LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL Grupo 02 (10:00 13:00 hrs) Semestre Profesores: Guadalupe Tsuzuki Reyes y Rosalba Esquivel-Cote

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1 Sema na 3 Semana 2 Semana 1 LABORATORIO DE EXPERIMENTAL Grupo 02 (10:00 13:00 hrs) Semestre Profesores: Guadalupe Tsuzuki Reyes y Rosalba Esquivel-Cote CALENDARIO DE ACTIVIDADES PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 5 AGOSTO Miércoles 7 AGOSTO Presentación. Organización. Forma de evaluación. 1. BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO Explicación acerca del Formato para entregar Reportes AUDIOVISUAL 11:00 a.m. Revisión de los siguientes videos: Técnica aséptica Trabajo en el laboratorio Y el reglamento? Conseguir candado y material básico para limpieza para siguiente clase. Lectura del manual de higiene y seguridad para discutir en clase. P1 Bioseguridad. Análisis del reglamento de seguridad e higiene. Cuestionario del Reglamento de Bioseguridad e Higiene. Traer candado y material básico para limpieza Conseguir una letra muy pequeña y asimétrica (a, e, f, t, r, p) recortada de periódico o revista, para siguiente clase. Traer pulque (200 ml/grupo) Microscopio Uso del microscopio Frotis Tinción simple PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 12 AGOSTO Miércoles 14 AGOSTO P2.1 Uso y cuidado del microscopio de campo claro. Presentación del microscopio. Enfoque de letra asimétrica. P2.2 Preparaciones microbiológicas. P2.2.3 Preparaciones fijas. P2.2.4 Tinción simple Manejo de la zona aséptica. Traer una letra muy pequeña y asimétrica. 200 ml de pulque Organizar material en gavetas (20 min) P2.2 Preparaciones microbiológicas. P2.2.5a y P2.2.5b Tinciones diferenciales (Tinción Gram y Ziehl-Neelsen). Reporte 1: Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiología Cuestionario del artículo Laboratorios de bioseguridad nivel 3 y 4 Tinción de Gram Tinción de Ziehl Neelsen Conseguir pulque para la siguiente semana. Poner el domingo antes, azúcar (1 cucharada sopera/1000ml) y no tapar herméticamente. Tinción de endospora Tinción negativa de cápsula PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 19 AGOSTO Miércoles 21 AGOSTO P2.2 Preparaciones microbiológicas. P2.2 Preparaciones microbianas P2.2.6a Tinción selectiva (tinción de endospora). Concluir con tinciones diferenciales,

2 Semana 4 P2.2.6b Tinción negativa (tinción de cápsula). Pulque (100 ml) selectiva y negativa P2.3 Esterilización y preparación de medios de cultivo. Pedir y lavar material de vidrio. Enjuagar con agua destilada. Secado en horno. Pulque (100 ml) Conseguir latas de conserva forradas por afuera y por dentro con papel estraza para la siguiente clase. Preparación de material para su esterilización PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 26 AGOSTO Miércoles 28 AGOSTO P2.3 Esterilización y preparación de medios de cultivo. Preparar material de vidrio para su esterilización, previamente lavado (poner filtro y envolver pipetas y cajas Petri). Preparar medios de cultivo y tubos con SSI. Esterilización. Utilizar controles biológicos. REPORTE 2: Uso y cuidado del microscopio de campo claro. Preparaciones fijas, tinciones simple, diferenciales, selectiva y negativa. Traer latas forradas con papel estraza. P2.3 Esterilización y preparación de medios de cultivo. Lectura e interpretación de resultados. P2.3 Control de calidad de esterilización, (controles biológicos), Zona y Técnica aséptica. Inoculación de control biológico y placas técnica aséptica. Conseguir un alimento enmohecido para el miércoles 4 de septiembre. Investigar las características macroscópicas y microscópicas de las actinobacterias (en una cuartilla). Siembra en tubo por estría Siembra por extensión superficial Siembra por picadura Siembra en medio líquido Siembra por estría en placa A partir de la siguiente semana, los laboratoristas del L 1A, no proporcionarán el siguiente material: asas bacteriológicas, gradillas, mecheros, portaobjetos y cubreobjetos

