EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON ÁCIDOS GRASOS POLIINSATURADOS E INSEMINACIÓN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJÓ, SOBRE EL PORCENTAJE DE PREÑEZ EN VACAS BRAHMAN

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1 Universidad Nacional de Córdoba Facultad de Ciencias Agropecuarias Escuela para Graduados Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC) EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON ÁCIDOS GRASOS POLIINSATURADOS E INSEMINACIÓN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJÓ, SOBRE EL PORCENTAJE DE PREÑEZ EN VACAS BRAHMAN Emiro Fernández Buendía, Esteban Saldarriaga G. Trabajo Final Para optar al Título de Especialista en Reproducción Bovina Colombia, 2012

2 RESUMEN En este trabajo se comparó el efecto que tuvo la suplementación de ácidos grasos poli insaturados en un programa de IATF. Se evaluó en los animales la ganancia y/o pérdida de peso, el tamaño del folículo pre ovulatorio y el tamaño del cuerpo lúteo de dos tratamientos alternativos. Se utilizaron vacas multíparas de raza brahmán de 70 días de paridas y una condición corporal entre 2.5 y 3.5. Fueron divididas al azar en dos grupos. El grupo control no recibió ningún tipo de suplementación. El grupo experimental recibió una fuente rica en ácidos grasos poliinsaturados omega 3 y 6, 15 días antes del inicio de la IATF y durante 50 días posteriores a la IATF (diagnostico de preñez). En el día 0 los dos grupos de animales recibieron un dispositivo intravaginal impregnado de progesterona (DIB 0,5 gr) y se les administró 2 mg de benzoato de estradiol, por vía intramuscular (IM) profunda ( BE, Syntex SA, Luis Guillon, Pcia. Bs As, Argentina). En el día 8 se les retiró el implante y se les administro 2 mg de prostaglandina, por vía intramuscular (IM) profunda. En el día 10 se realizó la inseminación artificial a tiempo fijo entre 52 a 56 horas de retirado el dispositivo y se les administró 2.5 mg de Gonadorrelina, por vía intramuscular (IM) profunda, para sincronizar la ovulación. Luego fueron soltados con toros repasadores hasta el diagnostico de gestación. Durante el transcurso de los tratamientos los animales fueron examinados mediante ultrasonografía transrectal para observar el tamaño del folículo preovulatorio, del cuerpo lúteo y para chequear el diagnostico de preñez. Referente a los pesos de las vacas no se mostraron diferencias significativas al momento de pesarlas al inicio del experimento y al inicio de la IATF (G1= kg, G2= 446,76 kg), (G1= 431,61 kg, G2= 438,64 kg), (p>0,05), pero si se mostraron diferencias significativas en el pesaje en el diagnostico de gestación (G1= kg, G2= kg), (p=0,0349). También se mostraron diferencias significativas en el tamaño del folículo preovulatorio Folículo preovulatorio: (G1=14.51 mm) (G2=16.27 mm), (p=0,0018). Cuerpo lúteo: (G1=13.51 mm) (G2=14,63 mm), (p=0,007)

