Polifenoles totales en pan de abeja (Apis mellifera L.) de colmenas de la Región de La Araucanía

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1 Volumen 32, Nº 1. Págins IDESIA (Chile) Enero-Febrero, 2014 Polifenoles totles en pn de bej (Apis mellifer L.) de colmens de l Región de L Arucní Totl polyphenols in bee bred (Apis mellifer L.) from hives the Arucní Region Ximen Arned Durán 1 *, Ingrid Quezd Mrdones 2, Mrí Mrtínez Gutiérrez 1 y Dniz Morles Ullo 1 RESUMEN El pn de bej es polen lmcendo prcilmente fermentdo que ls obrers de Apis mellifer L. recolectn y lo mezcln con sus propis enzims digestivs, hciéndolo un limento sno y nutritivo pr ells debido ls propieddes funcionles. Por est rzón, el objetivo de este estudio fue determinr l concentrción de polifenoles presentes en pn de bej provenientes de dos sectores de l Región de L Arucní medinte dos métodos de extrcción. Pr ello se obtuvieron cinco pnles con pn de bej del sector de Pillnlelbún en l comun de Lutro y el sector de Pidenco-Codihue comun de Crhue. El totl de compuestos fenólicos se nlizó colorimétricmente por medio del método de Folin Cioclteu en el Lbortorio de Bromtologí de l Universidd Ctólic de Temuco. L myor concentrción de polifenoles se observó en l loclidd de Pillnlelbún, tnto pr l extrcción con metnol como con gu rrojndo resultdo de 2394 mg 100 g 1 y 689 mg 100 g 1 de pn de bej bse sec, respectivmente, en cmbio en el sector de Crhue los resultdos fueron de 1972 mg 100 g 1 de pn de bej bse sec extrcción con metnol y 605 mg 100 g 1 de pn de bej bse sec extrcción con gu. Est diferenci estrí dd por l composición florl de los pólenes de cd sector, siendo más bundnte en polifenoles en el sector de Pillnlelbún. Plbrs clve: polen, método de extrcción, Crhue, Pillnlelbún. ABSTRACT The bee bred stored pollen fermenttion is tht workers of Apis mellifer L. collected nd mixed with their own digestive enzymes, mking it helthy nd nutritious food for them due to the functionl properties. For this reson, the im of this study ws to determine the concentrtion of polyphenols present in bee bred from two sectors of the Arucní Region using two extrction methods. To do this, five combs with bee bred were obtined from the Pillnlelbún sector of the district of Lutro nd from the Pidenco-Codihue sector of the district of Crhue. The totl phenolic compounds were subjected to colorimetric nlysis using the Folin Cioclteu method in the Bromtology Lbortory of the Ctholic University of Temuco. A greter concentrtion of polyphenols ws observed in the Pillnlelbún sector, for extrction both with methnol nd with wter, giving result of 2394 mg 100 g 1 nd 689 mg 100 g 1 bee bred, dry bse, respectively, while in the Crhue sector the results were 1972 mg 100 g 1 bee bred, dry bse, for extrction with methnol nd 605 mg 100 g 1 bee bred, dry bse, for extrction with wter. This difference would rise from the composition of the flor from which the pollen, with polyphenols being more bundnt in the Pillnlelbún sector. Key words: pollen, extrction method, Crhue, Pillnlelbún. Introducción El pn de bej es polen lmcendo prcilmente fermentdo (Bogdnov, 2004) que ls obrers recolectn y lo mezcln con sus propis enzims digestivs (Ngi et l., 2004) y que lmcenn en ls celdills gregndo un cp de miel como únic fuente de crbono (Audisio et l., 2005). Esto, l quedr selldo y en los pnles dycentes l cámr de crí (35 ºC 36 ºC), sufre un serie de trnsformciones, debido l cción de diferentes enzims, microorgnismos, humedd y tempertur que permiten l conversión, mejormiento y preservción del polen lmcendo (Gillim, 1997), l cul, después de dos semns se convierte en pn de bej (Mutsers y Kt-Reynen, 2005). 1 Universidd Ctólic de Temuco, Fcultd de Recursos Nturles, Escuel de Agronomí. Rudecindo Orteg 02950, Temuco. Chile. 2 Servicio Agrícol y Gndero (SAG). Servicio Agrícol Gndero (SAG), Sn José 242, Puerto Vrs. * Autor por correspondenci: xrned@uct.cl Fech de Recepción: 21 Agosto, Fech de Aceptción: 15 Noviembre, 2013.

