LCDNICYT COMIÓN NÇION&L DE INVES11GACIóN CENTFICA Y TECNOLÓC,YA

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1 LCDNICYT COMIÓN NÇION&L DE INVES11GACIóN CENTFICA Y TECNOLÓC,YA r GOBIERNO DE COMISION NACIONAL DE INVESTIGACION CIENCIA Y TECNOLOGIA VERSION OFICIAL FECHA: 30/03/20 10 PROYECTO REGULAR N 10 T0248 INVESTIGADOR RESPONSI BLE: VERONICA ALEJANDRA PALMA ALVARADO FONDO NACIONAL 1 E DESARROLLO CIENTIF ZO Y TECNOLOGICO (FONDECYT) Be iarda Morín 551, Providencia - cas la 297-y, 21 Telefono: FAX informes. fondecytq conicyt.cl

2 INFORME FINAL PROYECTO FONDECYT REGULAR N PROYECTO: DURACIÓN: 3 años AÑO ETAPA: 2009 TÍTULO PROYECTO: UNA BUSQUEDA SISTEMATICA DE DIANAS PARA SHH/GLI EN EL GENOMA DE VERTEBRADOS: IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE GENES INVOLUCRADOS EN EL CONTROL DE LA PROLIFERACION DE CELULAS MADRE (NSCS) DEL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL. DISCIPLINA PRiNCIPAL: BIOLOGIA MOLECULAR GRUPO DE ESTUDIO: BIOLOGIA 3 INVESTIGADOR(A) RESPONSABLE: VERONICA ALEJANDRA PALMA ALVARADO DIRECCIÓN : Las Palmeras 3425, Edificio Milenio, 3er piso COMUNA: Ñuñoa CIUDAD : REGIÓN: METROPOLITANA FONO : vpalma@uchile.cl INFORME OBJETIVOS Cumplimiento de los Objetivos planteados en el Proyecto. Recuerde que los objetivos del proyecto no se refieren a listar actividades desarrolladas no a los objetivos desarrollados N OBJETIVOS CUMPLIMIENTO FUNDAMENTO Obtener nuevos blancos/diana directos de la TOTAL vía de señalización Shh/Gli y demostrar una conservación evolutiva de los pobles tios de unión Caracterizar la regulación que ejerce Shh/Gli TOTAL en genes diana de interés Describir el efecto de Shh en los procesos TOTAL regulados por ciertos genes candidatos con particular interés estudiar en la proliferación de NSCs y precursores neuronales embrionarios.

3 4 4. Estudiar la poble conservación de la red NO Lamentablemente no fue poble concretar la regulatoria Shh/Gli en relación con el control del vita de la Dra. Sanchez (colaboradora ciclo celular en NSPs adultas de la SVZ. internacional proyecto N ). Siendo clla la experta para los experimentos de inhibición génica mediante RNA interferente in vivo (inyecciones esterotáxicas) e in vitro (infecciones virales en NSP adultas), el cumplimiento de este último objetivo requería necesariamente de una estadia de ella en laboratorio de IR seguido de un viaje de intercambio de estudiantes. La IR vitó a la Dra Sanchez durante el 2009 y se elaboró un nuevo proyecto de colaboración que se encuentra adjudicado por lo que la investigación se realizará durante los años 2010/2011 con fondos españoles (Programa de Cooperación Interunivertaria e Investigación Cientifica entre España e Iberoamérica, PCI-N A/023963/09). Otro(s) aspecto(s) que Ud. condere importante(s) en la evaluación del cumplimiento de objetivos planteados en la propuesta original o en las modificaciones autorizadas por los Consejos. Los hallazgos obtenidos durante el presente proyecto han permitido avanzar sustancialmente en el cumplimiento de los objetivos 1 a 3 pero al mismo tiempo han llevado a plantearse preguntas y lineas de investigación nuevas. Se iniciaron colaboraciones con los I)octorcs B. Wainwright (Institute for Molecular Bioscience, Univerty of Queensland, Australia) y J. Olson (Fred Hutchinson Cancer Centcr, Univerty of Washington, USA), conocidos mundialmente por sus estudios sobre la relación de la vía de señalización de Hedgehog(HH)/Oli con el cáncer. Esto motivó un cambio en el colaborador internacional (Dr Wainwright por Dra Sanchez) autorizado por el consejo Fondccyt y permitió viajes de intercambio que se traducen en la generación de un manuscrito a ser enviado durante el 1cr semestre del 2010.

