Aplicación de HPLC-CG-MS en Toxicología Analítica: Biomarcadores de Exposición

Transcripción

1 Aplicación de HPLC-CG-MS en Toxicología Analítica: Biomarcadores de Exposición Coordinadoras: Yalitza Aular Yolima Fernández Amalia Franco Gabriela Romero Maritza Rodríguez Aura Palencia

2 Multidimensional HPLC+GC-MS vs LC-MS-MS: uso extensivo de compuestos no volátiles y polares en el análisis clínico utilizando derivatización on-line Nieves Sarrión 1, Josep M ª Gibert 1 David Alonso 1 Amalia Franco 2 1 KONIK-Tech S.A 2 Albis venezolana, C.A amalia@albis.com.ve Introducción: La innovadora plataforma multidimensional KONIK basada en la interfaz TOTAD patentada (Patente EE.UU. Nº B1), combina sinergísticamente la separación y el potencial de fraccionamiento del HPLC con la separación, detección selectiva y capacidades de cuantificación de HRGC. La interfaz TOTAD ha sido un revolucionario avance de la química analítica. Esta ha facilitado no sólo el acoplamiento directo en línea del HPLC con el GC o GC-MS, también se ha implementado en la derivatización compuestos no volátiles y polares en línea teniendo acceso a un universo de analítos, antes no imaginado, utilizando técnicas de cuantificación y caracterización tradicionales como las de GC-MS. Objetivo: Demostrar con ejemplos las aplicaciones de este sistema multidimensional que se puede utilizar como una técnica universal altamente competitiva con la costosa técnica LC-MS-MS. Resultados: En el presente trabajo se demuestra el poder analítico del sistema de derivación en línea para varias aplicaciones clínicas de interés: el análisis de impurezas en las drogas ilícitas de dosis sólida y la determinación de fármacos y sus metabolitos en muestras biológicas. Los parámetros de calidad de la técnica y el análisis de muestras reales se presentan para cada aplicación. Conclusiones: Se demuestra que la instrumentación del sistema K2 o K2Q12 KONIK permite una fácil identificación de los compuestos sobre la base de las bibliotecas de GC- MS, ofreciendo una muy buena sensibilidad y un costo más barato en términos de análisis por muestra, resultado una alternativa altamente competitiva con la técnica LC-MS-MS ampliamente conocida para este tipo de análisis. Palabras clave: cromatografía multidimensional, derivatización en línea, aplicaciones (química forense).

3 Exposición a Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos en diferentes áreas laborales. Experiencia de la UTM Gabriela Romero. Universidad de Carabobo. gvromero@uc.edu.ve Introducción: Los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAPs), derivados poliméricos del benceno, se forman por la combustión incompleta de la materia orgánica procedente de fuentes naturales o antropogénicas entre las que se encuentran las emisiones industriales, vehiculares y el humo del cigarrillo, contaminan el ambiente y causan enfermedades graves a la población. La exposición a HAPs es medida a través del biomarcador 1-Hidroxipireno (1-OHP), metabolito del pireno. Objetivo: Determinar 1-OHP en trabajadores de diversas áreas laborales (estaciones de servicio, industria de la goma, industria petroquímica, expendios de comida) del estado Carabobo a fin de establecer valores de exposición propios de nuestra población. Metodología: En la Unidad de Investigación en Toxicología Molecular de la Universidad de Carabobo mediante estudios descriptivos se ha determinado el 1-OHP urinario por Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia con detección fluorimétrica. Resultados: El biomarcador aparece en concentraciones más altas en los individuos expuestos en las diferentes áreas laborales, en comparación con los grupos que han sido referidos como control, presentándose diferencias significativas entre los grupos en cada área. Así mismo se ha observado como algunos hábitos del estilo de vida (fumar, o consumo de alimentos asados a la parrilla) incide de forma importante en los valores del metabolito en los individuos no expuestos. Conclusión: 1-hidroxipireno es un biomarcador que pone en evidencia la contaminación del microambiente laboral por HAPs. Palabras clave: HAPs, 1-Hidroxipireno, exposición laboral.

