N Antisera to Human Immunoglobulins (IgG, IgA and IgM)

Transcripción

1 N Antisera to Human Immunoglobulins (, IgA and IgM) Intended Use In vitro diagnostic reagents for the quantitative determination of immunoglobulins (, IgA and IgM) in human serum as well as of in human urine and cerebrospinal fluid (CSF) using the BN* Systems. Summary and Explanation Immunoglobulins are formed by plasma cells as a humoral immune response to contact of the immune system with antigens. The primary reaction after the initial contact is the formation of antibodies of the IgM class followed later by and also IgA antibodies. Quantitative determination of the immunoglobulins can provide important information on the humoral immune status. Decreased serum immunoglobulin concentrations occur in primary immunodeficiency conditions (1, 2) as well as in secondary immune insufficiencies (3), e.g. in advanced malignant tumours, lymphatic leukaemia, multiple myeloma and Waldenstrom s disease. Increased serum immunoglobulinconcentrations occur due to polyclonal or oligoclonal Ig proliferation, e.g. in hepatic diseases (hepatitis, liver cirrhosis), acute and chronic infections, autoimmune diseases as well as in the cord blood of neonates with intra-uterine and perinatal infections (4, 5). Monoclonal immunoglobulin proliferations in the serum are found e.g. in plasmacytomas, Waldenstrom s disease and heavy-chain disease (6). Monoclonal immunoglobulinaemia requires detailed differential diagnostic investigations in addition to the quantitative determination. Local immune reactions result in elevated immunoglobulin levels, particularly, in the cerebrospinal fluid (7). Elevated urinary concentrations of are found in patients with non-selective glomerular proteinuria (8). Principle of the Method In an immunochemical reaction, the proteins contained in the human serum, urine or CSF sample form immune complexes with specific antibodies. These complexes scatter a beam of light passed through the sample. The intensity of the scattered light is proportional to the concentration of the relevant protein in the sample. The result is evaluated by comparison with a standard of known concentration. Reagents Materials provided N Antiserum to Human, Code No. OSAS or N Antiserum to Human IgA, Code No. OSAR or N Antiserum to Human IgM, Code No. OSAT 1 vial each, containing 5 ml or 2 ml Composition N Antisera are liquid animal sera and are produced by immunization of rabbits with highly purified human immunoglobulin (, IgA or IgM). Labile components are removed from the antisera by a special procedure. Microbial contamination is essentially excluded by filtration and addition of sodium azide as a preservative (< 1 g/l). After solid phase immunoadsorption, the purified, specific antisera are specially tested and adjusted such that optimal suitability for use on the BN* Systems is guaranteed. The antibody titers (T) are determined by radial immunodiffusion and are printed on the vial labels. The titers indicate the quantity of antigen in mg which will be precipitated in an agarose gel by 1 ml of the corresponding antiserum. Warnings and Precautions 1. For in vitro diagnostic use. 2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution: Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodium azide can form explosive azides when contacting heavy metals such as copper or lead. Preparation of Reagents The N Antisera are ready-for-use as supplied and require no additional preparation. Storage and Stability Shelf life at +2 to +8 C: see expiration date given on the label; Stability once opened: four weeks if stored at +2 to +8 C securely capped immediately after each use and contamination (e.g., by microorganisms) is precluded; During storage, N Antisera can develop precipitates or turbidity which are not caused by microbial contamination and which do not affect their activity. In such cases, the antiserum should be filtered prior to use. Disposable filters with a pore size of 0.45 µm are suitable for this purpose. Do not freeze. On-board stability: five days at 8 hours each or a comparable period of time (maximum 40 hours); BN* II System: on-board stability may be extended by the use of BN* II Evaporation Stoppers (Code No. OVLE) as given in the Instruction Manual; BN ProSpec** System: on-board stability as given in the Instruction Manual. Materials required but not provided BN* System N Protein Standard SL (human), Code No. OQIM N/T Protein Control SL/L, M and H (human), Code Nos. OQIN, OQIO and OQIP N/T Protein Control LC (human), Code No. OQLW N Reaction Buffer, Code No. OUMS N Diluent, Code No. OUMT N Supplementary Reagent/Precipitation, Code No. OUMU BN* II Evaporation Stoppers (optional), Code No. OVLE Other materials and supplies as described in the respective BN* System Instruction Manual. Specimens Suitable samples are human serum, as fresh as possible (stored no more than 8 days at +2 to +8 C) or stored deep-frozen. Fresh human urine and CSF samples are also suitable. Serum samples can be stored at below -20 C for up to 1 year if they are frozen within 24 hours after collection and if repeated freeze-thaw cycles are avoided. The serum samples must be completely coagulated and, after centrifugation, must not contain any particles or traces of fibrin. Lipemic samples or frozen samples which became turbid after thawing must be clarified by centrifugation (10 minutes at approximately 15,000 x g) prior to testing. Random and timed urine collections are suitable specimens for testing in urine. Urine samples must not be frozen. Each urine and CSF sample must be centrifuged prior to testing. Procedure Notes 1. Consult your BN* System Instruction Manual for details regarding operation of the instrument. 2. The reagents must not be used beyond the expiry date. 3. Allow reagents and samples to equilibrate to room temperature (+15 to +25 C) before use on the BN* A/BN* 100 System. This equilibration step is not required prior to testing on the BN* II or BN ProSpec** System. Assay Protocols for BN* Systems The assay protocols are given in the Instruction Manual and software of the instrument. All steps are performed automatically by the system. Establishment of the Reference Curve Reference curves are constructed by multi-point calibration. Serial dilutions of N Protein Standard SL are automatically prepared by the instrument using N Diluent. The reference curves can be used for as long as the accuracy controls, e.g. N/T Protein Control SL/ L, M and H or N/T Protein Control LC are reproduced within their respective confidence intervals. If a different lot of antiserum is used, a new reference curve must be recorded. Assay of Specimens Serum samples are automatically diluted 1:400 (), 1:20 (IgA, IgM) or 1:5 in the sensitive assay protocols (IgA, IgM) with N Diluent and measured. in urine or CSF is measured from undiluted samples using separate assay protocols. OSAR G09 C0540 (414) H 1 Edition January 2002 If the readings obtained are outside the measuring range, the assay can be repeated using a higher or lower dilution of the sample ( in the serum assay protocol). Refer to BN* System s Instruction Manual for information on repeat measurements using other dilutions. Internal Quality Control Assay N/T Protein Controls SL/L, M and H after each establishment of a reference curve, the first opening of an antiserum vial as well as with each run of serum samples. For the determination of in urine or CSF samples the N/T Protein Control LC should be used. The controls are assayed and evaluated as for patient samples. The assigned values and confidence intervals are listed in the Table of Assigned Values of the respective control. Results The results are evaluated automatically by means of a logit-log function. Limitations of the Procedure Turbidity and particles in the sample may interfere with the determination. Therefore, samples containing particles must be centrifuged prior to testing. Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples, the results obtained for control samples and interlaboratory survey samples may differ depending on the assay method used. It may therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific target values. Expected Values The following reference intervals apply for serum samples from healthy adults (9): Protein 2.5 th th Percentile g/l IgA g/l IgM g/l Reference interval for in urine samples: in second morning urine below 9.6 mg/l according to (8); value recalculated with reference to protein reference preparation CRM 470. Reference interval for in CSF samples: in the CSF below 34 mg/l according to (10); value recalculated with reference to protein reference preparation CRM 470. Nevertheless, each laboratory should determine its own reference intervals since values may vary depending on the population studied. Specific Performance Characteristics Sensitivity and Measuring Range The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends therefore upon the concentrations of the proteins in the N Protein Standard SL. Typical measuring ranges are given in the BN* System s Instruction Manual. Specificity N Antisera are specific for the respective protein. Precision The following coefficients of variation (CV) were obtained with N Antisera to Human Immunoglobulins on the BN* System: Intra-Assay Inter-Assay Protein Mean Value CV Mean Value CV [g/l] [%] [g/l] [%] IgA IgM Method Comparison One hundred (100) serum samples were assayed with N Antisera to Human Immunoglobulins on the BN* System (y) and radial immunodiffusion (x) (NOR Partigen***). Correlation of the results yielded the following data: Protein Passing Bablok Regression (11) Coefficient of Correlation y (BN*) = 1.09 x (RID) g/l 0.97 IgA y (BN*) = 0.99 x (RID) g/l 0.99 IgM y (BN*) = 1.08 x (RID) g/l 0.99 Note The values cited for specific performance characteristics of the test represent typical results and are not to be regarded as specifications for the N Antisera to Human, IgA and IgM. Bibliography 1.Bläker F. Defektimmunopathien. Internist (Berl) 1984; 25: Webster ADB. Laboratory investigation of primary deficiency of the lymphoid system. Clinics Immunology and Allergy 1985; 5: Pinching AJ. Laboratory investigation of secondary immunodeficiency. Clinics Immunology and Allergy 1985; 5: Fateh-Moghadam A. Der Bayrische Internist 1982; IV: 1. 5.Rosanelli K. Present diagnostic value of IgM determination in newborns. Med Lab Suppl/I 1984; Kyle RA, Greipp PR. The laboratory investigation of monoclonal gammopathies. Mayo Clin Proc 1978; 53: Reiber H. Liquorprotein-Analytik zur Diagnose neurologischer Erkrankungen. Mitt Dt Ges Klin Chem 1984; 15: Hofmann W, Guder WG. A diagnostic programme for quantitative analysis of proteinuria. J Clin Chem Clin Biochem 1989; 27: Dati F, Schumann G, Thomas L, et al. Consensus of a group of professional societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). International Federation of Clinical Chemistry. Community Bureau of Reference of the Commission of the European Communities. College of American Pathologists. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996; 34: Felgenhauer K. Laboratory diagnosis of neurological diseases. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: Passing H, Bablok W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part I. J Clin Chem Clin Biochem 1983; 21: * BN is a trademark of in the USA. ** BN ProSpec is a registered trademark of in Germany and other countries and is a trademark of in the USA. *** Partigen is a registered trademark of in Germany and other countries. USA Distributor: Dade Behring Inc. Newark, DE U.S.A.