3 Semana 6 Semana 5 PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 2 SEPTIEMBRE Miércoles 4 SEPTIEMBRE P2.3 Control de calidad de esterilización, (controles biológicos), Zona y Técnica aséptica. Lectura e interpretación de resultados. 3. ESTUDIO DE CULTIVOS BACTERIANOS PUROS 4. ESTUDIO MICROSCÓPICO Y CULTIVO DE HONGOS P3.1 Técnicas de cultivo de bacterias no filamentosas y actinobacterias: Inoculación. Tinción de Gram a partir de cepas. Características macroscópicas y microscópicas de las actinobacterias. Siembra con asa micológica P3.1 Técnicas de cultivo de bacterias no filamentosas y actinobacterias: Lectura e interpretación de resultados (desarrollo de bacterias no filamentosas). Tinción de Gram a partir de los cultivos obtenidos. P4.1 Técnica de cultivo de hongos. Inoculación de hongos (mohos y levaduras) a partir de cultivos puros y de una muestra natural. Observación por impronta. Alimento (vegetal, pan o tortilla) enmohecido Conseguir material para la instalación de la columna de Winogradsky, el miércoles 11 de septiembre. Investigar las características morfológicas de los hongos filamentosos. Hacer un modelo. PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 9 SEPTIEMBRE Miércoles 11 SEPTIEMBRE (0) P2.2.1 Preparaciones microbiológicas (Preparaciones húmedas a partir de muestras de agua de florero, lago). 3. ESTUDIO DE CULTIVOS BACTERIANOS PUROS 4. ESTUDIO MICROSCÓPICO Y CULTIVO DE HONGOS EN UN MICROAMBIENTE P3.1 Técnicas de cultivo de bacterias: Lectura e interpretación de resultados (desarrollo de bacterias filamentosas). Tinción de Gram a partir de los cultivos obtenidos. P4.1 Técnica de cultivo de hongos. Lectura e interpretación de resultados. Observación por impronta a partir de cultivos puros y de la muestra natural. EXPOSICIÓN POR EQUIPO DE MODELOS de las características morfológicas de hongos filamentosos REPORTE 3: Esterilización y control de calidad. Revisar los videos de las técnicas : Preparaciones húmedas Tinciones vitales Observación de protozoarios y algas ESTUDIO DE PROTOZOARIOS Y ALGAS Características básicas de protozoarios y algas 9.2 Instalación de la Columna de Winogradsky. Observación macroscópica de la apariencia de la Columna, y microscópica de la diversidad microbiana (bacterias, hongos, protozoarios y algas). Primera observación. Toma de fotos. Material para instalar la columna de Winogradsky Cuestionario del Artículo Winogradsky Column. Preparar tubos con SSIE y conseguir cajas de Petri de plástico estériles desechables para el miércoles 18 de septiembre

4 Semana 9 Semana 8 Semana 7 PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 16 SEPTIEMBRE Miércoles 18 SEPTIEMBRE (1) 5. TÉCNICAS DE AISLAMIENTO DE NO HAY LABORES P5.1 Técnicas de aislamiento de microorganismos. Aislamiento de: bacteria G+, G-, esporulada, levaduras y/o actinobacterias, a partir de un cultivo mixto. 9.2 Observación macroscópica y microscópica de la Columna de Winogradsky. Segunda observación. Toma de fotos. REPORTE 4: Cultivo de bacterias, hongos, estudio de protozoarios y algas. I. Desde Buenas prácticas de laboratorio hasta Cultivo de Bacterias y Hongos. PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 23 SEPTIEMBRE Miércoles 25 SEPTIEMBRE (2) P5.1 Técnicas de aislamiento de microorganismos. Lectura e interpretación de resultados P5.1 Técnicas de aislamiento de microorganismos. (comparación de la diversidad de colonias Lectura de resultados (comprobación de pureza de 5. TÉCNICAS DE AISLAMIENTO desarrolladas en los diferentes medios de cultivo y colonias desarrolladas en los medios de cultivo, DE condiciones de incubación, tinción Gram, simple o selección de colonias). Impronta. Selección de colonias). Resiembra en medio general. Aislamiento primario. Cuestionario del Artículo Microbial Safari 9.2 Observación macroscópica y microscópica de la Columna de Winogradsky. Tercera observación. Toma de fotos. Esterilizar pipetas Pasteur para siguiente clase PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 30 SEPTIEMBRE Miércoles 2 OCTUBRE (4) P5.1 Técnicas de aislamiento de microorganismos. Lectura de resultados (comprobación de pureza de 5. TÉCNICAS DE AISLAMIENTO colonias desarrolladas en los medios de cultivo, DE selección de colonias). Conservación de cepa pura 6. NUTRICIÓN MICROBIANA Y CARACTERIZACIÓN ES oxígeno (cepas de referencia). Inoculación de microorganismos en medio mineral con diferentes fuentes de C. Lectura e interpretación de resultados 48 hrs. 9.2 Observación macroscópica y microscópica de la Columna de Winogradsky. Cuarta observación. Toma de fotos. MAESTRAS: Pedir a los alumnos $90.00 p/equipo para la compra de la Tira Api para el 7 de octubre