4 La auto-renovación celular es resultante de una integración del control proliferativo con la mantención de un estado no diferenciado y se encuentra regulada por una interacción dinámica entre factores de transcripción, control epigenético y señales extrínsecas, tales como Wnt, Sonic Hedgehog (Shh), TGFc, y factor de crecimiento fibroblástico (FGF). en el microambiente o "nicho" en que reden las células troncales y progenitoras del stema nervioso (NSCs, del inglés neural stem celis). Shh regula la proliferación de las NSCs y una desregulación de esta vía de señalización ha do relacionada con el crecimiento tumoral. Este proyecto comprendió el estudio de las funciones de los componentes efectores de la vía de señalización Sonic hedgehog (Shh), los factores de transcripción Gli, en los procesos de neurogénes durante el desarrollo del Sistema Nervioso Central (SNC). Para ello, se realizó una búsqueda a gran escala en el genoma de vertebrados identificando más de 500 nuevos genes dianas putativos para los factores Gli. Algunos de los genes candidatos, obtenidos por el uso combinado de diferentes metodologías genómicas, se verificaron funcionalmente en cuanto a su relación con Shh, entregando antecedentes insospechados acerca de nuevos nuevas funciones atribuibles esta vía de señalización. Estas funciones no se relacionan únicamente con el desarrollo del Sistema Nervioso Central (SNC), no que también con la formación de diversos órganos y procesos celulares vitales en el estado adulto. Nuestros hallazgos permiten entender como la señalización dependiente de ShhlGli es interpretada y como puede modular el comportamiento neuronal, en particular los procesos de proliferación y auto- renovación de las células troncales del SNC en formación. Por otro lado, en particular nuestros resultados obtenidos con el gen neogeninal en cuanto a su función clave en el desarrollo del cerebelo y su implicancia en un cáncer cerebelar (meduloblastoma) permiten apoyar la hipótes propuesta recientemente de que existe una relación entre plasticidad morfológica en el cerebro y cáncer cerebral manifestada últimamente por la alteración de la expreón de los genes diana clave para el control de la proliferación celular. En este sentido, nuestro estudio proveerá luces tanto en lo que se refiere a la biología báca como a futuras aplicaciones clínicas (generación de nuevas pobles dianas moleculares para la terapéutica de tumores). Este trabajo por tanto resulta fundacional para nuevos estudios, tanto en nuestro laboratorio como en colaboraciones, y en la comunidad científica en general.

5 PRODUCTOS ARTÍCULOS Para trabajos en Prensa! Aceptados/Enviados adjunte copia de carta de aceptación o de recepción. N : 1 Autor (a)(es/as) : Bergeron, S.;Milla, L.; Villegas, R.; Shen, M.; Burgess, S.; Allende, M.; Karlstrom, R.; Palma, V. Nombre Completo de la Revista : Genomics Título (Idioma original) : Exprcson profiling identifies novel Hh/Gli regulated genes in developing zebrafish embryos. Indexación : ISI ISSN Año : 2008 Vol. : 91 N : 2 : Estado de la publicación a la fecha : Publicada Otras Fuentes de financiamiento, las hay Mecesup NIH Fondecyt 1CM P ` Archivo Asociado al artículo : Paper_LMilla.pdf /8526/ OTRAS PUBLICACIONES Sin información ingresada. CONGRESOS Autor (a)(es/as) : Milla, L.; Ilodar, C.; Burgess S.; Cambiazo, V. Palma, V. Título (Idioma originali Identification of new direct Sonic Hcdgehog(Shh)/Gli targets obtained by a novel reverse-one-hybrid geni:nic approach Nombre del Congreso XXIII Reunión Anual Sociedad Biología Celular de Chile Ciudad: Pucón Fecha Inicio : 01/11/2009 Fecha Término : 05111/2009 Año:

