HEMATOLOGIA Y BIOQUÍMICA SANGUÍNEA.

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1 HEMATOLOGIA Y BIOQUÍMICA SANGUÍNEA. HEMATOLOGÍA Técnicas hematológicas Volumen de muestra máximo 1% del peso corporal (expresado en ml ) Puntos de extracción Vena yugular derecha, vena cutánea cubital (a nivel del codo), vena braquial (cara ventral del húmero), vena medial metatarsal (por encima de la articulación metatarsal), corte de uña Anticoagulantes Heparina : 25 UI por ml de sangre. Suele provocar artefactos de tinción. Ideal si se desea obtener plasma. EDTA : 1-2 mg de EDTA por ml de sangre. Anticoagulante de elección en hematología si el almacenamiento de la muestra no es prolongado Extensión Técnica de portaobjetos-portaobjetos, portaobjetos-cubreobjetos o cubreobjetos-cubreobjetos ( minimiza el daño celular). Tinción Tipo Romanowsky para hematología Parámetros hematológicos Serie roja: Valor Hematocrito, Sólidos Totales, Recuento Total de Eritrocitos, Concentración de Hemoglobina, Índices Eritrocitarios y Recuento de Reticulocitos e Índice de eritrocitos policromáticos. Serie Blanca: Recuento Total de Leucocitos y Recuento Diferencial de Leucocitos. Dado que todas las células sanguíneas de las aves son nucleadas, los contadores electrónicos de células sanguíneas no pueden emplearse en para el estudio del leucograma es hematología aviar. En la práctica clínica se usan métodos hemacitométricos para realizar los recuentos celulares. El método de Natt y Herrick permite el recuento de eritrocitos y leucocitos simultáneamente. El procedimiento y características se especifican en la tabla siguiente: Método de Natt y Herrick para recuento de eritrocitos y leucocitos Se trata de un método directo. El violeta de metilo 2B tiñe todas las células con diferentes tonos de azul Material: Camara de Neubauer modificada Pipeta hemacitométrica de bola roja Aspirar sangre hasta la marca 0.5 y limpiar la parte exterior de la pipeta Aspirar solución de Natt y Herrick hasta la marca 101 (Dilución 1 : 200) Mezclar durante 1-2 minutos. Desechar las primeras gotas, llenar la cámara de recuento y esperar 3 minutos Contar el número total de eritrocitos en cinco cuadros ( cuadros de las esquinas y el cuadro central) del retículo central de un lado de la cámara de recuento Multiplicar el número de eritrocitos por ( Expresado en eritrocitos/ul) Contar el número total de leucocitos en los nueve cuadros grandes de un lado de la cámara y aplicar la fórmula : Recuento Total de Leucocitos (células/ul) = Leucocitos contados x 1.1x 200 Los leucocitos se tiñen de color azul oscuro Composición de la Solución de Natt y Herrick NaCl 3.88 g Na 2 SO g

2 Na 2 HPO 4 x 12 H2O 2.91 g KH 2 PO g Formalina 37% 7.5 ml Metil Violeta B 0.10 g Disolver en el orden indicado y disolver en agua destilada hasta un volumen total de 1000 ml. Se deja 12 horas en reposo y posteriormente se filtra (paper Whatman nº 2). El ph final ha de ser de 7.3 Otro método hemacitométrico frecuentemente empleado es el sistema Unopette 5877 de eosinófilos (Becton-Dickinson, Rutherford, NJ 07070). En al tabla siguiente se resume el procedimiento: Método Unoppette para recuento de leucocitos Se trata de un método indirecto. La floxina B tiñe especificamente heterófillos y eosinófilos. Llenar la pipeta Unopette con sangre (25ul) Mezclar durante menos de 5 minutos, desechar las primeras gotas, cargar la cámara de recuento y esperar 5 minutos. Contar los leucocitos granulocitos en todo el retículo a ambos lados de la cámara de recuento Los heterófilos, eosinófilos se tiñen de color rojo-anaranjado y aparecen redondos y refráctiles Realizar el Recuento diferencial a partir de la extensión Calcular el recuento total de leucocitos aplicando la fórmula: Recuento Total de Leucocitos (por ul) = Número de células teñidas contadas x 1.1x 16x 100 % Heterófilos + % Eosinófilos Método estimativo: Aunque se trata de un método menos preciso, el recuento estimativo de leucocitos a partir de la extensión de sangre es fácil de realizar y posee un gran valor diagnóstico. Se cuentan los leucocitos en 10 campos de 40x, se calcula la media y se multiplica por Estudio de trombocitos: Método estimativo : Consiste en contar el número de trombocitos en cinco campos de immersión y aplicar la Fórmula : Recuento estimado de trombocitos (trombocitos/ul) = Media de trombocitos en cinco campos x Si el valor hematocrito no se encuentra en el rango normal (35-55%) se realiza una corrección del recuento mediante la Fórmula : Recuento estimado x Hematocrito observado Hematocrito normal Estudio del frotis sanguíneo: Se basa en la evaluación de las células sanguíneas y la valoración de la morfología, abundancia relativa de cada tipo celular y presencia de hemoparásitos.