2 108 IDESIA (Chile) Volumen 32, Nº 1, Enero-Febrero, 2014 Este polen, que es l principl fuente de proteín pr ls bejs (Almeid-Murdin et l., 2005), proviene de fruts, hortlizs y cereles, los cules pueden biosintetizr bioctivos como polifenoles, compuestos con más de 500 moléculs con diferentes propieddes y biodisponibiliddes (Mnch et l., 2004; Rubilr et l., 2006; Neveu et l., 2010; Tresserr-Rimbu et l., 2013), que pueden ser trnsferidos este (Bltrušityté et l., 2007), y que utilizn pr l elborción del pn, hciéndolo un limento sno y nutritivo pr ells, debido ls propieddes funcionles y contenido de flvonoides presentes en este, correlciondos con su origen florl (Ngi et l., 2004; Yo et l., 2004; Stnciu et l., 2008) existiendo, demás, en lgunos de sus compuestos fenólicos propieddes ntioxidntes (Stnciu et l., 2007). En este contexto es importnte determinr l concentrción de polifenoles totles de este producto elbordo por ls bejs, en diferentes locliddes de l Región de L Arucní medinte dos métodos de extrcción con el propósito de verificr diferencis, según origen de colect de polen y técnics de nálisis. Mteriles y Métodos Ls muestrs de pn de bej fueron colectds de dos locliddes de l Región de L Arucní, sector de Pillnlelbún, 18 km l norte de Temuco, comun de Lutro (38º39 17,2 lt. sur, 72º26 56 long. oeste) y el sector de Pidenco-Codihue comun de Crhue (39º43 lt. sur; 74º11 long. oeste). Pr ello se obtuvieron cinco pnles con pn de bej de l tempord primver-verno, los cules fueron trslddos en bolss plástics y congeldos pr su nálisis posterior en el Lbortorio de Bromtologí de l Escuel de Agronomí de l Universidd Ctólic de Temuco. Pr l extrcción del pn de bej de los pnles se tomó desde l cámr de crí un pnl con polen de cd colmen (seis colmens por sector) los que fueron llevdos hst el lbortorio en un cj térmic y refrigerdos hst su utilizción posterior. Pr retirr el polen de ls celdills ests se rompieron con un espátul. El mteril obtenido se colocó en un mortero de loz y se homogenizó. Pr el ensyo se utilizron dos trtmientos, el primer trtmiento consistió en diluir 0,5 g de pn de bej en gu destild y pr el segundo trtmiento se diluyeron 0,5 g en metnol l 80%. Se relizron seis repeticiones por trtmiento. Ls repeticiones consistieron en pn de bejs colectdo de seis colmens por cd sector. El totl de compuestos fenólicos se nlizó colorimétricmente por medio del método de Folin Cioclteu modificdo por Singleton y Rossi (1965). Con un vlor de 2,5 ml de Folin Cioclteu, el rectivo se diluyó 10 veces, se utilizron 2 ml de crbonto de sodio l 75%; 0,5 g de pn de bej diluido en gu y metnol l 80%. L bsorbnci se midió 765 nm después de 15 minutos de hber recibido un tempertur de 50 ºC. Como blnco se utilizó un mezcl de gu y rectivos. L concentrción de polifenoles se expresó en equivlentes de ácido gálico (EAG). El nálisis polínico del pn de bej consistió en relizr un ctstro de l flor presente en los lugres donde se extrjeron ls muestrs. Pr ello se relizó un muestreo letorio simple recorriendo 3 km l redond de donde estbn ubicdos los pirios. El muestreo se relizó durnte octubre recolectndo e identificndo ls especies presentes en el lugr (clsificándols por fmili) y luego ls muestrs fueron nlizds en el lbortorio. El nálisis consistió en