6 Archivo Asociado: Pucon_poster_CGC_colab.pdf http.:'vaicvt.conicyt.cl/infomic acadernico/index.php/investigador!f4 congresosldescarga'l i : 2 Autor (a)(es/as) : Milla, L.; Oñate, M.; Palma, V. Titulo (Idioma original) : Neogenin 1: A new key player in thc Sonic Hedgehog (Shh)/Gli network in the developing vertebrate Central Nervous System (CNS). Nombre del Congreso : XXIII Reunión Anual Sociedad Biología Celular de Chile pucón Fecha Inicio : 01/11/2009 Fecha Término : 05/11/2009 Año N : Resumen_Pucon-M0_09.pdf hup.icaicyt.conicyt.cliinforme_acadrnico/it1de.php/iflvcstigador/f4 congresos'descargall / / N : 3 Autor (a)(es/as) : Lois, P.; Martínez, C.; Cornejo, V.; Palma, V. Título (Idioma original) : Enhanced midbrain neurogenes in three-dimenonal cultures of neurospheres: a functional study with Sonic Hedgehog(Shh) Nombre del Congreso : Simpoo Internacional sobre Investigación en Células Madre. ARGENTINA Buenos Aires Fecha Inicio : 12/11/2009 Fecha Término: 14/11/2009 Año: no Resumen_B.A._PL.pdf hitp: ; /evaicyl.conicyt.cl/inforrne_acadeflh!coiié1dcx.php/lilvcstigador/f4 congresos/descarga' / /2009/10101 N : 4 Autor (a)(es/as) : Milla, L.; Oñate, M.; Cortés, C.; Palma, V.

7 Título (Idioma original) : Thc multi-functional receptor Neogenini: A new key player in the Sonic Hedgehog (Shh)/Gli network in the embryonic vertebrate brain. Nombre del Congreso : Simpoo Internacional sobre Investigación en Células Madre. ARGENTINA Buenos Aires Fecha Inicio : 12111/2009 Fecha Término : 14/ Año: N : : Archivo Asociado: RcsumenBA-VP_09.pdf / /2009/10104/ 5 Autor (a)(es/as) : Martínez, C.; Solís, N.; Cáceres, M.; Bono, MR.; Rodríguez, J.P.; Smith, P.; Palma, V. Título (Idioma original) : Nombre del Congreso : ARGENTINA Buenos Aires Fecha Inicio : 12/11/2009 Fecha Término: 14/11/2009 Año Shh regulates human periodontal ligament stem ccli proliferation mpoo Internacional sobre Investigación en Células Madre. Resumen_B.A.,CM.pdf hitp://evalcyt.conicyt.cl.'inforrne acadernico/index.php"investigador/f4 congresos/descarga/i /2009/10105.' Autor (a)(es/as) : Cortés, C.; Milla, L.; Palma, V. 6 Título (Idioma original): "SONIC HEDGEEIOG (SHH) REGULATES C-MYC EXPRESSION IN THE DEVELOPING BRAIN: DIRECT OR INDIRECT LINK 9" Nombre del Congreso : 68th Annual Meeting of Society for Developmental Biology ESTADOS UNIDOS DE AMERICA San Francisco Fecha Inicio : 22/07/2009 Fecha Término : 27/07/2009 Año:

8 N : Archivo Asociado: CC_SnFco_09.pdf http. calcytconicyt.cl/inforne ueadernico/indcx.php!investigador/í4 congresos/descurgail / /2009/ Autor (a)(es/as) : Martínez, C.; Smith, P.; Palma, V. Título (Idioma original) : Nombre del Congreso: FRANCIA St. Jean Cap Ferrat Fecha Inicio : 27/03/2010 Fecha Término : 3 1/03/2010 Año N : Sonic Hcdgehog (Shh) regulates human periodontal ligament steni ceil (HPI.SC) proliferation EMBO Workshop. Hcdgehog Signaling: From developmental biology to anti-cancer drugs EMB02010abstract-VP.pdf htip.'i'alcvi.coiicyl.cl.'iníorrnc aedenio/tndex,phpiinvcigador!f4_congresos'descarga' ,2009I01 14' N : 8 Autor (a)(es/as) : Reinchi, G.; Gonzalez, A.; Palma, V. Título (Idioma original) : Sonic Hedgehog (SHH) modulates EGFR-Dependent proliferation in a subpopulation of neural stem cells during mouse cmbryogenes Nombre del Congreso : 7th Annual Mecting of International Soctety for Stem Cdl Research Pais: ESPANA Barcelona Fecha Inicio : 08/07/2009 Fecha Término : 11/07/2009 Año abstractfinalgrü7ø9publ icado.pdf http : //e\a lçy t.conlcyt cl,infornic acadel ico/inde.php/inveigador'f4_cor1grcsos'dcscargaí / N : 9 Autor (a)(es/as) : Martínez, C.; Lois, P.; Cornejo, V.H.; Palma, V.

9 Título (Idioma original) : Sonic Hedgehog/Gli gnaling controis differentiation of neural progenitor cells of thc dorsal murine mesencephalon (tectum) in three-dimenonal collagen cultures Nombre del Congreso: The EMBO Meeting 2009 HOLANDA Ciudad: Amsterdam Fecha Inicio : 29/08/2009 Fecha Término : 01/09/2009 Año Archivo Asociado: EMBO_2009_meeting_VP.pdf IIiIp/evLlcyt.conicyt.cI/inforn1e acadernico/index.php/investigador/f4congresos/descarga' /2009/ Autor (a)(es/as) : Martínez, C.; Lois, P.; Cornejo, V. H.; Palma, V. Título (Idioma original) : La vía de señalización Sonic Hedgehog Shh/Gli modula la diferenciación de células neuroprogenitoras del mesencéfalo dorsal murino en cultivos celulares tridimenonales Nombre del Congreso : IV congreso de la asociación de estudiantes de biología de Chile Ciudad: Fecha Inicio : 20/08/2009 Fecha Término: 22/08/2009 Año ponencia_aebch_victorcomejoø8ø9.pdf huip:.iealcy1.conicyt.cl/infornic academicoiindc php/invesligador/f4_congrcsosídescargail / ,2009/ Autor (a)(es/as) Título (Idioma original) Nombre del Congreso País Ciudad Fecha Inicio Fecha Término Año: II Martínez, C. Solis, N.; Cáceres, M.; Rodríguez, ip.; Smith, P.; Palma, V. Shh regula la proliferación de células troncales del ligamento periodontal XXII Reunión Anual International Assoeiation for Dental Research IADR Divión Chile 22/10/ /10/2009

10 Formulario-Resumen-IADR-2.pdf hitp:eiticyiconicytcl/infornie acadcmico/indexphp'tnvcstigztdor/f4 congresodescargaíl / /2009/10734 TESIS/MEMORIAS N : 1 Título de Tes : Búsqueda de genes regulados directamente por la vía de señalización Shh/Gli: Relación con procesos del desarrollo embrionario Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : LUIS Milla Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) : Dra. Verónica Palma Título Grado : Institución : Ciudad: Estado de Tes : Terminada Fecha Inicio : 01/03/2007 Fecha Término : 25/03/2009 tes lmilla.pdf Doctorado Univerdad de Chile - Facultad de Medicina htip:f/evaicyi.conicyi.ciintdme academico.'index.php/inveigador."f4 tes memorlasdcscarga/'i / / N : 2 Título de Tes : Estudio de la función de la via de señalización Shh/Gli en los procesos de proliferación y diferenciación de células del ligamento periodontal humano Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Constanza Martínez Nombre y Apellidos dcl(de la) Tutor(a) : Constanza Martínez Título Grado : Institución : Doctorado Univerdad de Chile - Facultad de Ciencias santiago Estado de Tes : En Ejecución Fecha Inicio : 02/ Fecha Término: Archivo Asociado: RESUMEN TESIS CONSTANZA.pdf hitp:i!cvaicyi.conicvtclinforrneacadcmico.'isdexphp!investigador/t4 tes rnenioriadescarga/l / / Título de Tes : Mecanismos epigenéticos y crecimiento amétrico en el desarrollo y evolución del esqueleto apendicular de las aves. Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Joao Botehlo Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) : Dra. Verónica Palma Título Grado: Doctorado

11 Institución : Estado de Tes : En Ejecución Fecha Inicio : 03/08/2009 Fecha Término tesjoao.pdf Univerdad de Chile - Facultad de Ciencias hnp;;/evalcyi,conicyt,ct/informeacademico/indexphp/investigador/f4_tes niernorias/descargail / ; N : 4 Título de Tes : Determinación de la relación existente entre la vía de señalización de Sonic hedgehog (Shh)/Gli y el gen relacionado con ciclo celular c-myc. Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Claudio Cortés Rodríguez Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) : Título Grado : Institución : Dra Verónica Palma Magister Estado de Tes : En Ejecución Fecha Inicio : 01/ Fecha Término no tes_cc.pdf Univerdad de Chile - Facultad de Ciencias hitp:!/evaicyi,conicyi.ci/inforne academico/index.phprinveigador!f4 tes memorias/descarga/l / /2009/5471' 5 Título de Tes : Apoptos iniciada por el factor de dependencia Ptcl. Implicancia funcional in vivo en la formación de la médula espinal en la embriogénes. Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Pablo Lois Silva Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) : Dra. Verónica Palma Título Grado : Institución : Magister I'aís : Estado de Tes : En Ejecución Fecha Inicio : 01/04/2008 Fecha Término: no tespl.pdf univerdad de Chile - Facultad de Ciencias littp:"evalcyt,conicyicl/infonne academco/indexphpinsestigador/f4 tes mernorias/descargaíl / /2009/5472/ N : 6 Título de Tes : Caracterización funcional de la interacción entre neogeninal y la vía de señalización de Sonic Fledgehog en el proceso de neurogénes en la vía retinotectal del pez cebra Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Maritza Oñate

12 Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) Título Grado Institución Dra Verónica Palma Pregrado univerdad de Chile - Facultad de Ciencias País Ciudad Estado de Tes En Ejecución Fecha Inicio 03/08/2009 Fecha Término Envía documento en papel tes maritza o.pdf http: evaicyt.conicyt.ci/intrme academico/index.phpiiiivestigador/f4 tes meniorias!descarga/ / ! ANEXOS JBC_SubmisonGRetal.pdf acadernico/index.php/investigador/f5 anexos/descarga/ / /2009/9359.' 2 Paper_BiolRes.pdf acadcinico'index.php;'investigador/fs anexos/descarga!l / !2009/9360/ 3 Sonic_HedgehogjShh)Glignaling_controls_neuraprogenitor_ce1l_d1viSI0n_inJhe_deVelOPtng_tCCl http.".ev,tleyt.conicytci/inforrne academico/index.php/inestigador/f5 anexos/descarga/ ' ,2009,9638/ A continuación se detallan los anexos fícos/papel que no se incluyen en el tnforrne en formato PDF.