3 Morfología de las células sanguíneas de las aves Eritrocitos La célula madura es oval o elíptica, con citoplasma anaranjado, núcleo oval de color púrpura situado centralmente. Las formas inmaduras son más redondeadas y con citoplasma azulado (basófilo). En aves sanas son frecuentes formas juveniles Leucocitos Heterófilos Gránulos alargados o redondeados eosinófilos. Citoplasma incoloro Eosinófilos Gránulos redondos, eosinófilos y refráctiles. Citoplasma azulado, ligeramente granulado. Las rapaces sanas poseen un número elevado de eosinófilos Basófilos Célula de pequeño tamaño con gránulos intensamente basófilos. Monocitos Forma irregular. Núcleo redondo, bilobulado, normalmente excéntrico; citoplasma azulgris, finamente granulado o vacuolado Linfocitos Núcleo normalmente redondo y central, con cromatina condensada. Alto ratio núcleo/citoplasma (escaso citoplasma) Citoplasma basófilo. Se diferencian tres poblaciones celulares (medianos, pequeños y grandes). Trombocitos Citoplasma claro o ligeramente azulado. Núcleo oscuro. Pueden observarse gránulos de color magenta. Menor tamaño que el eritrocito. Hemoparásitos Género Características Vector Cuadro clínico Aves afectadas Haemoproteus Gametocito en Culicoides, Anemia en casos Palomas eritrocitos; moscas de infección Anseriformes, esquizogonia en hipoboscidas masiva rapaces, células endoteliales Passeriformes, (pulmón, hígado, riñón) Psitaciformes Leucocytozoon Gametocito en Simulium, Anemia, disnea, Anseriformes, eritrocitos y leucocitos Culicoides muerte súbita Galliformes, ;esquizogonia en Passeriformes, células endoteliales Psitàcides y rapaces (pulmón, hígado, riñón) Plasmodium Gametocitos i Mosquitos Anemia, Pingüinos, rapaces, esquizontes en (Aedes, debilidad, muerte Passeriformes, eritrocitos Culex) súbita Galliformes, Anseriformes BIOQUÍMICA SANGUÍNEA: Técnica: Las determinaciones se realizan a partir de suero o plasma heparinizado. Parámetros recomendados : AST, Ácidos biliares, Glucosa, Calcio, Creatínfosfoquinasa, Ácido úrico, Proteínas totales Plasmáticas, Fibrinógeno y Cociente albúmina/globulinas. Parámetro Indicación Interpretación comentario Proteínas totales Enfermedad gastrointestinal, hepática o renal. Durante la puesta, deshidratación, enfermedades infecciosas crónicas. Malnutrición, parasitismo, enteropatía, Se aconseja el empleo de técnicas colorimétricas (Biuret/Lowry) ya que el