4 Ácidos grasos totales y perfil lipídico en trabajadores expuestos a tolueno en una empresa de calzados. Maritza Rodríguez Universidad de Carabobo marod31@hotmail.es Introducción: Los lípidos ingeridos con los alimentos tienen efecto en la formación y funcionamiento del cerebro, órgano principalmente afectado por el tolueno. Objetivo: evaluar niveles de ácidos grasos totales y perfil lipídico en trabajadores expuestos al tolueno, en una fábrica de calzados. Metodología: Investigación no experimental, de corte transversal, descriptivo y de campo. Se seleccionaron 30 trabajadores, para Grupo Expuesto (GE), y 24 individuos sin exposición conocida al tolueno para Grupo Control (GC). Se determinaron concentraciones de Ácido hipúrico (AH-O) y creatinina en orina, colesterol, triglicéridos, HDL-c, LDL-c y VLDL, por colorimetría y ácidos grasos totales (AGT) séricos, por Cromatografía de gases. Resultados: El GE presentó una concentración de AH-O significativamente superior (p<0,01) al GC. Al asociar AH-O con género, resultó significativo para el género femenino p=0,031. En relación al perfil lipídico no se encontró una diferencia estadísticamente significativa (p>0.05) entre los grupos. Se evidenció diferencia significativa (p> 0.05) para los ácidos láurico, mirístico, behénico y tricosílico entre GE y GC. Al comparar valores de AGT en GE con AH-O por debajo y por encima de 1,6 g/g de creatinina, se observó una diferencia estadísticamente significativa superior para el γ linolenico y eicosapentaenoico p=0,019 y p=0,009 respectivamente. Conclusión: Los valores de AH-O en GE evidencian una exposición crónica al tolueno. Se infiere que la presencia de ácidos grasos saturados estaría asociada a los hábitos alimenticios y estilos de vida. Sin embargo los niveles del perfil lipídico por debajo de los rangos, podrían estar favorecidos por el carácter lipofílico del tolueno. Palabras clave: Ácidos grasos totales, perfil lipídico, tolueno, y exposición laboral.

5 Determinación de cotinina urinaria por HPLC-UV Aura Palencia Universidad de Carabobo Introducción: La cotinina urinaria es considerado el biomarcador más adecuado para valorar la exposición al humo del tabaco ambiental por su mayor especificidad, no obstante el punto de corte para establecer dicha exposición no está bien definido, y en la literatura no existe un consenso al respecto. Objetivo: Determinar cotinina urinaria por HPLC-UV en niños expuestos al humo de tabaco ambiental. Metodología: se aplicaron encuestas a los padres y/o representantes de los niños que accedieron participar con el fin de obtener información relacionada con el hábito tabáquico de los padres y la exposición de los niños. La muestra estuvo conformada por 44 niños expuestos y 36 niños no expuestos a los cuales se les determinó cotinina en orina parcial, y se ajustó con la creatinina para obtener el cociente cotinina/creatinina ( C / C ) en la Unidad de Investigación en Toxicología Molecular de la Escuela de Bioanálisis (UC-Sede Carabobo). Resultados: se evidencia una concentración mayor de cotinina y C / C en el grupo de expuestos (p= 0,001). Mediante curvas ROC, se estableció un punto de corte para cotinina >12 ug/l (sensibilidad: 97,6%, especificidad: 64,9%) y > 8,5 ug/g para C / C (sensibilidad: 97,6% - especificidad: 62,2 %). Conclusión: Al utilizar estos puntos de corte, se observa un incremento en el número de expuestos con respecto al obtenido en las encuestas, por lo tanto se evidencia la necesidad de establecer la exposición al humo de segunda mano a través de la determinación de biomarcadores como la cotinina. Palabras clave: cotinina urinaria, HPLC-UV, humo de tabaco ambiental, exposición infantil.