UNIVERSIDAD DE CIENCIAS Y ARTES DE CHIAPAS

Transcripción

1 FACULTAD DE CIENCIAS DE LA NUTRICIÓN Y ALIMENTOS LICENCIATURA EN NUTRIOLOGÍA MANUAL DE PRÁCTICAS PARA LA EXPERIENCIA ACADÉMICA TOXICOLOGÍA DE ALIMENTOS ELABORO: M. EN C. EVARISTO JULIO BALLINAS DÍAZ ACTUALIZÓ: M. EN C. EVARISTO JULIO BALLINAS DÍAZ

2 P R Á C T I C A S: ENSAYOS DE TOXICIDAD PRÁCTICA 1. SUSTANCIAS TÓXICAS NATURALES PRESENTES EN ALIMENTOS FRESCOS Objetivo. Elaborar alimentos para ratas incluyendo alimentos frescos o deshidratados, crudos o semi procesados térmicamente con tal de conservar en forma activa el compuesto químico responsable de la toxicidad Introducción. Desarrollar este apartado según la información proporcionada para el reporte de prácticas. Material y Métodos. (Por equipo) Material biológico: Alimento de prueba fresco: Papas, frijoles crudos, habas verdes, hojas o raíces de yuca, chipilín, alfalfa, etc. ( uno de estos alimentos por equipo) Otros alimentos de prueba: aceite comestible recalentado (160 C x 2 horas), aditivos (nitrito, colorantes, saborizantes, etc).. Material auxiliar: Balanza granataria Cuchillos Molino doméstico Licuadora o picadora Tabla para cortar Vehículo: Harina de trigo comercial no enriquecida Procedimiento para preparar la dieta. Para 500 g de dieta. 1. Elaborar una papilla con el alimento fresco de prueba seleccionado. Es decir, moler o licuar finamente el alimento crudo seleccionado 2. Mezclar el vehículo con la papilla en relación 1: 1 ( ó 50/ 50 %)* hasta obtener una masa manejable manualmente (similar a la masa de tortilla o pan. Agregar agua potable si es necesario). 3. Elaborar con esta masa una especie de "churritos" (pequeños cilindros o pellets) de 2 cm de diámetro y 5 cm de largo aproximadamente). 4. Deshidratar los pellets a C por 12 horas como mínimo, en horno de secado. 5. Guardar y conservar el alimento de ensayo en un recipiente hermético 6. Alimento de referencia (500 g). Seguir los pasos anteriores, excepto el paso 4. En este caso, deshidratar a ºC por 12 horas como mínimo.

3 *Con otros ingredientes la proporción es diferente. Los EQUIPOS de trabajo de conformarán de 4 a 6 alumnos. En el reporte se debe indicar el porcentaje de participación de cada uno de los miembros del equipo: Una falta equivale a 0 % de partipaciòn. La tolerancia en el laboratorio es de 20 minutos para la entrada, después de este tiempo se considera retardo hasta los 30 minutos. Después de 30 minutos es falta. Tres retardos es equivalente a una falta. Aquel alumno (a) que faltase a una práctica, podrá realizarla posteriormente en el espacio y horario que le especifique el responsable del laboratorio. PRÁCTICA 2. ENSAYO EN RATAS: EFECTO DE SUSTANCIAS TÓXICAS PRESENTES EN ALIMENTOS FRESCOS Objetivo. Observar los efectos físicos y/o metabólicos de algunas sustancias tóxicas presentes en alimentos frescos o procesados. Introducción. Desarrollar este apartado según la información proporcionada para el reporte de prácticas. Material y Métodos. (Por equipo) Material biológico: Animales. Cinco ratas o ratones adultos del mismo sexo y raza conocida. Alimento de prueba o ensayo y alimento control o de referencia (abajo) Agua. Esta se proporciona ad limitum Material auxiliar: Equipos. Cinco jaulas individuales con comedero y bebedero. Balanza pesa ratones Balanza granataria Equipo de disección Cajas petri Congelador Cloroformo Algodón Cubreboca desechable Guantes Libro de registro Tabla de observaciones y registro periódico