2 N Antisera gegen Human- Immunglobuline (, IgA und IgM) Anwendungsbereich In-vitro-Diagnostica zur quantitativen Bestimmung von Immunglobulinen (, IgA und IgM) in Humanserum sowie von in humanem Urin und Liquor mit den BN* Systemen. Diagnostische Bedeutung Immunglobuline werden von Plasmazellen als humorale Immunantwort auf einen Kontakt des Immunsystems mit Antigenen gebildet. Bei Erstkontakt werden als Primärreaktion zunächst Antikörper der Klasse IgM erzeugt, denen die Bildung von - und auch IgA-Antikörpern folgt. Die quantitative Bestimmung der Immunglobuline kann wichtige Hinweise auf den humoralen Immunstatus liefern. Erniedrigte Immunglobulinkonzentrationen im Serum treten bei primären Immunmangelzuständen (1, 2) sowie bei sekundären Immuninsuffizienzen (3) auf, z. B. bei fortgeschrittenen malignen Tumoren, lymphatischer Leukämie, multiplem Myelom und Morbus Waldenström. Erhöhte Immunglobulinkonzentrationen im Serum treten aufgrund polyklonaler oder oligoklonaler Ig-Vermehrung bei z. B. Lebererkrankungen (Hepatitiden, Leberzirrhose), akuten und chronischen Infektionen, Autoimmunerkrankungen sowie bei Neugeborenen im Nabelschnurblut bei intrauterinen und perinatalen Infektionen auf (4, 5). Monoklonale Immunglobulinvermehrungen im Serum werden z. B. bei Plasmozytomen, Morbus Waldenström und Schwerketten Erkrankungen gefunden (6). Bei Vorliegen einer monoklonalen Immunglobulinämie sind zusätzlich zur quantitativen Bestimmung eingehende differentialdiagnostische Untersuchungen notwendig. Bei lokalen Immunrektionen resultieren im Liquor ebenfalls erhöhte Werte der Immunglobuline, insbesondere von (7). Erhöhte Konzentrationen von im Urin findet man bei nicht selektiver glomerulärer Proteinurie (8). Prinzip der Methode Die im menschlichen Serum, Urin oder Liquor enthaltenen Proteine bilden in einer immunchemischen Reaktion mit spezifischen Antikörpern Immunkomplexe, an denen eingestrahltes Licht gestreut wird. Die Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweiligen Proteins in der Probe. Die Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standard bekannter Konzentration. Reagenzien Inhalt der Handelspackung N Antiserum gegen Human-, Bestell-Nr. OSAS oder N Antiserum gegen Human-IgA, Bestell-Nr. OSAR oder N Antiserum gegen Human-IgM, Bestell-Nr. OSAT je 1 Flasche mit 5 ml oder 2 ml Zusammensetzung Die N Antisera sind flüssige, tierische Sera und werden durch Immunisierung von Kaninchen mit hochgereinigten humanen Immunglobulinen (, IgA bzw. IgM) hergestellt. Durch ein besonderes Stabilisierungsverfahren werden labile Bestandteile aus den Antisera entfernt. Mikrobielle Verunreinigungen werden durch Filtration und den Zusatz von Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel weitgehend ausgeschlossen. Die mittels Festphasenimmunadsorption gereinigten, spezifischen Antisera werden nach besonderer Prüfung so eingestellt, daß eine optimale Eignung für die Verwendung in den BN* Systemen gewährleistet ist. Die Antikörper-Titer (T) werden in der radialen Immundiffusion ermittelt und sind auf den Flaschenetiketten ausgedruckt. Sie geben an, wieviel mg des Antigens von 1 ml des jeweiligen Antiserums in einem Agarosegel präzipitiert werden. Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen 1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung. 2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostica ist zu beachten: Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kann mit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden. Vorbereitung der Reagenzien Die N Antisera sind gebrauchsfertig und können ohne weitere Vorbehandlung eingesetzt werden. Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Lagerungsdauer bei +2 bis +8 C: die Haltbarkeit ist auf dem Etikett angegeben; Stabilität nach Öffnen: 4 Wochen, sofern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 C gelagert und eine Kontamination (z. B. durch Mikroorganismen) vermieden wird; N Antisera können bei Lagerung Ausflockungen oder Trübungen zeigen, die nicht durch mikrobielle Kontamination verursacht sind und die die Aktivität in keiner Weise beeinträchtigen. In solchen Fällen sollten die Antisera vor Gebrauch filtriert werden. Dazu eignen sich Einwegfilter mit einem Porendurchmesser von 0,45 µm. Die Reagenzien dürfen nicht eingefroren werden. Stabilität auf den BN* Systemen: 5 Tage mit jeweils 8 Stunden, oder ein vergleichbarer Zeitraum (maximal 40 Stunden); BN* II System: die erweiterte Stabilität der Reagenzien bei Verwendung von BN* II Evaporation Stoppers (Bestell-Nr. OVLE) ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen; BN ProSpec** System: die Stabilität der Reagenzien ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen. Zusätzlich benötigte Materialien BN* System N Protein-Standard-SL (human), Bestell-Nr. OQIM N/T Protein-Kontrolle SL/L (human), M und H, Bestell-Nr. OQIN, OQIO und OQIP N/T Protein-Kontrolle LC (human), Bestell-Nr. OQLW N Reaktionspuffer, Bestell-Nr. OUMS N Diluens, Bestell-Nr. OUMT N Zusatzreagenz/Präzipitation, Bestell-Nr. OUMU BN* II Evaporation Stoppers (wahlweise), Bestell-Nr. OVLE Verbrauchsmaterial und Ausrüstung wie in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben. Untersuchungsmaterial Zur Messung sollen möglichst frische (max. 8 Tage bei +2 bis +8 C aufbewahrte) oder tiefgefroren gelagerte humane Serumproben sowie frische Urin- oder Liquorproben eingesetzt werden. Werden Serumproben innerhalb von 24 Stunden nach Entnahme tiefgefroren, so ist eine Lagerung unterhalb -20 C bis zu 1 Jahr möglich, wenn wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermieden wird. Die Serumproben sollten vollständig geronnen sein und nach Zentrifugation keine Partikel oder Spuren von Fibrin enthalten. Lipämische Proben oder eingefrorene Proben, die nach dem Auftauen trüb sind, müssen vor der Bestimmung durch Zentrifugation (10 min bei ca x g) geklärt werden. Für die Bestimmung von im Urin eignen sich Spontan- und Sammelurine. Urinproben dürfen nicht tiefgefroren werden. Jede Urin- und Liquorprobe ist vor der Analyse zu zentrifugieren. Testdurchführung Hinweise 1. Einzelheiten zur Bedienung der BN* Systeme sind der entsprechenden Bedienungsanleitung zu entnehmen. 2. Die Reagenzien dürfen nach dem angegebenen Verfalldatum nicht mehr verwendet werden. 3. Reagenzien und Proben sollen vor der Messung am BN* A/BN* 100 System Raumtemperatur (+15 bis +25 C) erreicht haben. Am BN* II/BN ProSpec** System können auch bei +2 bis +8 C gelagerte Reagenzien und Proben direkt zur Bestimmung eingesetzt werden. Assay-Protokolle an den BN* Systemen Die Assay-Protokolle sind in der Bedienungsanleitung sowie der Software des jeweiligen Gerätes enthalten. Alle Schritte werden automatisch vom System durchgeführt. Erstellung der Referenzkurve Referenzkurven werden über eine Mehrpunktkalibrierung aufgenommen. Für die Erstellung werden automatisch Verdünnungsreihen des N Protein-Standard SL mit N Diluens hergestellt. Die Referenzkurven können so lange verwendet werden, wie Richtigkeitskontrollen, z. B. N/T Protein-Kontrolle SL/L, M und H oder N/T Protein-Kontrolle LC innerhalb der jeweiligen Vertrauensbereiche wiedergefunden werden. Bei Verwendung einer anderen Antiserum-Charge muß eine neue Referenzkurve aufgenommen werden. Messung der Patientenproben Serumproben werden automatisch 1 : 400 () bzw. 1 : 20 (IgA, IgM) oder, im sensitiven Assay- Protokoll (IgA, IgM), 1 : 5 mit N Diluens verdünnt und gemessen. in Urin- oder Liquorproben wird aus unverdünnten Proben, jeweils in einem separaten Assay-Protokoll bestimmt. Bei Meßwerten, die außerhalb des Meßbereichs liegen, kann die Messung aus einer höheren oder niedrigeren Probenverdünnung ( im Serum-Assay-Protokoll) wiederholt werden. Wiederholungsmessungen aus weiteren Probenverdünnungen sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben. Interne Qualitätskontrolle Die N/T Protein-Kontrollen SL/L, M und H sollten nach jeder Erstellung einer Referenzkurve, nach erstmaligem Öffnen einer Antiserumabfüllung sowie bei jeder Serie von Serumproben eingesetzt werden. Bei der Bestimmung von im Urin oder Liquor sollte die N/T Protein-Kontrolle LC analog eingesetzt werden. Die Kontrollen werden im Ansatz und bei der Auswertung wie Patientenproben behandelt. Die Sollwerte und Vertrauensbereiche sind der Tabelle der Sollwerte