Métodos de esterilización y desinfección

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1 Objetivo Métodos de esterilización y desinfección Curso: Métodos en Fitopatología 24 de abril de 2012 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp Que el estudiante se familiarice con los procesos de desinfección y esterilización comúnmente utilizados en un Laboratorio de Fitopatología. Definiciones Esterilización = proceso mediante el cual se matan o eliminan todas las formas de vida microbiana. estéril o no estéril. Desinfección = eliminar microorganismos patógenos total o parcialmente niveles de desinfección. Definiciones Asepsia = exclusión continuada de microorganismos contaminantes. Antiséptico = sustancia que impide del crecimiento de microorganismos, aplicado a superficies corporales Muerte de una población microbiana Métodos de esterilización % sobrevivientes FISICOS: Calor seco húmedo Radiaciones MECÁNICOS Filtración QUIMICOS Gaseosos No gaseosos tiempo 1

2 Métodos físicos de esterilización 1. Calor seco Calor seco 1. Fuego directo 2. Hornos Fuego directo Para objetos de metal Según el metal: anzas directamente al fuego, pinzas, bisturíes, agujas pasar por etanol 96 y flamear Ídem portaobjetos, cubres. Esterilización directa en la llama Ansas Esterilización directa en la llama Esterilización directa en la llama 2

3 Calor seco - Horno Actúa oxidando y desnaturalizando las proteínas. Solo para materiales resistentes al calor y no inflamables. Se utiliza para: vidrios instrumentos quirúrgicos objetos metálicos aceites, vaselinas y polvos Calor seco Calor seco T ºC Calor seco Recipientes de metal o envolver en papel horas (usar temp. menor en este caso) Temperaturas: 180 ºC min. 170 ºC min Precauciones: vidrio debe estar seco No usar para esterilizar vidrio graduado Dejar que vuelva a temp. ambiente antes de abrir Calor húmedo Métodos físicos de esterilización 1. Calor seco 2. Calor húmedo Pasteurización: T < 100 C Salmonella Ebullición y Tindalización: T = 100 C mayoría de formas vegetativas de hongos, bacterias y virus lipídicos Tindalización: T = 100 C x 3 veces estéril Autoclavado: T > 100 C 3

4 Calor húmedo Con presión: autoclave, olla presión Para sustancias estables al calor tener en cuenta combinaciones reactivos a temp altas Temperatura presión tiempo Autoclave Temp Tiempo 20 h 2,5 h 51 min. 15 min. 6,4 min. 2,4 min. Autoclave Autoclave Presión (lb/in.) Temperatura interna (ºC) según % aire eliminado 100% 66% 50% 33% 0% Calor húmedo - Autoclave cómo optimizar eficacia? eliminar aire, contenidos similares, no apretados, dejar espacios verticales, Precauciones: tapas sueltas, recipientes con hasta 1/3 de volumen, vuelta a presión normal lenta. Autoclave 1. Poner agua (si es necesario) 2. Colocar medios, etc. 3. Cerrar bien tapa 4. Abrir válvula de desagote 5. Encender fuente de calor 6. Desagotar aire 7. Cerrar válvula 8. Vigilar presión, computar tiempo cuando llega a 15 lb 9. Luego de min. apagar fuego y dejar enfriar 10. Abrir válvula luego de >20 min. 4

5 Controles de esterilización Controles físicos Existen tres tipos: Físicos Químicos Biológicos Controlan parámetros como: Temperatura Presión Tiempo Controles químicos Cinta de papel adhesivo indicador de temperatura Controles biológicos Esporas de Bacillus estearothermophilus que se exponen a ciclo de esterilización Más seguro. Por qué raramente se usan en Laboratorios de Fitopatología? Radiaciones Métodos físicos de esterilización 1. Calor seco 2. Calor húmedo 3. Radiaciones UV-A : nm UV-B : nm UV-C : nm Gamma 5

6 Radiaciones UV Radiaciones UV Mecanismo de acción: se atribuye a absorción por ADN uniones covalentes entre residuos de pirimidina pertenecientes a la misma cadena distorsiones del DNA apareamiento de bases inhibición de la síntesis de ADN inhibición del crecimiento y la respiración. Igualmente efectivas para Gram(+) y Gram (-). Uso principal: esterilizar el aire y superficies no penetran en sólidos y pobremente en líquidos. Esterilización por filtrado Métodos mecánicos de esterilización Filtración Elimina microorganismos >virus Ventaja: no modifica composición Para: cantidades pequeñas Para: vitaminas, hormonas, antibióticos, etc. Filtración Requiere bomba de vacío De diferentes materiales: vidrio: re-usables, se lavan con ácidos fibras de amianto y celulosa: 1 uso, sitios de adsorción membranas de ésteres de celulosa: 1 uso, poros de 0,22 µm Filtración Lenta y costosa. Se usa sólo para sustancias termolábiles, que no se pueden esterilizar en autoclave. 6

7 CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR Métodos químicos de esterilización 1. Esterilización 2. Desinfección Nivel de desinfectantes De alto nivel: Oxido de etileno, formaldehido, etc. De mediano nivel: Clorados, iodados, alcoholes, fenólicos, etc. De bajo nivel: Compuestos de amonio cuaternario, mercuriales Esterilización química Ventajas: no requiere altas temp ni aparatos costosos Desventajas: mayor tiempo, sustancias inflamables y muy tóxicos y alto costo Oxido de etileno: muy efectivo pero mutagénico, inflamable en contacto con aire, hierve a 10,8ºC Formaldehído (formol): gases altamente irritantes, tóxicos y carcinogénicos. 7

8 Desinfectantes de mediano nivel Agentes oxidantes: Clorados se inactiva con materia orgánica se inactiva con luz se inactiva con algunos detergentes renovarse mensualmente los preparados Iodados Desinfectantes de mediano nivel Alcoholes desnaturalizan proteinas Alcohol etílico rectificado 95% - deshidrata rápidamente y no penetra Alcohol etílico 70% - más efectivo Inactivado por materia orgánica Disminuye tensión superficial Se evapora sin dejar residuos Desinfección de tejido vegetal Desinfección superficial 1. De superficies inertes 2. De material vegetal Desinfección superficial Técnicas comunes en Fitopatología: Lavado previo en agua corriente detergente? cepillo? Agua corriente 2 o más horas Alcohol 70% Hipoclorito de sodio: 1% Cloro activo, 2 %, 0,35% etc. minutos enjuague posterior Desinfección Selección de técnica(s) según: tejido: grosor, consistencia hongo a aislar: ej. Oomycetes, Rhizoctonia dónde pensamos que está el patógeno 8

9 Biliografía Vignoli, R. Esterilización y desinfección.21p pdf Laboratorio de Microbiología. Métodos de Esterilización. d_farmacia/catedramicro/10_m%c3%a9todos_ de_esterilizaci%c3%b3n.pdf 9

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