3 INTRODUCCIÓN En Colombia el ganado brahmán se ha convertido sin duda en la raza mas predominante por su acentuada tolerancia al calor, resistencia a las altas temperaturas, enfermedades como queratoconjuntivitis o anaplasmosis e infestaciones por parásitos internos y externos como las garrapatas, moscas, mosquitos y otros insectos. El pelo corto, brillante y grueso refleja los rayos del sol; su piel pigmentada y suelta le sirve de filtro a los rayos ultravioleta y favorece la perdida de calor, además su piel es rica en glándulas sebáceas actuando como repelente de los ectoparásitos. Las vacas Bos indicus en amamantamiento mantenidas en condiciones de pasturas naturales en Colombia, presentan una ciclicidad ovárica posparto, entre 217 a 278 días, dando como resultado un intervalo entre parto de 17 a 19 meses. Esto demuestra que el anestro posparto es uno de los principales factores que interfieren en la reproducción de los bovinos en el trópico. Ruiz y Olivera. (1999) La detección de celos en las vacas o novillas cebú se dificulta en una considerable proporción ya que su celo no se evidencia claramente por la poca cantidad de estradiol que liberan lo que hace que su celo sea corto, esto debido a estrés térmico al que están sometidas por las altas temperaturas del ambiente en el que se mantienen. (Galina et al., 1999) Como complemento de la IATF se tienen los ácidos grasos poliinsaturados ricos en omega 3 y 6 como fuente de alimento, los cuales ayudan a los animales a que el folículo preovulatorio y el cuerpo lúteo aumenten de tamaño. (De Fries et al., 1998). Esto contribuye a asegurar una adecuada liberación del ovulo y en caso de que los animales estén preñados, se libere por parte del cuerpo lúteo buenas cantidades de progesterona para así mantener la preñez. (Hightsho et al., 1991). Para poder incrementar los porcentajes de preñez, se cuenta con el conocimiento de cada una de las hormonas que intervienen en el desarrollo folicular y la fase lútea de la vaca lo que permite modificar el ciclo estral para lograr con esto, que los animales se acaloren en un día especifico para inseminarlos (IATF) y así evitar la detección de calores que es una de las principales causas del bajo porcentaje de preñez por celo natural que tenemos en nuestro país.

4 Hipótesis La suplementación de ácidos grasos poli insaturados y la inseminación artificial a tiempo fijo aumentan el porcentaje de preñez en vacas brahmán, produciendo un impacto positivo en la producción ganadera. OBJETIVOS Objetivo general Evaluar el efecto de la suplementación con una fuente de ácidos grasos poli insaturados en un programa de IATF Objetivos específicos Evaluar la ganancia y/o pérdida de peso antes del inicio de la IATF y al término de la suplementación con ácidos grasos poli insaturados. Determinar el tamaño del folículo preovulatorio previo a la IATF mediante ecografía Determinar la taza de preñez y el tamaño del cuerpo lúteo mediante ecografía el día 30 post IATF.

5 MATERIALES Y MÉTODO El trabajo se realizó en la hacienda la Parroquia, ubicada en el municipio de Caucasia departamento de Antioquia. Los animales utilizados para el experimento fueron vacas multíparas con cría al pie de raza brahmán rojo y blanco, con más de 70 días pos parto, con una condición corporal entre 2.5 y 3.5, con ovarios cíclicos (presencia de cuerpo lúteo o desarrollo folícular) y con un peso promedio de 450 a 500 kg. Los animales se encontraban pastoreando en brachiarias decumbens y humidicola, en un sistema rotacional de pasturas con un periodo de ocupación de 2 a 3 días y un periodo de descanso de 45 a 50 días. Las vacas fueron aleatoriamente divididas en dos grupos: El grupo 1 fue el control conformado por 66 vacas las cuales no recibieron ningún tipo de suplementación. El grupo 2 conformado por 67 vacas las cuales recibieron 150 gramos por animal día de una grasa rica en ácidos grasos poliinsaturado (TECNIGRAS) 15 días antes del inicio del protocolo de sincronización y durante el periodo previo a la palpación por ultrasonografía (día 50). La suplementación se les suministró en las horas de la mañana. El protocolo de sincronización a tiempo fijo utilizado para los dos grupos de animales fue de 3 manejos. En el día 0 los animales recibieron un dispositivo intravaginal impregnado de progesterona (DIB 0,5 gr) y se les administró 2 mg de benzoato de estradiol, por vía intramuscular (IM) profunda ( BE, Syntex SA, Luis Guillon, Pcia. Bs As, Argentina). En el día 8 se les retiró el implante y se les administró 2 mg de prostaglandina, por vía intramuscular (IM) profunda. En el día 10 se realizo a inseminación artificial a tiempo fijo entre 52 a 56 horas de retirado el dispositivo y se les administró 2.5 mg de GnRH (gestar), por vía intramuscular (IM) profunda, para sincronizar la ovulación. Luego fueron llevadas con toros repasadores hasta el diagnostico de gestación. Figura 1 Tratamiento utilizado. Las vacas recibieron en el día 0, 2 mg de benzoato de estradiol (BE Syntex SA.) junto con la aplicación de un dispositivo intravaginal de 0.5 gr de progesterona. En el dia 8 se retiraron los dispositivos y se administró 2 mg de D- cloprostenol por vía IM (prostaglandina, Calier Barcelona S.A). En el día 10 fueron inseminadas entre 52 a 56 horas de retirado el dispositivo y se les administró 2.5 mg de GnRH por vía IM.