der entsprechenden Kontrolle zu entnehmen. Berechnung der Analysenergebnisse Die Auswertung erfolgt automatisch mittels einer Logit-Log-Funktion. Einschränkungen der Testdurchführung Trübungen und Partikel in den Proben können die Bestimmungen stören. Deshalb sollten Proben, die Partikel enthalten, vor der Bestimmung zentrifugiert werden. Für Kontroll- und Ringversuchsproben können aufgrund der technischen Herstellung bzw. gealterter Proben unterschiedliche Ergebnisse in Abhängigkeit von der verwendeten Bestimmungsmethode resultieren. Es kann daher notwendig sein, die Bewertung dieser Ergebnisse an methodenspezifischen Zielwerten vorzunehmen. Erwartete Werte Für Serumproben gesunder erwachsener Probanden gelten folgende Referenzbereiche (9): Protein 2, ,5. Perzentile Referenzbereich für im Urin: im zweiten Morgenurin unterhalb 9,6 mg/l nach (8); Wert korrigiert unter Bezug auf die Referenzpräparation CRM 470. Referenzbereich für im Liquor: im Liquor unterhalb 34 mg/l nach (10); Wert korrigiert unter Bezug auf die Referenzpräparation CRM 470. Darüber hinaus sollte jedes Labor seine eigenen Referenzbereiche ermitteln, da diese vielen Einflußgrößen unterliegen, die für jedes untersuchte Kollektiv verschieden sein können. Leistungsmerkmale der Teste Empfindlichkeit und Meßbereich Die Empfindlichkeit der Bestimmung wird durch die untere Grenze der Referenzkurve festgelegt und hängt damit von den Konzentrationen der Proteine im N Protein-Standard SL ab. Typische Meßbereiche sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme angegeben. Spezifität Die N Antisera sind spezifisch für das jeweilige Protein. Präzision Mit den N Antisera gegen die Human-Immunglobuline wurden am BN* System folgende Variationskoeffizienten (VK) ermittelt: Intra-Assay Inter-Assay Protein Mittelwert VK Mittelwert VK [g/l] [%] [g/l] [%] 13,5 2,1 13,2 2,7 Methodenvergleich Es wurden 100 Serumproben mit den N Antisera gegen die Human-Immunglobuline am BN* System (y) gemessen und vergleichend dazu mit der radialen Immundiffusion (x) (NOR-Partigen***) bestimmt. Die Korrelation der Ergebnisse lieferte folgende Daten: Protein Passing Bablok- Regression (11) Korrelationskoeffizient y (BN*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/l 0,97 IgA y (BN*) = 0,99 x (RID) +0,06 g/l 0,99 IgM y (BN*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/l 0,99 Anmerkung Die angegebenen Werte für die Leistungsmerkmale der Teste stellen typische Ergebnisse dar und sind nicht als Spezifikation für die N Antisera gegen Human, IgA und IgM anzusehen. Literatur Siehe Seite 1. * BN ist ein Warenzeichen der in den USA. ** BN ProSpec ist ein eingetragenes Warenzeichen der in Deutschland und anderen Ländern und ist ein Warenzeichen der in den USA. *** Partigen ist ein eingetragenes Warenzeichen der in Deutschland und anderen Ländern. OSAR G09 C0540 (414) H 2 Ausgabe Januar 2002

3 N Antisérums antiimmunoglobulines humaines (, IgA et IgM) Domaine d'utilisation Réactifs pour le dosage des immunoglobulines (, IgA ou IgM) dans le sérum humain, ainsi que des dans l urine humaine et le LCR humain, à l aide des systèmes BN*. Intérêt diagnostique Les immunoglobulines sont synthétisées par les cellules plasmatiques comme réponse immunitaire humorale à un contact du système immunitaire avec des antigènes. En cas de premier contact, on assiste tout d'abord comme primoréaction à la formation d'anticorps de la classe des IgM, puis à celle des anticorps et IgA. Le dosage des immunoglobulines peut apporter des éléments importants pour l'évaluation du statut immunitaire humoral. On observe une diminution de la concentration sérique des immunoglobulines dans les états d'insuffisance immunitaire primaires (1, 2), ainsi que dans les insuffisances immunitaires secondaires (3), par ex. en cas de tumeur maligne avancée, de leucémie lymphatique, de myélome multiple ou encore de maladie de Waldenström. Les concentrations augmentées d'immunoglobulines dans le sérum sont dues à une multiplication oligoclonale ou polyclonale des Ig, comme par ex. dans les maladies du foie (hépatites, cirrhose du foie), les infections aiguës ou chroniques, les maladies autoimmunes, ainsi que les infections intrautérines et périnatales dans le sang du cordon chez les nouveau-nés (4, 5). La multiplication monoclonale des immunoglobulines dans le sérum est observée par ex. dans les plasmocytomes, la maladie de Waldenström et les affections des chaînes lourdes (6). En cas d'immunoglobulinémie monoclonale, les dosages quantitatifs doivent être accompagnés d'autres tests permettant un diagnostic différentiel. Les réactions immunitaires locales entraînent dans le LCR également des valeurs augmentées des immunoglobulines, en particulier des (7). On trouve des concentrations d' dans l'urine augmentées en cas de protéinurie glomérulaire non sélective (8). Principe de la méthode Les protéines contenues dans le sérum, l urine ou le LCR humain forment, dans le cadre d une réaction immunochimique avec des anticorps spécifiques, des immuncomplexes qui dispersent la lumière projetée. L intensité de la lumière dispersée est fonction de la concentration dans l échantillon de la protéine recherchée. L exploitation se fait par rapport à un standard de concentration connue. Réactifs Conditionnements : N Antisérum anti- humaine, code OSAS ou N Antisérum anti-iga humaine, code OSAR ou N Antisérum anti-igm humaine, code OSAT 1 flacon de 5 ml ou de 2 ml Composition : Les N Antisérums sont des sérums liquides, d origine animale, obtenus par immunisation de lapins avec des immunoglobulines humaines hautement purifiées (, IgA ou IgM). Un procédé spécial de stabilisation permet d'éliminer les éléments labiles des antisérums. Une filtration ainsi que l addition d azide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur excluent pratiquement toute contamination microbienne. Les antisérums spécifiques, purifiés par immunoadsorption en phase solide, sont préparés de façon à garantir des propriétés optimales pour leur utilisation sur les systèmes BN*. Le titre d'anticorps (T), déterminé par immunodiffusion radiale, est imprimé sur l'étiquette du flacon. Il indique le nombre de mg d'antigène précipités par 1 ml d'antisérum dans un gel d'agarose. Avertissements et mesures de précaution 1. A n'utiliser que pour un usage in vitro. 2. Les réactifs contenant de l'azide de sodium doivent être manipulés avec précaution : Ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses. L'azide de sodium peut devenir explosif au contact de métaux lourds comme le cuivre ou le plomb. Préparation des réactifs Les N Antisérums sont prêts à l'emploi et peuvent être utilisés sans aucun prétraitement. Stabilités et conditions de conservation Conservation à +2/+8 C : La date de péremption est indiquée sur l étiquette. Stabilité après ouverture : 4 semaines, à condition de bien refermer les flacons immédiatement après emploi, de les replacer à +2/+8 C, et d éviter toute contamination (par ex. microbienne). Les N Antisérums peuvent devenir troubles ou présenter une floculation, phénomènes qui n indiquent pas une contamination microbienne et qui n influencent en aucune façon leur activité. Dans ces cas-là, les filtrer à l aide d un filtre à usage unique à pores de 0,45 µm de diamètre. Ne pas les congeler. Stabilité sur les systèmes BN* : 5 jours à raison de 8 heures par jour, ou durée équivalente (maximum 40 heures). BN* II : l utilisation de bouchons anti-évaporation (code OVLE) permet d allonger la stabilité des réactifs ; se reporter au manuel d utilisation du système. BN ProSpec** : pour la stabilité des réactifs, se reporter au manuel d utilisation du système. Autres réactifs et matériel nécessaires Système BN* N Standard Protéines SL (humain), code OQIM N/T Contrôle Protéines SL/L,M,H (humain), codes OQIN, OQIO et OQIP N/T Contrôle Protéines LC (humain), code OQLW N Tampon de réaction, code OUMS N Diluant, code OUMT N Réactif complémentaire/précipitation, code OUMU Bouchons anti-évaporation pour BN* II, code OVLE (utilisation facultative) Consommables et matériels complémentaires nécessaires selon les manuels d utilisation des systèmes BN*. Echantillons à tester Utiliser de préférence des échantillons sériques, urinaires ou de LCR humains frais (conservés 8 jours maximum à +2/+8 C). Les échantillons sériques peuvent être conservés à au moins -20 C à condition de les congeler dans les 24 heures qui suivent leur prélèvement ; ils se conservent alors 1 an ; ne les congeler qu une seule fois. Les échantillons sériques doivent être totalement coagulés et ne plus contenir aucune particule ni trace de fibrine après centrifugation. Les sérums lipémiques ou devenus troubles après décongélation doivent être clarifiés par centrifugation (10 min à env g) avant utilisation. Pour le dosage des dans l urine, utiliser des urines spontanées, ou de 24 heures. Ne pas congeler les urines. Centrifuger chaque échantillon urinaire ou de LCR avant leur dosage. Réalisation du test Remarques : 1. Pour plus de détails concernant l utilisation des systèmes BN*, se reporter au manuel d utilisation de l appareil. 2. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption. 3. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25 C) avant leur analyse sur le système BN* A ou BN* 100. Sur le système BN* II ou BN ProSpec**, ils peuvent être testés directement à +2/+8 C. Protocoles du test sur les systèmes BN* : Les protocoles sont indiqués dans le manuel d utilisation et la dernière version du logiciel de chaque appareil. Toutes les étapes sont effectuées automatiquement par le système. Etablissement de la courbe d étalonnage : La courbe d'étalonnage est effectuée selon un étalonnage en plusieurs points. La série de dilutions du N Standard protéines SL est établie automatiquement avec le N Diluant. Les courbes d'étalonnage peuvent être utilisées tant que les contrôles d'exactitude, par ex. le N/T Contrôle Protéines SL/L, M et H ou le N/T Contrôle Protéines LC sont trouvés à l'intérieur de leur domaine de confiance. Refaire une nouvelle courbe d étalonnage à chaque changement de lot de l antisérum. Mesure des échantillons de patients : Les échantillons sériques sont dilués automatiquement avec le N Diluant au 1/400 () ou au 1/20 (IgA, IgM), ou au 1/5 dans le cadre du protocole pédiatrique (IgA, IgM), puis mesurés. Dans les protocoles urinaires et de LCR pour le dosage des, les échantillons sont mesurés non dilués selon un protocole séparé. Si des valeurs sortent du domaine de mesure ( dans le protocole sérique), les échantillons peuvent être retestés à une dilution plus basse ou plus élevée. Le protocole pour retester les échantillons à une dilution différente est décrit dans les manuels d utilisation des systèmes BN*. Contrôle de qualité interne Tester les N/T Contrôles Protéines SL/M, M et H à chaque changement de courbe d étalonnage ou de flacon d antisérum, ainsi qu à chaque nouvelle série d échantillons sériques. Pour le dosage des dans l urine ou le LCR, tester le N/T Contrôle Protéines LC. Traiter les contrôles comme des échantillons de patients, aussi bien dans le test que pour l exploitation des résultats. Les valeurs théoriques ainsi que les domaines de confiance sont indiqués dans le tableau des valeurs théoriques de chaque contrôle. Calcul des résultats d'analyse L'exploitation des résultats est effectuée automatiquement à l'aide d'une fonction log-logit. Limites du test Les échantillons troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test. Dans ce cas, les centrifuger avant le test. Les échantillons testés dans le cadre d'un contrôle national ou d'une étude multicentrique peuvent donner des résultats différents selon la méthode de dosage utilisée. Il peut donc être nécessaire de procéder à l'exploitation des résultats selon les valeurs-cibles spécifiques à la méthode utilisée. Valeurs normales Les valeurs de référence suivantes ont été obtenues pour des échantillons sériques de sujets adultes sains (9) : Protéine 2,5ème - 97,5ème percentiles Valeurs de référence des dans l urine : La valeur d dans la deuxième urine du matin est inférieure à 9,6 mg/l selon (8) ; la valeur est corrigée par rapport à la préparation de référence CRM 470. Valeurs de référence des dans le LCR : La valeur d dans le LCR est inférieure à 34 mg/l selon (10) ; la valeur est corrigée par rapport à la préparation de référence CRM 470. l est toutefois recommandé à chaque laboratoire d établir ses propres valeurs de référence, dans la mesure où les domaines de référence sont soumis à de nombreux facteurs d influence qui peuvent varier selon le collectif étudié. Caractéristiques des tests Domaine de mesure et sensibilité La sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d étalonnage, et dépend donc de la concentration en protéines du N Standard protéines SL. Les domaines de mesure types sont indiqués dans les manuels d utilisation des systèmes BN*. Spécificité Les N Antisérums sont spécifiques de la protéine indiquée. Précision Les N Antisérums anti-immunoglobulines humaines ont donné les coefficients de variation (CV) suivants sur les système BN*: intra-essai inter-essais protéine valeur moyenne CV valeur moyenne CV g/l % g/l % 13,5 2,1 13,2 2,7 Comparaison avec une autre méthode 100 échantillons sériques ont été testés en parallèle, d une part sur le système BN* avec les N Antisérums anti-immunoglobulines humaines (y), et d autre part parimmunodiffusion radiale (NOR- Partigen***) (x). La corrélation des résultats a donné les valeurs suivantes : protéine Droite de régression selon Passing Bablok (11) coefficient de corrélation y (BN*) = 1,09 x (IDR) - 0,12 g/l 0,97 IgA y (BN*) = 0,99 x (IDR) + 0,06 g/l 0,99 IgM y (BN*) = 1,08 x (IDR) - 0,06 g/l 0,99 Remarque : Les valeurs indiquées comme caractéristiques du test représentent des résultats types, et ne doivent pas être considérées comme des spécifications des N Antisérums anti humaines, IgA et IgM. Littérature Voir page 1. * BN est une marque déposée de aux Etats-Unis. ** BN ProSpec est une marque déposée de en Allemagne et dans d autres pays, et une marque de aux USA. *** Partigen est une marque déposée de en Allemagne et dans d autres pays. OSAR G09 C0540 (414) H 3 Edition Janvier 2002

4 N Antisieri anti immunoglobuline umane (, IgA e IgM) Settori d'impiego Diagnostici in vitro per la determinazione quantitativa delle immunoglobuline (, IgA, IgM) nel siero umano nonché delle nelle urine umane e nel liquor con i sistemi BN*. Significato diagnostico Le immunoglobuline vengono sintetizzate dalle plasmacellule nel corso della risposta immunitaria umorale seguente il contatto del sistema immunitario con l'antigene. Al primo contatto si formano come reazione primaria gli anticorpi della classe IgM, ai quali segue la formazione degli anticorpi e IgA. La determinazione quantitativa delle immunoglobuline può fornire importanti indicazioni sullo stato immunitario umorale. Concentrazioni ridotte delle immunoglobuline nel siero si verificano negli stati di deficit immunitario primario (1,2) e di insufficienza immunitaria secondaria, (3) ad es. tumori maligni progrediti, leucemia linfatica, mieloma multiplo e morbo di Waldenström. Concentrazioni aumentate di immunoglobuline nel siero si manifestano in seguito alla proliferazione immunoglobulinica policlonale o oligoclonale ad esempio nelle malattie epatiche (epatiti, cirrosi epatica), infezioni acute e croniche, nelle malattie autoimmuni e, nei neonati nel sangue del cordone ombelicale, nelle infezioni intrauterine e perinatali. (4,5) Proliferazioni monoclonali delle immunoglobuline nel siero sono state rilevate ad es. nel plasmocitoma, nel morbo di Waldenström e nelle malattie delle catene pesanti. (6) In presenza di immunoglobulinemia monoclonale sono necessari approfonditi esami diagnostici differenziali. Nelle reazioni immunitarie locali anche i valori delle immunoglobuline nel liquor, in modo particolare delle, (7) risultano aumentati. Aumentate concentrazioni delle nelle urine si riscontrano nelle proteinurie glomerulari non selettive. (8) Principio del metodo Le proteine contenute nel campione di siero umano, urina o liquor formano, in una reazione immunochimica, con gli anticorpi specifici degli immunocomplessi che provocano la dispersione della luce che attraversa il campione in esame. L intensità della luce dispersa dipende dalla concentrazione della corrispondente proteina nel campione. La valutazione quantitativa avviene per confronto con uno standard a concentrazione nota. Reagenti Contenuto della confezione N Antisiero anti umane, codice SAS o N Antisiero anti IgA umane, codice SAR o N Antisiero anti IgM umane, codice SAT 1 flacone ciascuno da 5 ml o da 2 ml Composizione Gli N antisieri sono sieri liquidi di origine animale, prodotti per immunizzazione di conigli con immunoglobuline (, IgA, IgM) altamente purificate. Le componenti labili dell antisiero vengono rimosse con un particolare procedimento di stabilizzazione. Le contaminazioni microbiche vengono escluse essenzialmente mediante filtrazione ed aggiunta di sodio azide (< 1 g/l) come conservante. Gli antisieri specifici, purificati tramite immuno-assorbimento vengono trattati in modo tale da assicurare un impiego ottimale con i sistemi BN*. Il titolo (T) viene determinato con l immuno diffusione radiale e si trova stampato sull etichetta dei relativi flaconi. Riporta quanti milligrammi di antigene vengono precipitati da 1 ml di ciascun antisiero in gel di agarosio. Avvertenze e precauzioni 1. Solo per uso diagnostico in-vitro. 