extrer polen de ls especies recolectds, fijrls sobre un portobjeto, plicrle un solución de geltin con glicerol y sfrnin, pr teñir el polen, luego se identificó cd un de ls especies recolectds y se observron en el microscopio, posteriormente se diluyó 0,2 g de pn de bej, en 20 ml de gu. Se gitron en un gitdor mgnético por 15 minutos, seguidmente se colocó un got de est solución en un portobjeto y se utilizó l mism solución pr teñir. Posteriormente, se nlizó en el microscopio comprándol con los pólenes de ls especies recolectds y poyd en bibliogrfí. Se utilizó un fctoril de 2 x 2 (dos zons de colect y dos métodos de extrcción). Los resultdos obtenidos de cd prámetro evludo (contenido de polifenoles y composición de polen presente en pn de bej) en l investigción fueron exmindos medinte un nálisis de vrinz (ANDEVA) (p 0,05), los resultdos expresdos como porcentjes fueron trnsformdos utilizndo el rcoseno de l ríz del porcentje, y cundo correspondió se relizó l comprción de medis medinte el test de comprción múltiple de Tuckey (p 0,05). Pr el nálisis estdístico se utilizó el progrm estdístico SPSS (Sttisticl Product nd Service Solutions) versión 15.0 pr Windows (SPSS Inc, 2006).

3 Polifenoles totles en pn de bej (Apis mellifer L.) de colmens de l Región de L Arucní 109 Resultdos y Discusión Los resultdos indicn que en tods ls muestrs existe presenci de polifenoles, los cules vrín en su concentrción tnto por el tipo de extrcción como por su ubicción geográfic (Tbl 1). Tl como lo señln Mărghitş et l. (2009), quienes indicn que existe un grn vribilidd en relción con l correspondenci entre l ctividd ntioxidnte y el contenido de polifenoles totles del polen con diferentes orígenes botánicos. Según los resultdos, estos señln que existen diferencis estdístics (p < 0,05) pr los sectores de Pillnlelbún y Crhue, obteniéndose un myor concentrción de polifenoles en mbos sectores estudidos medinte l extrcción con metnol que con gu. Por otr prte, l comprr ls concentrciones de polifenoles según el sector de origen, los resultdos tmbién señln que existen diferencis significtivs, produciéndose un myor concentrción en el sector de Pillnlelbún (1541 mg 100 g 1 de pn de bej bse sec) que en el de Crhue (1289 mg 100 g 1 de pn de bej bse sec) (Tbl 1). Estos resultdos coinciden con Stnciu et l. (2007), quienes l comprr diferentes métodos de extrcción de polifenoles en pn de bej comprobron que l extrcción con metnol resultó ser l que obtuvo l myor cntidd de fenoles con 22,72 mg EAG g 1, lo que concuerd con estudios relizdos por Rubilr et l. (2006), quienes obtuvieron como resultdo que el myor rendimiento de compuesto extríble prtir de hojs de murt (Ugni moline) corresponde metnol (44%), seguido muy cerc por el etnol (40%) y gu (34%). Además, estos resultdos tmbién coinciden con lo expuesto por Crpes et l. (2007), quienes señln que el importe totl de compuestos fenólicos no solo vrí con diferentes condiciones de extrcción, sino que tmbién vrí en locliddes diferentes. Tl como lo obtenido por Bltrušityté et l. (2007), quienes indicn que ls concentrciones de polifenoles presentes vrín según el origen del polen, es decir, con los diferentes tipos de flores de ls cules fueron recolectds, lo cul depende clrmente de l flor y l ubicción geográfic