5 Semana 11 Semana 10 PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 7 OCTUBRE Miércoles 9 OCTUBRE (5) 6. NUTRICIÓN MICROBIANA Y CARACTERIZACIÓN Lectura e interpretación de resultados 7 días. 9.2 Observación macroscópica y microscópica de la Columna de Winogradsky. Quinta observación. Toma de fotos. microbiana. Inoculación de microorganismos que participan en los ciclos biogeoquímicos (N, P, S) y con actividad antagónica. REPORTE 5: Aislamiento de microorganismos. Pagar Tiras Api microbiana. Lectura de resultados de 48 horas. RETIRAR COLUMNAS WINOGRADSKY II. Desde. Buenas prácticas de laboratorio hasta Nutrición microbiana y caracterización fisiológica de bacterias. Esterilizar pipetas Pasteur, serológicas y tubos con SSI para la inoculación de tiras Api. Viernes 11: Resembrar cepa Gram negativa (aislada) e Incubar en gaveta. PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 14 OCTUBRE Miércoles 16 OCTUBRE (6) Lectura e interpretación de resultados 14 días. 6. NUTRICIÓN MICROBIANA Y CARACTERIZACIÓN P6.2 Uso de pruebas bioquímicas y técnicas rápidas para la caracterización fisiológica de bacterias (Pruebas en tubos y cajas e Inoculación de tiras Api) Siembra en diferentes medios de cultivo e inoculación de tiras Api. microbiana. Lectura de resultados de 7 días. Martes 15: Refrigerar tiras Api P6.2 Uso de pruebas bioquímicas y técnicas rápidas para la caracterización fisiológica de bacterias Lectura e interpretación de resultados de pruebas en tubos y cajas. Revelar tiras Api Conseguir un frasco (del Valle, 350mL) de vidrio, limpio, para el 21 de octubre. Conseguir leche bronca (cruda) y pasteurizada (producto nuevo y sin abrir) para el lunes 23 de octubre. Viernes 18: Resembrar cepa Gram positiva (aislada) e Incubar en gaveta.