6 VARIABLES ANALIZADAS CALIDAD DEL SEMEN Semen utilizado: Se utilizaron 4 toros de las razas holstein negro, holstein rojo, brahmán rojo y simmental. Se les realizó una evaluación espermática pos descongelación por microscopia electrónica para asegurar que el semen estuviera en perfectas condiciones. Los parámetros evaluados fueron Motilidad individual y motilidad masal PESO DE LAS VACAS Se realizaron tres tipos de pesajes. El día del inicio del experimento, el día de la IATF y el día del diagnostico de preñez. Con base a estos pesos se cálculo la pérdida o ganancia de peso por día tanto de los animales control como el experimental. DINÁMICA OVÁRICA Todos los animales fueron examinados por ultrasonografía transrectal (ALOKA SSD 500 acoplado a una sonda de 5 Mhz ) previo al inicio el experimento, en el momento de la IATF y en el diagnóstico de gestación. Previo al inicio del experimento se evaluó que las vacas tuvieran presencia de cuerpo lúteo o desarrollo folicular. En el momento de la IATF se midió el tamaño en mm del folículo preovulatorio y en el Dx de gestación el tamaño en mm del cuerpo lúteo. Se diagnosticaron las tasas de preñez con la IATF, con el repaso con toro y la tasa de preñez total para cada grupo. DETECCIÓN DE CELOS Los celos fueron observados visualmente 30 minutos por la mañana y 30 minutos por la tarde entre los días 18 a 24 después de la IATF. Para esto también se contó con la presencia de toros con desviación de pene. Se anotaron los animales que presentaron calor y los que se vieron recibiendo monta por los toros chequeadores y los toros repasadores. TOROS REPASADORES Fueron incluidos 3 toros repasadores para cada grupo. Antes de ponerlos con las vacas después de la IATF se les realizó un examen de aptitud reproductiva que consistió en lo siguiente: Examen físico general: Cabeza: Se observo que los ojos, boca y nódulos linfáticos no presentaran ninguna anormalidad.

7 Aplomos: Se miro que los animales estuvieran bien aplomados, que sus pezuñas no presentaran un crecimiento anormal y que no tuvieran malformaciones. Pene: Se examino la integridad de la mucosa, presencia de cicatrices, abscesos, hematomas, frenillo persistente y la integridad del orificio uretral. Escroto: Que fuera de buen tamaño, ni muy cortó ni largo y que no presentaran ningún tipo de lesión Testículos: Se observo el tamaño, forma, tono, simetría, posición y desplazamiento de ambos testículos. Circunferencia escrotal: Se determino la circunferencia escrotal por medio de un metro. Después se les hizo una toma de semen por electro eyaculador y se evaluó la motilidad individual y masal. INSEMINACIÓN ARTIFICIAL Y DIAGNÓSTICO DE PREÑEZ A los animales de ambos grupos se les realizó la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) en el día 10 (52 a 56 h posteriores a la retirada de los dispositivos). Para la inseminación se utilizó semen congelado/descongelado de 4 toros. El diagnostico de gestación se determino por medio de ultrasonografía a los 50 días post IATF (ALOKA SSD 500 acoplado a una sonda de 5 Mhz). Se espero a que cumplieran 50 días para así poder determinar con mayor certeza cuales animales estaban preñados por inseminación artificial y cuales por toro. MODELO Y ANÁLISIS ESTADÍSTICO Se utilizo un modelo completamente aleatorizado, donde la unidad experimental fue el animal, con 67 repeticiones para el tratamiento experimental y con 68 repeticiones para el grupo control. Para analizar el peso de las vacas y las crías, el tamaño del folículo preovulatorio y el tamaño del cuerpo lúteo se utilizo un modelo lineal con el procedimiento general AOV (Statistix, 1995). Las comparaciones de medias fueron evaluadas utilizando el test Tukey(P>0,05). Las tasas de preñez de la IA y la tasa de preñes de la IA+toro fueron analizadas utilizando el test de asociación chi-square test (Statistix, 1995).