2. Quando si impiegano diagnostici in-vitro contenenti sodio azide, osservare le seguenti precauzioni: non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose! La sodio azide a contatto con metalli pesanti, come rame e/o piombo, può formare azidi esplosive. Preparazione dei reagenti Gli N Antisieri sono pronti per l'uso e possono essere utilizzati senza ulteriore pretrattamento. Conservazione e validità Stabilità a +2/+8 C: vedere la data di scadenza sull etichetta Stabilità dopo apertura: 4 settimane, se conservati ben chiusi a+ 2/+ 8 C, evitando contaminazioni (ad es. da microrganismi). Durante la conservazione, gli N Antisieri possono presentare intorbidamenti o flocculazioni che non dipendono da contaminazioni microbiche e che non influenzano in alcun modo l attività. In questo caso è necessario filtrare l antisiero prima dell uso. A questo scopo sono disponibili filtri monouso con pori di 0,45 µm di diametro. Non congelare. Stabilità sui sistemi BN*: 5 giorni per 8 ore al giorno o periodo di tempo equivalente (massimo 40 ore); Sistema BN* II: la stabilità dei reagenti può essere aumentata usando gli Evaporation Stoppers per BN* II (cod. VLE), come indicato nel manuale d uso. Sistema BN ProSpec**: la stabilità dei reagenti è indicata nel manuale d uso. Altro materiale necessario Sistema BN* N Standard Proteine SL (umano), codice QIM N/T Controllo Proteine SL/L, M e H (umano), codice QIN, QIO e QIP N/T Controllo Proteine LC (umano), codice QLW N Tampone di reazione, codice UMS N Diluente, codice UMT N Reagente supplementare/precipitante, codice UMU Evaporation Stoppers per BN* II (opzionale), codice VLE Materiale di consumo ed accessori come descritto nei manuali d uso dei sistemi BN*. Campioni in esame Utilizzare preferibilmente campioni di siero freschi (conservati per un massimo di 8 giorni a +2/ +8 C) o conservati congelati e campioni di urina umana e liquor freschi. Campioni di siero fresco, se congelati entro 24 ore dal prelievo, possono essere conservati per un anno a -20 C. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti! I campioni di siero devono essere completamente coagulati e non devono presentare particelle in sospensione o tracce di fibrina dopo la centrifugazione. I campioni fortemente lipemici o i campioni congelati, che dopo scongelamento risultano torbidi, devono essere chiarificati, prima dell analisi, mediante centrifugazione (10 minuti a ca x g). Per la determinazione delle nell urina è possibile utilizzare sia urine spontanee che di raccolta. I campioni di urina non devono essere congelati. Ogni campione di urina e di liquor deve essere centrifugato prima del test. Esecuzione del test Nota: 1. Per informazioni dettagliate fare riferimento al manuale d uso dei sistemi BN*. 2. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza indicata. 3. Prima della determinazione sul sistema BN* A /BN* 100, portare i reagenti ed i campioni a temperatura ambiente (+15/+25 C). Sul sistema BN* II / BN ProSpec** i reagenti possono essere analizzati direttamente a +2/+8 C. Schema di esecuzione del test con i sistemi BN* Gli schemi per l esecuzione del test sono riportati nei manuali d uso e nel software dello strumento. Tutte le fasi sono eseguite automaticamente dallo strumento. Allestimento della curva di riferimento: Le curve di riferimento vengono allestite mediante una calibrazione a più punti. Per la sua preparazione vengono realizzate automaticamente diluizioni seriali dell'n Proteine standard SL con N Diluente. Le curve di calibrazione sono valide finchè i controlli di accuratezza, ad es. N/T Controllo per proteine SL/L, M ed H o N/T Controllo Proteine LC rimangono entro i rispettivi ambiti fiduciali. Quando si utilizza un nuovo lotto di antisiero si deve allestire una nuova curva di riferimento. Misurazione dei campioni I campioni di siero di paziente vengono diluiti automaticamente 1:400 (), 1:20 (IgA, IgM) o 1:5 nello schema di esecuzione sensibile (IgA, IgM) con N Diluente e quindi analizzati. Le nei campioni di urina o di liquor vengono determinate su campioni indiluiti mediante uno schema di esecuzione separato. Se le letture ottenute si trovano al di fuori dell ambito di misura, la misura può essere ripetuta usando una diluizione superiore o inferiore del campione ( nello schema di esecuzione su siero). Per informazioni sulla ripetizione della misurazione con altre diluizioni consultare il manuale d uso dei sistemi BN*. Controllo di qualità interno I controlli N/T Siero Proteine SL/L, M e H devono essere analizzati dopo ogni preparazione delle curve di riferimento, dopo aver iniziato un nuovo flacone di antisiero e con ogni serie di campioni. Per la determinazione delle nell urina o nel liquor, utilizzare l N/T Controllo Proteine LC. I controlli sono analizzati e valutati allo stesso modo dei campioni. I valori nominali e gli ambiti fiduciali sono indicati nella tabella dei valori nominali del relativo controllo. Calcolo dei risultati La valutazione é eseguita in modo automatico mediante una funzione logit-log. Limitazioni della esecuizione del test I campioni torbidi o contenenti particelle possono interferire con la determinazione. Pertanto i campioni contenenti particelle devono essere centrifugati prima di essere analizzati. Per ragioni tecniche legate alla produzione e/o all invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con i sieri di controllo e con i sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire in funzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti facendo riferimento a valori specifici per i diversi metodi utilizzati. Valori attesi I seguenti intervalli di riferimento si applicano ai campioni di siero di adulti sani (9): Proteina 2,5-97,5 Percentile 7,0-16,0 g/l IgA 0,7-4,0 g/l IgM 0,4-2,3 g/l Ambito di riferimento delle nell urina: nella seconda urina della mattina inferiore a 9,6 mg/l secondo (8); valore corretto in base al preparato di riferimento CRM 470. Ambito di riferimento delle nel liquor: nel liquor inferiore a 34 mg/l secondo (10); valore corretto in base al preparato di riferimento CRM 470. Inoltre, ogni laboratorio dovrebbe determinare i propri intervalli di riferimento, poiché i valori possono risultare diversi a seconda della popolazione esaminata. Caratteristiche del test Ambito di misura e sensibilità La sensibilità del test viene determinata dal limite inferiore della curva di riferimento e dipende quindi dalla concentrazione delle proteine nell N Proteine Standard SL. Gli ambiti di misura tipici sono riportati nel manuale d uso dei sistemi BN*. Specificità Gli N antisieri sono specifici per la rispettiva proteina. Precisione Con gli N antisieri anti immunoglobuline umane sono stati determinati, impiegando dei sistemi BN*, i seguenti coefficienti di variazione (CV): Intra - serie Inter - serie Proteina Valore medio CV Valore medio CV [g/l] [%] [g/l] [%] 13,5 2,1 13,2 2,7 Confronto tra i metodi Sono stati esaminati 100 campioni di siero con N Antisieri anti immunoglobuline umane sul sistema BN* (y) e con un metodo di immunodiffusione radiale (x) (NOR-Partigen***). La correlazione dei risultati è la seguente: Proteina Regressione Passing Bablok (11) Coefficiente di correlazione y (BN*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/l 0,97 IgA y (BN*) = 0,99 x (RID) + 0,06 g/l 0,99 IgM y (BN*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/l 0,99 Nota: I valori indicati come caratteristiche del test rappresentano dei risultati tipici e non devono essere considerati come specifiche per l'n Antisieri anti umane, IgA e IgM. Bibliografia Vedi pagina 1. * BN è un marchio registrato della negli Stati Uniti. ** BN ProSpec è un marchio registrato della in Germania e negli altri Paesi ed è un marchio della negli Stati Uniti. *** Partigen è un marchio registrato della in Germania e negli altri Paesi. OSAR G09 C0540 (414) H 4 Edizione Gennaio 2002