6 Semana 13 Semana 12 PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 21 OCTUBRE Miércoles 23 OCTUBRE Lectura e interpretación de resultados 21 días.. 6. NUTRICIÓN MICROBIANA Y CARACTERIZACIÓN 7. TÉCNICAS PARA LA ENUMERACIÓN DE P6.2 Uso de pruebas bioquímicas y técnicas rápidas para la caracterización fisiológica de bacterias (Sistema Vitek2) P7.5 Análisis microbiológico del agua (NMP). Inoculación en Caldo Lactosado P7.2 Método turbidimétrico Densimat. Graficar resultados microbiana. Lectura de resultados 14 días. Frasco (del Valle, 350mL) limpio de vidrio y colocar TIOSULFATO DE SODIO (0.5%). Esterilizar y llevar a casa para traer muestra de agua. Esterilizar un matraz Erlenmeyer (90 ml SSI), pipetas serológicas (1 ml) y tubos ensayo (9 ml SSI). Conseguir cajas de Petri de plástico estériles desechables para lunes 28 de octubre. Preparar y esterilizar tres pipetas (1mL) y dos tubos vacíos con tapón de rosca para siguiente clase. Entrega de resultados de Sistema Vitek2 P7.5 Análisis microbiológico del agua (NMP). Lectura e interpretación de resultados. Resiembra a partir de tubos con caldo lactosado a tubos con CBVB y caldo EC. P7.1 Método de RedOx con azul de metileno (Reductasas en leche) P7.4 Técnica de Filtración Preparar y esterilizar equipo Millipore para filtración Leche bronca (cruda) y pasteurizada (producto nuevo y sin abrir, aprox 250mL). Esterilizar tubo con SSIE (BQ de P7.5) para siguiente clase. Conseguir muestra de suelo (100g) para siguiente clase. Jueves 24: Registrar tubos + en CBVB y en caldo EC. Inocular en placa EMB a partir de EC. Viernes 25: Inocular en placa GN a partir de EMB. Incubar en gaveta PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 28 OCTUBRE Miércoles 30 OCTUBRE P7.5 Análisis microbiológico del agua Revelar pruebas Bioquímicas. 7. TÉCNICAS PARA LA ENUMERACIÓN DE NOTA: 1 de Noviembre no hay labores. P7.5 Análisis microbiológico del agua Inocular pruebas Bioquímicas. P7.3 Técnica de dilución y vertido en placa (UFC). Inoculación P7.4 Técnica de Filtración Filtración e inoculación microbiana. Lectura de resultados 21 días. Muestra de agua (250mL aprox) en frasco de vidrio estéril. Muestra de suelo (100 g) P7.3 Técnica de dilución y vertido en placa (UFC). Lectura de resultados P7.4 Técnica de Filtración Lectura de resultados REPORTE 6: Nutrición microbiana y requerimientos de

7 Semana 16 Semana 15 Semana 14 PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 4 NOVIEMBRE Miércoles 6 NOVIEMBRE P8.1 Determinación del efecto de ph, P8.1 Determinación del efecto de ph, 8. CONDICIONES temperatura y concentración de solutos. temperatura y concentración de solutos. AMBIENTALES PARA EL Inocular dos cepas de referencia. Lectura de resultados. DESARROLLO, INHIBICIÓN Y P8.2 Determinación del efecto letal y mutagénico P8.2 Determinación del efecto letal y mutagénico DESTRUCCIÓN DE LOS de las radicaciones UV de las radicaciones UV Inocular dos cepas de referencia. Lectura de resultados. REPORTE 7: Uso de pruebas bioquímicas y técnicas rápidas para la caracterización fisiológica LAVAR Y ENTREGAR MATERIAL ADEUDADO de bacterias. Conseguir agentes químicos (limpiadores, desinfectantes, antisépticos, etc.), 30 discos de papel filtro (estériles en una caja de Petri de vidrio), 4 hisopos estériles y 8 cajas de Petri de plástico estériles desechables para lunes 11 de noviembre. PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 11 NOVIEMBRE Miércoles 13 NOVIEMBRE 8. CONDICIONES P8.3 Determinación del efecto de agentes P8.3 Determinación del efecto de agentes químicos AMBIENTALES PARA EL químicos en el crecimiento microbiano. en el crecimiento microbiano. DESARROLLO, INHIBICIÓN Y Lectura de halos de inhibición Inoculación de dos cepas de referencia mediante la DESTRUCCIÓN DE LOS Resiembra de tubos + en placas (Efecto de técnica de Difusión en Placa. estreptomicina) Traer 8 cajas de Petri desechables estériles y agentes químicos (limpiadores, desinfectantes, antisépticos, etc.) LAVAR Y ENTREGAR MATERIAL ADEUDADO REPORTE 8: Técnicas para la enumeración de microorganismos. III (FINAL) Jueves 14: Lectura de placas (Efecto de estreptomicina) PROTOCOLO / UNIDAD Lunes 18 NOVIEMBRE Miércoles 20 NOVIEMBRE NO HAY LABORES EXPOSICIÓN-REPORTE Integración y discusión de resultados obtenidos en la Unidad IX (Columna de Winogradsky). Microorganismos que participan en los ciclos biogeoquímicos (N, P, S) CONCLUSIONES DEL CURSO REPORTE 9: Condiciones ambientales para el desarrollo, inhibición y destrucción de los microorganismos.