8 RESULTADOS PESO DE LAS VACAS No se presentaron diferencias estadísticas significativas en los dos grupos de animales, al momento de pesar las vacas al inicio del experimento (G1= kg, G2= 446,76 kg) y al momento del comienzo de la IATF (G1= 431,61 kg, G2= 438,64 kg), (p>0,05). La media de peso de cada grupo es presentada en la tabla 1. Se presentaron diferencias significativas al momento de pesar los dos grupos de animales en el diagnostico de gestación, dando como resultado mayor ganancia de peso en los animales del grupo experimental, frente al control (G1= kg, G2= kg), (p=0,0349). La pérdida y/o ganancia de pesos de las vacas de los dos grupos es presentada en la tabla 1. Ambos grupos de vacas presentaron perdida de peso, debido a que las vacas tenían cría al pie y por qué la época en la cual se realizo el experimento era de verano intenso, lo que ocasionaba menor consumo de alimento por las altas temperaturas y por la elevada humedad relativa. Fueron detectadas diferencias estadísticas altamente significativas para la perdida de peso tanto en el periodo uno (desde el inicio de la suplementación hasta la IATF) (p=0,000), como en el periodo dos ( desde la IATF hasta el día del diagnóstico de gestación) (p= 0,001) siendo mayor la pérdida de peso en los animales que no recibieron la grasa técnica (TECNIGRAS ). Con esa probabilidad son diferencias altamente significativas. Tabla 1. Media de las perdida y/o ganancia de pesos en kg al momento del pesaje al inicio del experimento y al momento del inicio de la IATF. G1 PESO INICIO 457,53 a 446,76 a PESO IATF 431,61 a 438,64 a PESO DXCO PÑ 419,8 b 434,51 a GANANCIA 1-25,92 b -8,11 a GANANCIA 2-11,78 b -2,79 a a,b letras diferentes en la misma fila indican diferencia estadística significativa (p<0,05) G2

9 TAMAÑO DEL FOLICULO PREOVULATORIO El tamaño del folículo preovulatorio medido previo a realizar la inseminación artificial, fue significativamente mayor en el grupo experimental (16.27 mm) que el grupo control (14.51 mm), (p=0,0018). TAMAÑO DEL CUERPO LÚTEO El tamaño del cuerpo lúteo medido en el momento del diagnostico de preñez, fue significativamente mayor en el grupo experimental (14,63 mm) que el grupo control (13,51 mm), (p=0,007) Tabla 2. Medias del tamaño del folículo preovulatorio y del cuerpo lúteo para cada tratamiento GS TAMAÑO FOLICULO PREOVULATORIO 16,27 a GC 14,51 b TAMAÑO CUERPO LUTEO 14,63 a 13,51 b a,b letras diferentes en la misma fila indican diferencia estadística significativa (p<0,05) PORCENTAJE DE PREÑEZ DE LA IATF Y PORCENTAJE DE PREÑEZ DE LA IATF + REPASO CON TORO La tasa de preñez por IATF para el grupo control fue de %, y para el experimental de 46.26%. Defirieron estadísticamente (p<0,05). La tasa de preñez por IATF mas repaso con toro para el grupo control fue de 72,7 %, y para el experimental de 71,7 %. No presentaron diferencia estadísticas significativas entre los tratamientos. DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN Este trabajo tuvo como objetivo comparar dos tratamientos de IATF, uno con la suplementación de ácidos grasos poliinsaturados y otro sin suplementación, en un programa de IATF sobre el porcentaje de preñez. El grupo de vacas de la suplementación demostró tener un mejor porcentaje de preñez que el grupo control, estos resultados también han sido corroborados por diferentes autores. Los programas de IATF mediante los protocolos de sincronización han ayudado a los ganaderos a que los animales se preñen en un tiempo mas corto, reduciendo con esto los días abiertos e intervalos entre partos. Tal técnica posibilita que las inseminaciones