de est. En este mismo sentido Stnciu et l. (2008) indicn un grn vribilidd en relción con l correspondenci entre l ctividd ntioxidnte y el contenido de polifenoles totles y flvonoides en el origen botánico de diferentes pólenes. Con relción l diferenci de l cntidd de polifenoles totles encontrdos en pn de bej entre el sector de Pillnlelbún y Crhue, este está ddo principlmente por l composición del polen presente en pn de bej (Figur 1A y 1B), y que existe un grn vribilidd en el contenido Tbl 1. Comprción de l concentrción de polifenoles presente en pn de bej (mg 100 g 1 de pn de bej bse sec), entre los sectores de Pillnlelbún y Crhue, medinte dos métodos de extrcción. Sector Método de extrcción Metnol Agu Promedio sector Pillnlelbún 2394 A 689 Ab 1541 A Crhue 1972 B 605 Bb 1289 B Promedio método de extrcción b Vlores seguidos por distints letrs myúsculs en ls columns o seguidos por distints letrs minúsculs en ls fils presentn diferencis significtivs según Test de Tukey (p < 0,05). Cntidd de polen (%) Apicee Astercee b Borgincee Brssicce Fgcee Myrtcee c No determindos A Fmili Fmili Figur 1. Porcentje de prticipción de fmilis en l composición del polen presente en pn de bej. A) Sector de Crhue. B) Sector de Pillnlelbún. Letrs diferentes en brrs indicn diferencis significtivs según test de Tuckey (p<0,05). Cntidd de polen (%) Astercee Brssicce Myrtcee b Rnunculcee d Roscee cd No determindos B

4 110 IDESIA (Chile) Volumen 32, Nº 1, Enero-Febrero, 2014 de compuestos fenólicos en el polen de diferentes especies (Almeid-Murdin et l., 2005; Lej et l., 2007). En este sentido, l loclidd de Pillnlelbún obtuvo los myores contenidos de polifenoles en ls muestrs de pn de bej que el sector de Crhue, lo que probblemente estrí ddo por l presenci de especies de l fmili Roscee como zrzmor (Rubus ulmifolius Schott.), l ser un ric fuente de compuestos polifenólicos (Mnch et l., 2004), y que l prticipción totl de fenoles difieren considerblemente (Stnciu et l., 2008). A pesr de existir diferencis estdísticmente significtivs (p 0,05) en el porcentje de prticipción de especies en l composición del polen en pn de bej (Figurs 1A y 1B), en mbos sectores l vegetción presente estuvo dd principlmente por especies de l fmili Brsiccee y Myrtcee (Eucliptus sp.), que tmbién portrín contenidos de polifenoles, y que según estudios relizdos por Isz (2007), los polifenoles están distribuidos en vrios sectores del reino de ls plnts superiores, especilmente en ls fmilis Leguminose, Roscee, Polygoncee, Fgcee, Rhyzophorcee, Myrtcee y Melstomtce. Conclusiones De cuerdo con los resultdos obtenidos, se puede concluir que l concentrción de polifenoles en pn de bej vrí según l loclidd del sector de donde son tomds ls muestrs l igul que el método de extrcción, siendo myor en el sector de Pillnlelbún con l extrcción con metnol, debido probblemente l porcentje de prticipción de diferentes fmilis en l composición del polen presente en pn de bej. Litertur Citd Almeid-Murdin, L.B.; Pmplon, L.C.; Coimbr, S.; Brth, O.M Chemicl composition nd botnicl evlution of dried bee pollen pellets. Journl of Food Composition nd Anlysis 18(1): Audisio, M.C.; Terzolo, H.R.; Apell, M.C Bcteriocin from honeybee beebred Enterococcus vium, ctive ginst Listeri monocytogenes. Applied