe necesariamente notificarse con el/los exámenes realizado/s considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. Si la confirmación se realiza en un laboratorio local, igualmente debe notificarse al Instituto de Salud Pública completando toda la información del formulario, sin enviar la muestra. 24

27 Algoritmo Diagnóstico Leptospira spp Laboratorio Local * MUESTRA Suero de Paciente con Cuadro Clínico Compatible con Leptospirosis Positivo Estudio en Laboratorio Local Negativo Notificación examen Positivo, Adjunto muestra para estudio de serovar Laboratorio de Referencia Nacional de Leptospiras ISP Se informa ** Nota * : Si no hay capacidad diagnóstica en Laboratorio local, se envía al ISP Nota ** : Si el cuadro clínico es altamente sospechoso el examen debe ser repetido 2 semanas después 25

28 Vigilancia de Laboratorio de Listeria monocytogenes JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Es importante la vigilancia de este agente, dada su capacidad de producir brotes asociados a alimentos y por el aumento de aislamientos a partir de cuadros invasivos como sepsis de embarazadas y en recién nacidos, meningitis en neonatos y también en adultos con algún grado de inmunosupresión DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Es un cocobacilo pequeño grampositivo, B-hemolítico, catalasa positivo, crece bien en agar con sangre de cordero al 5% en atmósfera de 3-5% de CO 2. Género Especie a vigilar : Listeria : L.monocytogenes (aislados de cuadros invasivos) ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Principalmente cuadros invasivos en menores, embarazadas y adultos inmunodeprimidos. De éstos, los más frecuentes son meningitis y septicemias. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Líquido cefaloraquídeo, sangre y otros líquidos o muestras provenientes de cavidades estériles. PERÍODO OPTIMO DE TOMA DE MUESTRA La muestras deben ser tomadas según las indicaciones específicas descritas para cada una de ellas, lo antes posible, en forma aséptica, en períodos de alza febril y previo tratamiento antimicrobiano. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Las muestras deben enviadas al Laboratorio de acuerdo a los procedimientos definidos en el Manual de Toma de Muestras. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Laboratorio Local Cultivo e identificación bioquímica Laboratorio de Referencia -Confirmación bioquímica -Serotipificación 26

29 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El laboratorio local debe estar adscrito a algún Programa de Control de Calidad, ya sea este el PEEC u otro similar. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Listeria monocytogenes debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) ENVIO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente en enfermedad invasora están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia, en donde se realizará su confirmación y estudio serológico. El envío de estas cepas, se hará en tubos de agar sangre con cultivo fresco o en medio de transporte (Amies) debidamente sellado, rotulado y a temperatura ambiente. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Todas las cepas deben enviarse con el Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología con toda la información solicitada. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación, debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 27

30 Vigilancia Laboratorio de Listeria monocytogenes Laboratorio Local Muestra cuadro invasivo Liesteria monocytogenes Envío al Instituto de Salud Publica de Chile Confirmación y Serotipificación Informe al MINSAL Informe al Laboratorio Local 28

31 Vigilancia de Laboratorio de Salmonella spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA LABORATORIO La salmonelosis es una de las principales causas de enfermedades transmitidas por alimentos. La detección y control de los brotes es complicada por el hecho de que existen más de 2000 serotipos diferentes de Salmonella, tanto las especies que causan infecciones gastrointestinales como las que producen fiebres entéricas son objeto de vigilancia. La caracterización y tipificación definitiva de los aislamientos es de utilidad en el estudio epidemiológico para identificar tendencias, detectar brotes, fuentes de infección e implementar medidas de control. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Bacilo Gram negativo, oxidasa negativa, crece bien en medios corrientes a 35ºC a las horas de incubación en ambiente aerobio. Familia : Enterobacteriaceae Género : Salmonella Especies a vigilar : Salmonella spp. La especie enterica esta compuesta de 6 subespecies: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indica. La mayoría de los serotipos que afectan al hombre se encuentran en la subespecie enterica (Ejemplo: Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium). Las que causan fiebres entéricas son: S.Typhi, S.Paratyphi A y B ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE La salmonelosis es una enfermedad que comúnmente se manifiesta por enterocolitis aguda de comienzo repentino, que incluye cefalalgia, dolor abdominal, diarrea, nauseas y vómitos. La deshidratación especialmente en lactantes y ancianos puede ser grave. La infección puede comenzar como una enterocolitis aguda y transformarse en una fiebre intestinal con septicemia o infección focal. A veces el agente infeccioso se localiza en cualquier tejido del cuerpo produciendo abscesos y causando artritis séptica, colecistitis, endocarditis, meningitis, pericarditis, neumonía, piodermia o pielonefritis. TIPOS DE MUESTRA REQUERIDAS Las muestras clínicas apropiadas para el diagnóstico son: Principalmente deposiciones y dependiendo del sitio de infección: sangre, heridas, orina, otras. PERIODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Lo antes posible una vez que se sospeche de la infección, durante la etapa aguda (generalmente entre 5 a 7 días) y previo al tratamiento antimicrobiano. 29