10 y preñeces se establezcan al inicio de un periodo determinado aumentando con esto la eficiencia reproductiva del rebaño (Baruselli et al., 2002) Las PUFAS (Poli-Saturates Fatty Acids) pueden elevar la fertilidad en los bovinos por diferentes cambios. Los ovarios, hay reportes de efectos de los ácidos grasos sobre el número y tamaño de folículos ováricos (Robinson et al., 2002 ; Bilby et al., 2006), aumento del tamaño del cuerpo lúteo (Raes et al., 2004 ; Bilby et al., 2006) y cualidades del ovocito (Kin et al., 2001 ; Zeron et al., 2002) Con relación a las estructuras ováricas, vacas suplementadas con dietas ricas en PUFAS (Poli-Saturates Fatty Acids) tuvieron folículos dominantes mayores (Starples et al., 1998 ; Robinson et al.,2002), concordando con los resultados obtenidos en el experimento 16.27mm en el grupo suplementado y 14.51mm en el grupo control. De la misma forma (Staples et al., 2000) obtuvieron un mayor tamaño de folículos ovulatorio en vacas de suplementada con PUFAS en comparación con los que recibieron acido oleico en la dieta. De acuerdo con Mattos et al., (2000) la suplementación de hembras con lípidos, presentan una respuesta positiva en el desempeño reproductivo de vacas en lactación modificando la estructura folicular del cuerpo lúteo a través de la modulación de percusores hormonales y por el aumento del ofrecimiento energético del animal. La suplementación estratégica de hembras durante la estación de monta podrá constituir una alternativa para mejorar la eficiencia reproductiva del rebaño y anticipar la tasa de concepción. La suplementación con ácidos grasos asociados a IATF puede crear condiciones para aumentar la eficiencia reproductiva. Madureira et al., (2006) dice que esta asociación aumenta la taza de preñez y disminuye el intervalo entre partos. Rodriguez et al., (2008) reportó que los ácidos grasos poliinsaturados aumentan las tasas de preñez, ya que incorporan energía en la dieta, estimulando la formación de folículos mas grandes que dan origen a cuerpos lúteos mayores. Son una fuente de colesterol para la producción de hormonas esteroideas (progesterona) y mejoran la fertilización y el desenvolvimiento embrionario. Williams et al., (2000) reportó que con los ácidos se incrementa las concentraciones plasmáticas de progesterona, se incrementa el tiempo de vida del cuerpo lúteo y se incrementa el número de ovulaciones. El tamaño del cuerpo lúteo está directamente relacionado con el volumen del cuerpo lúteo formado por las cantidades de progesterona producidos por este (Sartori et al., 2002; Bilby et al., 2006). Cuerpos lúteos de mayor tamaño producen volúmenes mayores de progesterona favoreciendo potencialmente el ambiente uterino y la taza de preñez (Moreno et al., 2003; Tatcher et al., 2006). Estas respuestas dependen del tipo de acido graso suplementado, siendo los ácidos grasos de la familia