5 N Antisueros contra las Inmunoglobulinas humanas (, IgA e IgM) Campos de aplicación Reactivos de diagnóstico in vitro para la determinación cuantitativa de las inmunoglobulinas (, IgA e IgM) en suero humano, así como, de la en orina y en líquido cefalorraquídeo, humanos, usando los sistemas BN*. Significado diagnóstico Las inmunoglobulinas son producidas por células plasmáticas como respuesta inmunohumoral al contacto del sistema inmunitario con un antígeno. Después del contacto inicial, en la reacción primaria, se forman los anticuerpos de la clase IgM, seguidos posteriormente por anticuerpos e IgA. La determinación cuantitativa de las inmunoglobulinas proporciona importantes indicaciones sobre el estado actual del sistema inmunitario humoral. Concentraciones bajas de inmunoglobulinas en sueros se presentan en estados de inmunodeficiencia primarios (1, 2), como también en inmunodeficiencias secundarias (3), por ej. tumores malignos avanzados, leucemia linfática, mieloma múltiple y macroglobulinemia de Waldenström. Concentraciones elevadas de inmunoglobulinas en sueros son ocasionadas por aumentos policlonales y oligoclonales de las Igs como por ej. en enfermedades del hígado (hepatitis, cirrocis hepática), infecciones agudas y crónicas, enfermedades autoinmunitarias, como también, en el cordón umbilical de recien nacidos con infecciones intrauterinas y perinatales (4, 5). Aumentos monoclonales de inmunoglobulinas en sueros aparecen por ej. en plasmocitomas, macroglobulinemia de Waldenström y en enfermedades de cadenas pesadas (6). Si existe una inmunoglobulemia monoclonal, es necesario además de la determinación cuantitativa, un estudio a fondo de diagnóstico diferencial. Igualmente, en reacciones inmunológicas locales aparece en el líquido cefalorraquídeo valores aumentados de inmunoglobulinas especialmente de (7). En orina se encuentran concentraciones altas de en pacientes con proteinuria glomerular no selectiva (8). Principio del método Las proteínas contenidas en el suero, orina o líquido cefalorraquídeo, humanos, forman en una reacción inmunoquímica con anticuerpos específicos inmunocomplejos, los cuales pueden dispersar un rayo de luz incidente. La intensidad de la luz dispersada depende de la concentración de la correspondiente proteína en la muestra. La valoración se hace por comparación con un estándar de concentración conocida. Reactivos Contenido del envase comercial: N antisuero contra -humana, N de pedido OSAS o N antisuero contra IgA-humana, N de pedido OSAR o N antisuero contra IgM-humana, N de pedido OSAT 1 frasco con 5 ml o con 2 ml por cada uno Composición Los N antisueros son sueros animales, líquidos, producidos mediante inmunización de conejos con las inmunoglobulinas humanas (, IgA, e IgM) de alta pureza. Los componentes lábiles de los antisueros se retiran utilizando un proceso especial de estabilización. Las impurezas microbiológicas van a ser excluidas en general por medio de filtración y por la adición de azida de sodio (< 1 g/l) como medio de conservación. Los antisueros espec ficos, purificados mediante inmunoadsorción de fase sólida, después de someterse a pruebas especiales se ajustan de tal forma que se obtenga una óptima capacidad al usando los sistemas BN*. Los títulos de los anticuerpos (T) se obtiene por inmunodifusión radial y vienen dados en la etiqueta del frasco correspondiente. Este valor indica cuantos mg del antígeno por 1 ml del antisuero se pueden precipitar en un gel de agarosa. Advertencias y medidas de seguridad 1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro. 2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse la siguiente regla: No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidas explosivas con metales pesados como cobre y plomo. Preparación de reactivos Los N antisueros están listos para ser utilizados y pueden aplicarse sin ningún otro tratamiento preliminar. Estabilidad y almacenaje Tiempo de conservación entre +2 y +8 C: La fecha de vencimiento viene dada en la etiqueta; Estabilidad después de abierto: 4 semanas siempre que los frascos después de ser empleados se mantengan entre +2 y +8 C, perfectamente cerrados y se eviten contaminaciones (por ej., por microorganismos); Los N antisueros pueden presentar durante el almacenamiento floculación o turbidez que no son ocasionadas por contaminación microbiológica y que no influyen de manera alguna en su actividad.en estos casos los antisueros deben ser filtrados, antes de ser usados. Para esto son apropiados filtros desechables con un diámetro de poro de 0,45 µm. No está permitida su congelación. Estabilidad en los sistemas BN*: 5 días 8 horas cada día o un período de tiempo comparable (máximo 40 horas); En el sistema BN* II el aumento de la estabilidad del reactivo, debido al uso del tapón protector de la evaporación (N de pedido, OVLE), viene dado en el manual de operaciones del aparato. La estabilidad de los reactivos en el sistema BN ProSpec** se debe tomar del manual de operaciones. Materiales adicionales necesarios Sistema BN* N Proteína-estándar SL (humana), N de pedido OQIM N/T Proteína-controles SL/L, M y H (humana), N de pedido OQIN, OQIO y OQIP N/T Proteína-control LC (humana), N de pedido OQLW N tampón para reacción, N de pedido OUMS N diluyente, N de pedido OUMT N Reactivo adicional/precipitación, N de pedido OUMU Tampón protector de evaporación BN* II (opcional), N de pedido OVLE Otros materiales y equipos como está descrito en el manual de operaciones respectivos de los sistemas BN*. Material a investigar Para la medida se deben usar, en lo posible, muestras frescas (almacenadas máximo 8 días entre +2 y +8 C) o muestras de sueros humanos almacenadas congeladas a bajas temperaturas, así como, muestras frescas de orina y de líquido cefalorraquídeo. Cuando las muestras frescas se congelan dentro de las primeras 24 horas después de su recolección, es posible su almacenamiento hasta por 1 año a una temperatura menor de -20 C, siempre que se eviten continuas congelaciones y descongelaciones. Las muestras de suero deben estar completamente coaguladas y no presentar partículas o restos de fibrina después de centrifugadas. Muestras altamente lipémicas o muestras congeladas que presenten turbidez después de la descongelación, deben ser aclaradas por centrifugación (10 min. a aprox x g) antes de ser ensayadas. Para la determinación de la en orina son apropiadas muestras de orina espontánea y recolectada. Las muestras de orina no se deben congelar. Cada muestra de orina y de líquido cefalorraquídeo debe ser centrifugada antes del análisis. Procedimiento Advertencias: 1. Los detalles sobre el manejo de los sistemas BN* se deben tomar de los correspondientes manuales de operación. 2. Los reactivos no se deben utilizar una vez pasada la fecha de vencimiento. 