4 enfermedad renal, estrés y enfermedad hepática crónica Cociente Procesos inflamatorios, Enfermedad infecciosas crónicas Albúmina : Globulinas enfermedad hepática, (Tuberculosis, Clamidiosis, Aspergilosis), gastrointestinal y renal hipoalbuminemia (hepatopatía, nefropatía). Glucosa Convulsiones, glucosuria Estrés, diabetes mellitus e hipertermia Inanición, malnutrición, septicemia y enfermedad hepática Colesterol Lipidosis hepática Hipotiroidismo, enfermedad hepática, dieta rica en grasas, obstrucción de conductos biliares Enfermedad hepática, aflatoxicosis, dieta baja en grasa Acido úrico Enfermedad renal Fallo renal, ayuno, trauma tisular, contaminación de la muestra con uratos. método refractométrico es inexacto Permite evaluar la respuesta al tratamiento Si se realiza la determinación en menos de dos horas no es necesario emplear floururo sódico para prevenir glucólisis Escaso valor diagnóstico Representa el % del total del nitrógeno excretado Urea Deshidratación Deshidratación, obstrucción ureteral. La reabsorción en túbulos renales depende del grado de hidratación. Creatinina Deshidratación, Deshidratación, fallo renal Elevación artefactual debido a cromógenos Ácidos biliares Enfermedad hepática Enfermedad hepática Aspartato Aminotransferasa Lesión hepática o muscular Enfermedad de Pacheco, Clamidiosis, intoxicaciones, necrosis muscular. No específica de enfermedad hepática Creatín fosfoquinasa (CK) Sodio Potasio Calcio Lesión muscular Colapso circulatorio, diarrea, vómito, quemaduras Diarrea, vómito, parálisis, arritmias, debilidad, tratamientos con diuréticos Temblores, ataques, poliuria polidipsia, arritmias Necrosis muscular, inyecciones intramusculares, deficiencia de Vitamina E y Selenio, clamidiasis, septicemia, neuropatías e intoxicación por plomo Deshidratación, intoxicación por sal Diarrea, enfermedad renal, insuficiencia adrenocortical Enfermedad renal, insuficiencia adrenocortical, deshidratación, acidosis, ingestat excesiva de potasio Diarrea crónica, dieta deficitaria, anorexia, vómito, alcalosis Hipervitaminosis D 3, durante la puesta Hipoalbuminemia, hiperparatiroidismo nutricional avanzado Tabla: Parámetros de bioquímica sanguínea en aves y su aplicación en el diagnóstico BIBLIOGRAFIA SELECCIONADA 1. Campbell TW: Avian hematology and Cytology. Ames, Iowa State University Press, Dein FJ: Laboratory Manual of Avian Hematology. American Association of Avian Veterinarians (ed). New York, Fudge AM: Blood testing artifacts: Prevention and interpretation. Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine 1994; 3(1):2-4. Permite diferenciar lesión hepática de lesión muscular Los valores son falsamente bajos si existe hiperlipemia o hiperproteinemia En muestras de suero, el tiempo de almacenamiento provoca un descenso en la concentración de potasio. Los valores son falsamente bajos si existe hiperlipemia o hiperproteinemia Debe medirse la concentración de albúmina.

5 4. Greiner EC, Ritchie BW: Parasites. En: Ritchie, BW, Harrison GJ, Harrison LR (ed): Avian Medicine: Principles and application. Florida: Wingers Publishing 1994: Hernández M: Blood Chemistry in Raptors. En: Proceedings of the Conference of the European Commitee of the American Association of Avian Veterinarians 1991: Hernández M: Raptor clinical haematology. En: Proceedings of the Conference of the European Commitee of the American Association of Avian Veterinarians 1991: Joseph V: Raptor hematolgy and chemistry evaluation. Veterinary Clinics of North America: Exotic Animal Practice (3): Lane RA: Avian Hematology: Basic cell identification, white cell count determination, and clinical pathology. En: Rosskopf WJ, Woerpel RW (ed): Diseases of cage and aviary birds. Baltimore, Williams & Wilkins, 1996; Lucas AJ, Jamroz C: Atlas of Avian Hematology. Washington DC, United States Department of Agriculture, Lumeij JT: Biochemistry and sampling. En: Benyon PH (ed): Manual of raptors, pigeons and waterfowl. Gloucestershire: British Small Animal Veterinary Association 1996: Natt MP, Herrick CA: A new diluent for counting erytrhocytes and leucocytes of the chicken. Poultry Science 1952; 31:

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