11 Omega 3 y Omega 6 los que están presentando mejores resultados (Santos et al., 2008) Vacas suplementadas con acido linoléico tienen cuerpos lúteos cinco milímetros mayores que los cuerpos lúteos de vacas no suplementadas (Garcia-Bojalil et al., 1998). Existe una relación directa entre la suplementación con grasa y mayores concentraciones de hormona esteroides circulantes. Se dice que por medio de las PUFAS (Poli-Saturates Fatty Acids) se aumenta la pulsatilidad de LH (Hightshoe et al.,1991) ; y en consecuencia el aumento del tamaño del folículo pre ovulatorio y cuerpo lúteo (Raes et al., 2004). Otra ventaja es el aumento de las concentraciones circulante de colesterol, precursor de la síntesis de esteroides (Thomas et al., 1997) alterando la síntesis de prostaglandinas ( Chidlds et al., 2008). López et al., (2009) realizó un experimento suplementando con Megalac-E durante el inicio del protocolo de sincronización del estro y 28 días después de la I A T F a vacas Nelore lactando, y obtuvo tasas de preñez superiores (51.2% n 451) frente al grupo control ( 39.6% n 459 ; p= 0,04). Estos resultados son muy similares a los obtenidos en nuestro experimento 46.26% para el grupo suplementado y 34.84% para el grupo control. Un experimento realizado con semillas de girasol ricas en linoléico como suplemento se le suministro a vacas Nelores pos parto (n 133) durante el momento de la IA hasta 22 días pos IA y se observo un aumento de 20.4 en la tasa de preñez para las vacas que recibieron esta dieta (Pérez et al., 2008). Los ácidos grasos también aumentan la condición corporal de los animales. Bottger et al., (2002) demostró que animales suplementados con PUFA tenían mejor puntaje de condición corporal y consecuentemente mejor desempeño reproductivo. Como conclusión se puede decir que la suplementación con PUFAS (Poli-Saturates Fatty Acids) son una fuente de alimento importante para mejorar la taza de preñez de los animales, y queda claro que los beneficios en cuento al aumento del tamaño del folículo preovulatorio, cuerpo lúteo y ganancia de condición corporal son muy buenos, logrando con esto el objetivo buscado que es incrementar los porcentajes de animales preñados.

12 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Baruselli, P.S.;Marques, M.O.;Carvalho, N.A.T.;Madureira, E.H.;Campos Filho, E.P. Efeito de diferentes protocolos de inseminação artificial em tempo fixo na eficiência reprodutiva de vacas de corte lactantes. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v.26, n.3, p , Bilby, T. R., et al. Effects of Dietary Unsaturated Fatty Acids on Oocyte Quality and Follicular Development in Lactating Dairy Cows in Summer. journal dairy science, 2006: Bottge, J.D., Hess, B.W., Alexander, M., Hixon, D. L., Woodard, L.F., Funston, R.N., Hallford, D.M. e Moss, G.E. Effects of supplementation with high linoleic or oleic cracked safflower seeds on postpartum reproduction and calf performance of primiparous beef heifers. Journal of animal science. 2002: Childs, S.; Carter, F.; Lynch, C.O.; Sreenan, J.M.; Lonergan, P.; Hennessy, A.A.; Kenny, D.A. Embryo yield and quality following dietary supplementation of beef heifers with n-3 polyunsaturated fatty acids (PUFA). Theriogenology, v.70, p , 2008a. Galina C, Orihuela A, Rubio I. Behavioral trends affecting oestrus detection in Zebu cattle. Animal Reproduction Science 1996; 42: Garcia-bojalil, C.M., Staples, C.R., Risco, C.A., Sávio, J.D., e Thatcher, W.W. Protein Degradability and Calcium Salts of Long-Chain Fatty Acids in the Diets of Lactating Dairy Cows: Reproductive Responses. Journal Dairy Sciences. 1998: Hightshoe, R.B.; Cochran, R.C.; Corah, L.R.; Kiracofe, G.H.; Harmon, D.L.; Perry, R.C. Effects of calcium soaps of fatty acids on postpartum reproductive function in beef cows. Journal of Animal Science, v.69, p , Kim, M.; Kinoshita, J.Y. Lipid and fatty acid analysis of fresh and frozen-thawed immature and in vitro matured bovine oocytes. Reproduction, v.122, p , Lopes, C.N.; Scarpa, A.B.; Cappellozza, B.I.; Cooke, R.F.; Vasconcelos, J. L. M. Effects of rumen-protected polyunsaturated fatty acid supplementation on reproductive performance of Bos indicus beef cows. Journal of Animal Science, v.87, p , doi: /jas Madureira, E.H.;Fernandez, R.H.R.;Rossa, L.A.F.;Pimentel, J.R.V.;Braga,

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