nd Environmentl Microbiology 71(6): Bltrušityté, V.; Rimnts, P.; Čeksteryte, V Rdicl scvenging ctivity of different florl origin honey nd beebred phenolic extrcts. Food Chemistry 101: Bogdnov, S Qulity nd stndrs of pollen nd beeswx. Apict 38: Crpes, S.; Begnini, R.; de Alencr, S.; Msson, M Study of preprtions of bee pollen extrcts, ntioxidnt nd ntibcteril ctivity. Ciênci e Agrotecnologi 31(6): Gillim, M Identifiction nd roles of non-pthogenic microflor ssocited. FEMS Microbiology Letters 155(1): Isz, J Tninos o polifenoles vegetles. Scienti Et Tecnic 13(033): Lej, M.; Mreczek, A.; Wyzgolik, G.; Klepcz-Bnik, J.; Czekonsk, K Antioxidtive properties of bee pollen in selected plnt species. Food Chemistry 100: Mnch, C.; Sclbert, A.; Mornd, C.; Rémésy, C.; Jiménez, L Polyphenols: food sources nd biovilbility. Americn Journl of Clinicl Nutrition s 79: Mărghitş, L.; Stnciu, O.; Dezmiren, D.; Bobiş, O.; Popescu, O.; Bogdnov, E.; Cmpos, M In vitro ntioxidnt cpcity of honeybee-collected pollen of selected florl origin hrvested from Romni. Food Chemistry 115(3): Mutsers, M.; Kt-Reynen, C Bee products: properties, processing nd mrketing. Agrodok, 42. Agromis Foundtion.Wgeningen, Netherlnds. 94 pp. Ngi, T.; Ngshim, T.; Myod, T.; Inoue, R Preprtion nd functionl properties of extrcts from bee bred. Food / Nhrung 48(3): Neveu, V.; Perez-Jiménez, J.; Vos, F.; Crespy, V., du Chffut, L.; Mennen, L.; Knox, C.; Eisner, R.; Cruz, J.; Wishrt, D.; Sclbert, A Phenol-explorer: n online comprehensive dtbse on polyphenol contents in foods. Dtbse 2010: bp024, doi: /dtbse/bp024. Rubilr, M.; Pinelo, M.; Ihl, M.; Scheuermn, E.; Siniero, J.; Jos, M Murt leves (Ugni moline Turcz.) s source of ntioxidnt polyphenols. Journl of Agriculturl nd Food Chemistry 54: Singleton, V.; Rossi, J Colorimetry of totl phenolics with phosphomolybdicphosphotungstic cid regents. Americn Journl of Enology nd Viticulture 16: SPSS Inc SPSS Bse 15.0 user s guide. Chicgo, IL, USA. 591 pp. Stnciu, O.; Mrghits, L.; Dezmiren, D A comprison of methods used to define the ntioxidnt cpcity of bee pollen nd beebred from Romni. En:

5 Polifenoles totles en pn de bej (Apis mellifer L.) de colmens de l Región de L Arucní 111 Proceedings of the 43rd Crotin nd 3rd Interntionl Symposium on Agriculture. Optij, Criti. pp Stnciu, O.; Mrghits, L.; Dezmiren, D Exmintion of ntioxidnt cpcity of beebred extrcts by different complementry ssys. Bulletin of University of Agriculturl Sciences nd Veterinry Medicine Cluj-Npoc. Animl Science nd Biotechnologies 63(1-2): Tresserr-Rimbu, A.; Medin-Remón, A.; Pérez-Jiménez, J.; Mrtínez-González, M.A.; Covs, M.I.; Corell, D.; Sls-Slvdó, J.; Gómez-Grci, E.; Lpetr, J.; Arós, F.; Fiol, M.; Ros, E.; Serr-Mjem, L.; Pintó, X.; Muñoz, M.A.; Sez, G.T.; Ruiz- Gutiérrez, V.; Wrnberg, J.; Estruch, R.; Lmuel-Rventós, R.M Dietry intke nd mjor food sources of polyphenols in Spnish popultion t high crdiovsculr risk: The PREDIMED study. Nutrition, Metbolism & Crdiovsculr Diseses 23 (10): Yo, L.; Jing, Y.; Singnusong, R.; D Arcy, B.; Dtt, N.; Cffin, N.; Rymont, K Flvonoid in Austrlin Mlleuc, Guio, Lophostemon, Bnksi nd Helinthus honeys nd their potentil for florl uthentiction. Food Reserch Interntionl 37(2):

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