32 CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Deposiciones: muestra fresca debe procesarse idealmente durante los primeros 30 minutos después de obtenida, de lo contrario usar medio de transporte (Ej. Cary Blair), el que se conserva a 4ºC hasta procesar la muestra lo antes posible para lograr una mayor recuperación del patógeno. Para otro tipo de muestras remitirse al manual de procedimientos. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL - Aislamiento del agente, identificación bioquímica y serotipificación dependiendo de la complejidad del laboratorio. LABORATORIO DE REFERENCIA - Confirmación bioquímica. - Tipificación serológica: Determinación de antígenos somáticos y flagelares. - Fagotipificación - Técnicas moleculares: Reacción de polimerasa en cadena (PCR), electroforesis de campo pulsado para subtipificación en caso de brotes. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Salmonella spp debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de Enterobacterias (cepas obtenidas de aislamientos de cualquier sitio anatómico y de cualquier patología, una por cada paciente, privilegiando aquellas de enfermedad invasora), en donde se realizará su confirmación y estudio serológico. Los aislamientos deben mantenerse en agar nutritivo o agar TSI, estos mismos medios pueden usarse para su envío al Laboratorio de Referencia. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Todas las cepas deben enviarse utilizando el Formulario para envío de cepas Sección Bacteriología con toda la información solicitada. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación, debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 30

33 Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Salmonella spp Laboratorio Local Diagnóstico Presuntivo Salmonella spp. Envío Resultado Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío una cepa por paciente al Laboratorio de Referencia Informes periódicos al MINSAL Confirmación Bioquímica y Estudio Serológico NO Confirmación SI Informe Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 31

34 Vigilancia de Laboratorio de Shigella spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Shigella spp. es un importante agente de diarreas principalmente en niños, debido a su baja dosis infectante se transmite fácilmente. La vigilancia de laboratorio permite determinar la prevalencia de las distintas especies y es de utilidad en el estudio de brotes. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Bacilo Gram negativo, oxidasa negativa, crece bien en medios corrientes a 35ºC a las horas de incubación en ambiente aerobio. Familia : Enterobacteriaceae Género : Shigella Especies a vigilar : S. dysenteriae S. flexneri S. boydii S. sonnei ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Causante de shigelosis, infección bacteriana aguda que afecta el intestino grueso y la porción distal del intestino delgado y se caracteriza por diarrea acompañada de fiebre, náuseas y a veces toxemia, vómito, cólicos y tenesmo. En los casos típicos las deposiciones contienen sangre y mucus (disentería), sin embargo muchos casos tienen como cuadro inicial el de diarrea acuosa. La bacteriemia es rara. Es una enfermedad grave cuando hay disentería y su complicación más importante es la deshidratación. TIPOS DE MUESTRA REQUERIDAS Principalmente deposiciones u otras dependiendo del sitio de infección (secreción vaginal en niñas u otra) PERIODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Lo antes posible una vez que se sospeche de la infección, durante la etapa aguda (generalmente entre 5 a 7 días) y previo al tratamiento antimicrobiano. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Deposiciones: muestra fresca debe procesarse idealmente durante los primeros 30 minutos después de obtenida, de lo contrario usar medio de transporte (Ej. Cary Blair), el que se convserva a 4ºC hasta procesar la muestra lo antes posible para lograr una mayor recuperación del patógeno. Se debe tener presente que Shigella es sensible a temperaturas elevadas, por lo tanto es muy importante la refrigeración de las muestras. 32

35 TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL: - Aislamiento del agente, identificación bioquímica y serotipificación dependiendo de la complejidad del laboratorio. LABORATORIO DE REFERENCIA: - Confirmación bioquímica - Biotipificación de S.flexneri - Tipificación serológica: Determinación de serotipo. - Técnicas moleculares: Reacción de polimerasa en cadena (PCR), electroforesis de campo pulsado para estudio de brotes. - Se envia al Laboratorio de Susceptibilidad de ISP para la vigilancia de la resistencia. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Shigella spp debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de Enterobacterias, (una por cada paciente) en donde se realizará su confirmación y estudio serológico. Para aquellos laboratorios que aíslen más de 10 cepas de Shigella semanales deben enviar una de cada cinco, excepto en casos de brotes. La notificación debe hacerse del total de cepas identificadas en el periodo considerando los mismos antecedentes solicitados en el formulario de envío de cepas. Las cepas deben mantenerse en agar nutritivo o agar TSI, estos mismos medios pueden usarse para su envío al Laboratorio de Referencia, la encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Todas las cepas deben enviarse con el Formulario para Envío de cepas de la Sección Bacteriología con toda la información solicitada. 33

36 Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Shigella spp Laboratorio Local Diagnóstico Presuntivo Shigella spp. Envío Resultado de Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío una cepa por Paciente, o 1/5 de las cepas si el laboratorio clínico recibe más de 10 muestras por semana al Laboratorio de Referencia Informes periódicos al MINSAL Confirmación Bioquímica y Estudio Serológico NO Confirmación SI Informe Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 34

37 Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus agalactiae JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA El Streptococcuss agalactiae es el principal agente etiológico de infección invasora en el recién nacido : sepsis y meningitis, por lo cual es motivo de vigilancia de laboratorio. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Cocaceas gram-positivas, facultativas, dispuestas en cadenas, beta hemolíticas. Familia Genero Especie a vigilar : Streptococcaceae : Streptococcus : Streptococcus agalactiae (aislados de cuadros invasivos) ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE En el recién nacido: sepsis, meningitis, pneumonia. En mujeres embarazadas: infección urinaria, amnionitis y esterilidad. En pacientes inmunocomprometidos o con enfermedades crónicas: endocarditis e infecciones de tejidos blandos, cirrosis, diabetes, cáncer, SIDA. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS LCR, sangre, líquido pleural, líquido articular. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Ante sospecha clínica y antes del tratamiento antimicrobiano. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LA MUESTRAS La muestra debe ser procesada de inmediato, de lo contrario utilizar medio de transporte; Stuart, Amies, tórula seca en sílica. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS - Cultivo - Serología CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Streptococcus agalactiae debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) 35

38 ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos, públicos y privados en que identifiquen este agente desde sepsis y meningitis, estarán obligados a enviar la cepa al Instituto de Salud Pública mediante formularios provistos por esta institución. Estas deben venir en tubo de agar sangre con cultivo fresco (18-24 horas) o en medio de transporte, a temperatura ambiente. Todas las cepas deben enviarse con el Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología con toda la información solicitada. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación, debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 36

39 Vigilancia de Laboratorio Streptococcus agalactiae Laboratorio Local Muestras Líquidos estériles Identificación Presuntiva Streptococcus agalactiae Envío de cepa al Laboratorio de Referencia para su confirmación Informe al Laboratorio Local Informe MINSAL 37

40 Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus pneumoniae JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La neumonía neumocócica es causa importante de muerte en lactantes y ancianos. Es importante conocer la prevalencia de S. pneumoniae a nivel nacional en cuadros invasivos como meningitis, septicemia, etc. Se vigila solamente la enfermedad invasora. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Diplococo grampositivo, alfa hemolítico, crece bien en agar sangre a 35 C en una atmósfera de CO 2 al 5%. Familia Género Especie a vigilar : Streptococcaceae : Streptococcus : S. pneumoniae (cuadros invasivos) ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Neumonía típica, meningitis bacteriana, bacteremia, otitis, conjuntivitis, etc. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Secreciones del tracto respiratorio inferior LCR Sangre Secreción ótica u otras cavidades estériles PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Al momento de sospechar la enfermedad y antes del tratamiento antimicrobiano CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Enviar las muestras inmediatamente al laboratorio a temperatura ambiente. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS - Cultivo e identificación - Susceptibilidad a antimicrobiana - Serotipificación por técnica de Quellung CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. 38

41 CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Streptococcus pneumoniae debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) ENVÍO A LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente en enfermedad invasora están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia, en donde se realizará su confirmación y estudio serológico y estudios de susceptibilidad. El envío de estas cepas, se hará en tubos de agar sangre con cultivo fresco o en medio de transporte (Amies) debidamente sellado, rotulado y a temperatura ambiente. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Todas las cepas deben enviarse con el Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología con toda la información solicitada. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación, debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 39

42 Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Streptococcus pneumoniae Laboratorio Local Muestra Cuadros Invasivos Diagnóstico Streptococcus pneumoniae Envío datos de Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío Cepa al Laboratorio de Referencia ISP, para su Confirmación Informes periódicos al MINSAL Informe laboratorio Local Informe MINSAL 40

43 VIGILANCIA DE LABORATORIO DE Streptococcus pyogenes JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA El incremento en estos últimos años de infecciones piógenas severas causadas por este agente y dada la alta mortalidad asociada, hace necesaria una vigilancia de laboratorio a nivel nacional. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Cocaceas gram-positivas, facultativas, dispuestas en cadenas, colonias beta hemolíticas. Familia Genero Especie a vigilar : Streptococcaceae : Streptococcus : Streptococcus pyogenes (aislados de cuadros invasivos) ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Infecciones piógenas complicadas por insuficiencia renal, coagulación intravascular diseminada (CID), síndrome de distress respiratorio en el adulto, necrosis de tejidos blandos. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS LCR, sangre, líquido pleural, líquido articular, punción de absceso. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Ante sospecha clínica y antes del tratamiento antimicrobiano. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS La muestra debe ser procesada de inmediato, de lo contrario utilizar medio de transporte: Stuart, Amies, tórula seca en sílica. TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS - Cultivo - Serología CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Streptococcus pyogenes debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4 Ed. 2004) 41