4 Procedimiento experimental. 1. Identificar cada una de las jaulas (enumerándolas del 1 al 5 por ejemplo o marcando con letras A, B, C, D y E). 2. Pesar y registrar el peso inicial (Po) de cada rata o ratón, e introducirlo a una de las jaulas marcadas. 3. Proporcionar a cada rata una cantidad conocida de alimento de prueba (100 g por ejemplo) y agua ad limitum. 4. Registrar el peso de cada rata semanalmente (P s1, P s2, P s3 P sn), así como el alimento consumido por semana, durante 10 semanas o más. 5. Calcular la conversión alimenticia por semana y al final del experimento (si sobreviven.. los animales). Conversión A= Peso ganado / alimento consumido = (P sn Po) / (alimento agregado- alimento residual) 7. Realizar observaciones cada dos dias y registrarlas en a hoja de registro anexa. IMPORTANTE: Agregar alimento cuando se necesario (pesar y registrar la cantidad agregada.. estos datos se utilizarán en el cálculo de conversión). Realizar aseo de las jaulas semanalmente (lavar los bebederos, recoger el excremento y residuos de alimento, etc..). Resultados. En tablas y gráficas según el formato de reporte de prácticas anexo. Conclusiones Bibliografía PRACTICA No. 3. INTOXICACION AGUDA. OBJETIVO. DETERMINAR LA DOSIS LETAL MEDIA (DL 50) MATERIALES Y EQUIPOS ANIMALES: ratones machos y hembras en grupos homogéneos de 8 por sexo, recién destetados después de 30 días de nacidos. ENSAYO:

5 Grupo control de hembras y machos: administrar oralmente una dieta libre de la muestra problema, la cual servirá de vehículo para la administración del problema. Un grupo control para cada dosis empleada. Grupos problema de hembras y machos: ensayar diferentes concentraciones de la muestra problema, mezcladas con la dieta control. Procedimiento. La Figura 1 muestra la secuencia general para el ensayo de toxicidad aguada. Machos y hembras ANIMALES Vía oral Machos y hembras Control: 8 animales DOSIS 1, 2, 3 Registrar conducta de los animales PESO DIARIO EN 15 DIAS PESO DE ORGANOS: riñón, bazo, hígado, pulmón y corazón ANALISIS DE METABOLITOS Problema: 8 animales (diferentes) (12 GRUPOS DE 8) FIGURA 1. CONDICIONES PARA DETERMINACION DE TOXICIDAD AGUDA (Anónimo, 1994). La DL 50 se calculará interpolando de las gráficas del porcentaje de mortalidad versus la concentración de las dosis administradas del problema. Durante la administración del tratamiento se observará la conducta de los animales y se registrará el peso diario de los mismos. En el momento de morir (si fuese el caso) se practicará la autopsia y se sacrificará un número igual del control para realizar las comparaciones respectivas de órganos, los cuales se pesarán también. PRACTICA 4. TOXICIDAD SUBCRONICA

6 Se utilizarán ratones machos y hembras recién destetados, usando 8 animales por grupo por dosis. Se les proporcionará agua y alimento ad libitum. Habrá un grupo control y grupos problema. Para cada dosis empleada del problema se contará con un grupo control. Se proveerá diariamente una dosis del problema en base a la ingesta promedio diaria consumida por la población, observándose diariamente la apariencia, el comportamiento y los signos de toxicidad del animal. Además se registrará semanalmente el peso de los animales y se realizará un examen posmortem cuando haya terminado el tratamiento, en el que se evaluará el peso de órganos y se realizará un estudio histológico. FORMATOS ANEXOS PARA LA PRÁCTICA CON ANIMALES Laboratorio Multidisciplinario Experimental y Bioterio (LaMEB) TOXICOLOGIA DE ALIMENTOS. SEMESTRE. 5º. PROTOCOLO DE LABORATORIO OBSERVACION SEMANAL 1 Identificar* y registrar el peso de los animales (*Si hay suficientes jaulas, identificar la jaula por cada animal) 2 Lavar y llenar los bebederos de agua. El agua se proporcionará Ad limitum. Si es necesario agregar agua durante la semana 3 Al inicio del experimento, una vez conocido el peso de todos los animales (peso del grupo control y peso de los animales de prueba), agregar una cantidad conocida de alimento de prueba por animal o por grupo de animales 4 El grupo control de animales ( ratas ) se le debe proporcionar la dieta o alimento de rutina y agua Ad limitum. Pesar al inicio y cada semana OBSERVACION DIARIA 5 Registrar (anotar) en una libreta, por equipo de trabajo, las manifestaciones anormales o extrañas del animal o animales, indicando fecha y hora de la observación a Inquietud b Tranquilidad c Agresividad d Emisión de ruidos del animal e Efecto de la luz f Efecto del ruido externo g Caída de pelo h Falta de apetito

7 i j k l m n Exceso de apetito Dificultad para caminar Signos de muerte o muerte Vómito Calambres otros Laboratorio Multidisciplinario Experimental y Bioterio (LaMEB) TOXICOLOGIA DE ALIMENTOS. SEMESTRE. 5º. No. animal Peso inicial (gramos) Alimento prueba Alimento control Fecha: Peso por semana Observaciones semanales o diarias REPORTE DE PRÁCTICAS Criterios a considerar para la evaluación del Reporte de Prácticas de esta asignatura o experiencia académica: 1 Presentación: Número y nombre de la práctica. