HERRAMIENTAS PARA LA CORRECTA IDENTIFICACIÓN DEL GUSANO DE LA MAZORCA Helicoverpa armigera (HÜBNER)
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- Lucas Iglesias Castillo
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1 HERRAMIENTAS PARA LA CORRECTA IDENTIFICACIÓN DEL GUSANO DE LA MAZORCA Helicoverpa armigera (HÜBNER) 07 de octubre de 2015
2 Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Reconocimiento morfológico de larvas y adultos de Helicoverpa armígera (Hübner) comparando con especies parecidas Morfología externa Técnica de extracción y montaje de genital Identificación mediante técnicas moleculares
3 MORFOLOGÍA DE LARVA DE LEPIDOPTERA Francisco Urra L. SAG
4 MORFOLOGÍA DE LARVA DE LEPIDOPTERA Cuerpo dividido en tres regiones : Cabeza, Tórax y Abdomen Cabeza: stemmata, palpos labiales, mandíbulas, antena, quetotaxia. - Tórax: escudo protorácico, patas, espiráculo, setas primarias y secundarias, quetotaxia. - Abdomen: propatas, espiráculos, setas primarias y secundarias, quetotaxia.
5 CABEZA T1 T2 T3 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 cabeza T1 T2 A3 o 4 A9 A10
6 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
7 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
8 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
9 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
10 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
11 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
12 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
13 CABEZA sutura epicraneal stemmata (no ocelos) antena mandíbulas espinerete quetotaxia
14 TÓRAX T1 T2 T3 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 cabeza Francisco Urra L. SAG
15 TÓRAX escudo protorácico patas espiráculo setas primarias y secundarias quetotaxia T1 T2-3
16 TÓRAX escudo protorácico patas espiráculo setas primarias y secundarias quetotaxia T1 T2-3
17 TÓRAX escudo protorácico patas (3 pares) espiráculo setas primarias y secundarias quetotaxia T1 T2-3
18 TÓRAX escudo protorácico patas espiráculo (T1) setas primarias y secundarias quetotaxia T1 T2-3
19 TÓRAX escudo protorácico patas espiráculo setas primarias y secundarias quetotaxia T1 T2-3
20 TÓRAX escudo protorácico patas espiráculo setas primarias y secundarias quetotaxia (mapa setal) D = dorsal SD = subdorsal L = lateral SV = subventral V = ventral
21 ABDOMEN T1 T2 T3 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 head T1 T2 A3 or4 A9 A10
22 ABDOMEN espiráculos (segmentos A1-8) propatas setas primarias y secundarias quetotaxia escudo anal
23 ABDOMEN espiráculos propatas (segmentos A3-6, A10) setas primarias y secundarias quetotaxia escudo anal Crochets Planta
24 ABDOMEN Crochets círculos, bandas, fila
25 ABDOMEN Propatas en segmentos A3-6, A10.
26 ABDOMEN Propatas en menos segmentos Propatas en A5, A6, A10 Noctuidae: Plusiinae Propatas en A6, A10 Geometridae
27 ABDOMEN espiráculos propatas setas primarias y secundarias quetotaxia escudo anal
28 ABDOMEN Setas primarias Noctuidae Geometridae Tortricidae
29 ABDOMEN Setas secundarias Erebidae (Arctiinae) Erebidae (Lymantriinae) Lasiocampidae
30 ABDOMEN espiráculos propatas setas primarias y secundarias quetotaxia (mapa setal) escudo anal Francisco Urra L. SAG
31 ABDOMEN espiráculos propatas setas primarias y secundarias quetotaxia (mapa setal) escudo anal D = dorsal SD = subdorsal L = lateral SV = subventral V = ventral
32 ABDOMEN espiráculos propatas setas primarias y secundarias quetotaxia escudo anal
33 Reconocimiento morfológico de larvas Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) La cabeza y el escudo protorácico café, llega a medir hasta mm en el último instar larval
34 Gusano bellotero Heliothis virescens (Fabricius) Largo retináculo en la mandíbula. Pinácula dorsal en A1, A2, y A8 cubierta con microespinas.
35 H. armigera. Pinácula dorsal en A1, A2, y A8 cubierta sin microespinas. Y mandíbula sin retináculo. Gusano bellotero Heliothis virescens (Fabricius) Helicoverpa armigera (Hübner)
36 Gusano bellotero Heliothis virescens (Fabricius) Mandíbula Helicoverpa armigera Heliothis virescens Helicoverpa armigera Heliothis virescens
37 Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) Octavo segmento abdominal Sutura epicraneal. Y invertida
38 Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) Helicoverpa armigera (Hübner)
39 Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) Helicoverpa armigera Spodoptera frugiperda
40 Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
41 Helicoverpa armigera Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
42 Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie) Setas D de A1-8 inserta en gran chalazas cónica, los de A1, A2 o A8 menudo más grande que el resto Color del cuerpo muy variable, pero por lo general con líneas. La mandíbula presenta unos diente diminutos en el nervio interior y no hay retináculo. No hay caracteres morfológicos consistentes que pueden ser utilizados para separar las larvas de H. armigera y H. zea.
43 Pupa Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Mide de 14 a 22 mm de largo y 4.5 a 6.5 mm de ancho. Además presenta dos espinas paralelas en el extremo posterior. Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
44 Adulto Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) (A) Helicoverpa armigera (B) Heliothis virescens
45 Adulto Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
46 Adulto Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
47 Adulto Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
48 Adulto Gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
49 Adulto Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie)
50 Genital Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie) Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
51 Abdomen Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Gusano elotero Helicoverpa zea (Boddie) Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
52 Edeago Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Helicoverpa zea (Boddie) Helicoverpa armigera (Hübner) Helicoverpa zea (Boddie) Helicoverpa zea (Boddie) Helicoverpa armigera (Hübner) Helicoverpa armigera (Hübner)
53 TÉCNICA DE EXTRACCIÓN Y MONTAJE DE GENITAL Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
54 TÉCNICA DE EXTRACCIÓN Y MONTAJE DE GENITAL Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
55 TÉCNICA DE EXTRACCIÓN Y MONTAJE DE GENITAL Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) La técnica extracción de genitalia de palomillas empleada es con base en el Manual de Procedimientos del laboratorio de Entomología y Acarología del CNRF, misma que se ajusta a la utilizada por Gilligan y Epstein, Consiste en observar bajo microscopio estereoscópico la muestra (placa con palomillas) seleccionar las palomillas a procesar y con la ayuda de pinzas entomológicas retirar únicamente el abdomen de los especímenes. En caso de que el abdomen presente residuos de pegamento, colocarlo en una caja de porcelana y agregar tres gotas de gasolina blanca, con la ayuda de un pincel se remueve el pegamento. Colocar el abdomen en un tubo de ensayo, agregar un mililitro de KOH al 40% y mantenerlo en baño maría por 15 minutos. Vaciar el contenido en una cápsula de porcelana, observar bajo microscopio estereoscópico y con la ayuda de agujas entomológicas retirar la genitalia. Realizar un lavado con agua destilada y posteriormente con alcohol al 96%. Consecutivamente en un vidrio de reloj colocar dos gotas de aceite de clavo y dejar reposar la genitalia por 10 minutos. Por último, realizar el montaje en bálsamo de Canadá.
56 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Muestras recibidas. Métodos de extracción de ADN. CTAB Williams
57 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Etapas básicas para Extracción de ADN
58 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA. Conocida como PCR, es una técnica de biología molecular desarrollada en 1987 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo.
59 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES PROCESO DE PCR DESNATURALIZACIÓN Que las dos cadenas de ADN se separen y para esto se eleva la temperatura. ANILLAMIENTO Permitir que los cebadores se unan por complementariedad al DNA molde; mediante un descenso de la temperatura. Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Qué se ha obtenido tras un ciclo de PCR? Únicamente una copia de un fragmento del ADN molde EXTENSIÓN La enzima polimerasa incorpora nucleótidos complementarios.
60 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) COMPONENTES DE LA PCR ADN Taq polimerasa (sintético) Cebadores o primers (sintéticos) Nucleótidos libres Estos cuatro componentes son los elementos básicos que es necesario incorporar a la reacción para que se complete una PCR.
61 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) 94 C C C
62 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner)
63 IDENTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Gusano de la mazorca Helicoverpa armigera (Hübner) Área de extracción Área de PCR
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67 GRACIAS!! Biól. Nallely Acevedo Reyes
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