3. Los reactivos y las muestras tienen que haber alcanzado la temperatura ambiente (entre +15 y +25 C) antes de ser medidos en los sistemas BN* A/BN* 100. En los sistemas BN* II/BN ProSpec** los reactivos y las muestras almacenados entre +2 y +8 C se pueden utilizar directamente para la determinación. Protocolos del test en los sistemas BN* Los protocolos de elaboración de los ensayos vienen dados en el manual de operaciones, así como en el software del aparato correspondiente. Todas las etapas son efectuadas automáticamente por el sistema. Preparación de la curva de referencia: Las curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su elaboración se preparan automáticamente una serie de diluciones del N Proteína-estandar SL con el N diluyente. Las curvas de referencia pueden ser utilizadas tanto tiempo como sea posible, siempre que al determinar de nuevo de los controles de exactitud, por ej., N/T proteína-controles SL/L, M y H o N/T Proteína-control LC sus valores se encuentren dentro de los rangos de confianza correspondientes. Al utilizar un nuevo lote de antisueros se deben preparar nuevas curvas de referencia. Medida de las muestras de pacientes: Las muestras de suero van a ser automáticamente diluidas con N diluyente, 1:400 (), 1:20 (IgA e IgM) o, en protocolos de ensayos sensibles, 1: 5 (IgA e IgM) y medidas. La determinación de la en muestras de orina y de líquido cefalorraquídeo se hace en las muestras sin diluir, siguiendo respectivamente un protocolo de ensayo separado. Para valores que se encuentren por fuera de rango de medida, se puede repetir la medida a una dilución mayor o menor de la muestra ( en el protocolo de ensayo en suero). La repetición de las medidas a otras diluciones de las muestras viene descrita en el manual de operaciones del sistema BN*. Control de calidad interno Los N/T proteína-controles SL/L, M y H se deben utilizar después de cada elaboración de una curva de referencia, después de abrir un frasco de antisuero por primera vez, así como también, con cada serie de muestras. Para la determinación de la en orina o en líquido cefalorraquídeo se deben utilizar de manera análoga los N/T proteína- controles LC. Los controles deben manejarse en el test y en la evaluación como las muestras de pacientes. Los valores teóricos y los rangos de confianza se deben tomar de la Tabla de valores teóricos correspondiente a cada control. Cálculo de los resultados del análisis La valoración se efectua automáticamente mediante una función log-logit. Limitaciones del Procedimiento La presencia de turbidez y de partículas en las muestras pueden alterar la determinación. Por lo tanto, las muestras que contengan partículas deben ser centrifugadas antes de efectuar la determinación. Para las muestras control y para las muestras empleadas en estudios en diferentes centros, debido a la técnica de fabricación o al envejecimiento de las muestras, se obtienen resultados diferentes dependiendo del método de determinación utilizado. Por esta razón, puede ser necesario efectuar la valoración de estos resultados en relación con los valores objetivo del método correspondiente. Valores esperados Para sueros de sujetos adultos sanos son válidos los siguientes rangos de referencia (9): Proteína 2,5-97,5 Porcentile Rango de referencia para la en orina: en la segunda orina del día por debajo de 9,6 mg/l según (8); Valores corregidos con relación a la preparación de referencia CRM 470. Rango de referencia para la en líquido cefalorraquídeo: en líquido cefalorraquídeo por debajo de 34 mg/l según (10); Valores corregidos con relación a la preparación de referencia CRM 470. Cada laboratorio debe además determinar sus propios rangos de referencia, ya que estos están sujetos a diferentes factores, los cuales pueden ser diferentes para cada colectividad investigada. Características del test Rango de medida y sensibilidad La sensibilidad de la determinación se fija de acuerdo al límite inferior de la curva de referencia y depende de la concentración de proteínas en el N Proteína estándar SL. Los rangos de medida típicos vienen dados en el manual de operaciones de los sistemas BN*. Especificidad Los N antisueros son específicos para la respectiva proteína. Precisión Los siguientes coeficientes de variación (CV) fueron obtenidos con los N antisueros contra las inmunoglobulinas humanas en los sistemas BN*: Intra-assay Inter-assay Proteína promedio CV promedio CV [g/l] [%] [g/l] [%] 13,5 2,1 13,2 2,7 Comparación de métodos Se midieron 100 muestras de sueros con los N antisueros contra las inmunoglobulinas humanas en el sistema BN* (y) y se compararon con la determinación por inmunodifusión radial (x) (NOR- Partigen***). La correlación de los resultados dio los siguientes datos: Proteína Regresión Passing Bablok (11) Coeficiente de correlación y(bn*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/l 0,97 IgA y(bn*) = 0,99 x (RID) + 0,06 g/l 0,99 IgM y(bn*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/l 0,99 Nota: Los valores dados para las características del test representan valores típicos y no se deben tomar como especificaciones para los N Antisuero contra, IgA e IgM humanas. Bibliografía Ver página 1. * BN es una marca de fábrica de en USA. ** BN ProSpec es una marca registrada de en Alemania y en otros países y es una marca de en USA. *** Partigen es una marca registrada de en Alemania y en otros países. OSAR G09 C0540 (414) H 5 Edición Enero 2002

6 N Anti-soros contra imunoglobulinas humanas (, IgA, e IgM) Campos de aplicação Diagnósticos para a determinação quantitativa in vitro das imunoglobulinas (, IgA e IgM) no soro humano, bem como da na urina humana e no líquido cefalorraquidiano nos sistemas BN*. Significado diagnóstico As imunoglobulinas são sintetizadas pelas células plasmáticas como resposta imunitária humoral a um contacto do sistema imunitário com antígenos. Num primeiro contacto são produzidos, como reacção primária, anticorpos da classe das IgM, depois anticorpos e IgA. A determinação quantitativa pode fornecer elementos importantes para a avaliação do estatuto imunitário humoral. Concentrações diminuídas de imunoglobulina sérica manifestam-se em estados de deficiência imunológica primária (1, 2), assim como nas insuficiências imunitárias secundárias (3), p. ex. tumor maligno avançado, leucemia linfática, mieloma múltiplo ou ainda no Mal de Waldenström. Concentrações aumentadas de imunoglobulinas no soro ocorrem, devido a uma multiplicação oligoclonal ou policlonal das Ig, p. ex. nas hepatopatias (hepatites, cirrose hepática), em infecções agudas ou crónicas, nas doenças auto-imunes, assim como no sangue do cordão umbilical dos recém-nascidos com infecções intra-uterinas ou perinatais (4, 5). A multiplicação monoclonal das imunoglobulinas séricas ocorre p. ex. nas plasmocitoses, no Mal de Waldenström e nas afecções das cadeias pesadas (6). Na imunoglobulinemia monoclonal, as determinações quantitativas precisam de ser acompanhadas de outros testes que permitam um diagnóstico diferencial. Reacções imunitárias locais produzem também no líquido cefalorraquidiano (LCF) valores aumentados de imunoglobulinas, sobretudo das (7). Concentrações aumentadas de na urina encontram-se na proteinúria glomerular não selectiva (8). Princípio do método As proteínas contidas no soro humano, urina ou líquido cefalorraquidiano formam imunocomplexos numa reacção imunoquímica com anticorpos específicos, que dispersam a luz incidente. A intensidade da luz difusa depende da concentração da respectiva proteína na amostra. A avaliação faz-se comparando com um padrão conhecido da concentração. Reagentes Conteúdo da embalagem N Anti-soro contra humana, código OSAS ou N Anti-soro contra IgA humana, código OSAR ou N Anti-soro contra IgM humana, código OSAT 1 frasco de 5 ml ou 2ml de cada Composição Os N Antisoros são soros fluídos de origem animal e são produzidos mediante a imunização de coelhos com imunoglobulinas humanas (, IgA ou IgM) altamente purificadas. Um procedimento especial de estabilização elimina os componentes lábeis. As impurezas microbianas são eliminadas, de forma considerável, através da filtração e da adição de azida de sódio (< 1 g/l) como conservante. Purificados por imunoadsorção na fase sólida, os anti-soros específicos são sujeitos a um controlo especial e calibrados de forma a garantirem uma utilização óptima nos sistemas BN*. Os títulos de anticorpos (T) são determinados por imunodifusão radial e vêm expressos no rótulo do frasco. Eles indicam quantos mg de aní geno são precipitados em gel de agarose por 1 ml do respectivo anti-soro. Advertências e medidas de precaução 1. Só para uso diagnóstico in vitro. 2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnóstico in vitro com teor de azida sódica: Evitar ingerir e todo o contacto com a pele ou mucosas! Com metais pesados, como cobre ou chumbo, a azida de sódio pode formar azidas explosivas! Preparação dos reagentes Os N Anti-soros estão prontos para o uso e podem ser utilizados sem qualquer tratamento prévio. Estabilidade e conservação Conservação entre +2 e +8 C: A estabilidade está indicada no rótulo; Estabilidade depois de aberto: 4 semanas desde que os frascos, imediatamente após o uso, sejam firmemente fechados e conservados entre +2 bis +8 C para evitar a contaminação (p. ex., através de microorganismos); Em caso de armazenagem, os N antisoros podem apresentar floculações ou turvações que não são provocadas por contaminação microbiana e não prejudicam, de nenhum modo, a actividade. Nesses casos, os antisoros deverão ser filtrados antes de serem usados. Para esse efeito, são adequados os filtros descartáveis com um diâmetro de poros de 0,45 µm. Não congelar. Estabilidade nos sistemas BN*: 5 dias com 8 horas ou um período de tempo equivalente (máximo de 40 horas); Sistema BN* II: o aumento da estabilidade dos reagentes em caso de utilização de BN* II Evaporation Stoppers (N.º de pedido OVLE) deverá ser retirada da instruções de serviço; Sistema BN ProSpec**: a estabilidade dos reagentes deverá ser retirada das instruções de serviço. Materiais necessários mas não fornecidos Sistema BN* N Proteína Standard SL (humana), código OQIM N/T Controlos de proteína SL/L, M e H (humana), códigos OQIN, OQIO e OQIP N/T Controlo de proteína LC (humana), código OQLW N Tampão de reacção, código OUMS N Diluente, código OUMT N Reagente complementar/precipitação, código OUMU BN* II Evaporation Stoppers (opcionais), N.º de pedido OVLE Material de consumo e equipamento tal como descrito nas instruções de serviço dos sistemas BN*. Amostras Para a medição, utilizar amostras séricas humanas, tão frescas quanto possível (tempo máximo de conservação: 8 dias entre +2 a 8 C), ou conservadas congeladas, bem como amostras frescas de urina e de líquido cefalorraquidiano. Se as amostras foram congeladas nas primeiras 24 horas a contar do momento da colheita, elas podem ser conservadas a menos de -20 C até 1 ano, desde que se evite descongelar e congelar repetidamente. As amostras de soro devem estar completamente coaguladas e não apresentar partículas ou vestígios de fibrina após a centrifugação. Amostras lipémicas, ou amostras congeladas que se apresentem turvas quando descongeladas, têm de ser clarificadas por centrifugação (10 min a aprox x g) antes da determinação. Para a determinação da na urina são adequadas amostras de urina espontânea e de urina recolhida. As amostras de urina não podem ser congeladas. Cada amostra de urina e de líquido cefalorraquidiano deverá ser centrifugada antes da análise. Procedimento Notas: 1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser retirados das instruções de serviço respectivas. 2. Os reagentes não deverão ser mais usados após a data de expiração indicada. 3. Antes da medição no sistema BN* A/BN* 100, é necessário que os reagentes e as amostras tenham atingido a temperatura ambiente (+15 a +25 C). Os reagentes e as amostras armazenadas entre +2 bis +8 C podem ser utilizadas directamente no sistema BN* II/BN ProSpec** para a determinação. Protocolos de ensaio nos sistemas BN* Os protocolos de ensaio estão contidos nas instruções de serviço e no Software do aparelho respectivo. Todos os passos são executados automaticamente pelo sistema. Definição da curva de referência: As curvas de referência são obtidas por uma calibração de pontos múltiplos. As séries de diluição do N Proteína Standard SL com o N Diluente são efectuadas automaticamente. OSAR G09 C0540 (414) H 6 Edição Janeiro 2002 As curvas de referências permanecem válidas enquanto os controlos de exactidão, p. ex. N/T Controlos de proteína SL/L, M e H ou N/T Controlo de proteína LC se encontrarem compreendidos nos respectivos escalões de confiança. Utilizando-se outro lote de anti-soro, é necessário definir uma nova curva. Medição das amostras de paciente: As amostras séricas são diluídas e medidas automaticamente com N diluente a 1 : 400 () ou 1 : 20 (IgA, IgM), ou no protocolo de ensaio de sensibilidade (IgA, IgM), a 1 : 5. A nas amostras de urina ou de líquido cefalorraquidiano é determinada sempre num protocolo de ensaio separado, a partir de amostras não diluídas. Para os valores medidos que se encontrem fora do escalão de referência, a medição pode ser repetida a partir de uma diluição de amostra superior ou inferior ( no protocolo de ensaio do soro). As repetições de medição a partir de outras diluições de amostras estão descritas nas instruções de serviço dos sistemas BN*. Controlo interno de qualidade Os N/T Controlos de proteína SL/L, M e H deverão ser utilizados após a preparação de uma curva de referência, após a primeira abertura de um frasco de antisoro ou em cada série de amostras séricas. Na determinação da na urina ou no líquido cefalorraquidiano, o N/T Controlo de proteína LC deverá ser utilizado de forma análoga. Na preparação e na avaliação do teste, os controlos são tratados como amostras de paciente. Os valores teóricos e os escalões de confiança deverão ser retirados da tabela de valores teóricos do controlo respectivo Cálculo dos resultados O resultado é calculado automaticamente mediante uma função logit-log. Limitações do procedimento As turvações e as partículas nas amostras podem perturbar a determinação. Por isso, as amostras que contêm partículas deverão ser centrifugadas antes da determinação. Em amostras de controlo ou de ensaios interlaboratoriais pode acontecer obterem-se resultados divergentes, conforme o método de análise utilizado, em virtude da elaboração técnica ou da idade das amostras. Pode ser, por isso, necessário proceder a uma avaliação destes resultados em função dos valores específicos do método utilizado. Valores esperados Escalões de referência válidos para amostras séricas de adultos sãos (9): Proteína 2, ,5. percentil Escalão de referência para a na urina: na segunda urina da manhã inferior a 9,6 mg/l segundo (8); Valor corrigido por referência com a preparação de referência CRM 470. Escalão de referência para a no líquido cefalorraquidiano: no líquido cefalorraquidiano inferior a 34 mg/l segundo (10); Valor corrigido por referência com a preparação de referência CRM 470. Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referência próprios, já que estes dependem de muitos factores que podem variar consoante a população examinada. Características do teste Sensibilidade e âmbito de medição A sensibilidade da determinação é definida pela curva inferior da curva de referência e depende, assim, da concentração das proteínas no N Protein-Standard SL. Os escalões de medição típicos estão indicados nas instruções de serviço dos sistemas BN*. Especificidade Os N Anti-soros são específicos da respectiva proteína. Precisão Os seguintes coeficientes (CV) de variação foram determinados com os N Anti-soros contra imunoglobulinas humanas, nos sistemas BN*: Intra-Assay Inter-Assay Proteína valor médio CV valor médio CV [g/l] [%] [g/l] [%] 13,5 2,1 13,2 2,7 Comparação de métodos No sistema BN* (y) foram medidas 100 amostras séricas com os N antisoros contra a imunoglobulina humana e definidas, comparativamente, com um método de imunodifusão radial (x) (NOR- Partigen***). A correlação dos resultados apresentou os seguintes valores: Proteína Regressão segundo Passing Bablok (11) Coeficiente de correlação y(bn*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/l 0,97 IgA y(bn*) = 0,99 x (RID) + 0,06 g/l 0,99 IgM y(bn*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/l 0,99 Nota Os valores indicados para as características dos testes constituem resultados típicos e não deverão ser encarados como uma especificação para os ensaios N Anti-soros contra, IgA, e IgM humanas. Bibliografia Vide a página 1. * BN é uma marca de fábrica da nos EUA. ** BN ProSpec e uma marca registada da na Alemanha e noutros países é uma marca de fábrica da nos EUA. *** Partigen e uma marca registada da na Alemanha e noutros países. Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles / Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical IVD Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario para el Diagnóstico In Vitro LOT Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de Lote EXP Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha de CCYY-MM-DD vencimiento / até termo da validade 8 C Storage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura 2 C di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagem CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE REF Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número de Catálogo Consult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulter la Notice d'utilisation / Istruzioni per l'uso / Consultar Instucciones para el Uso / Consulte as Instruções de Utilição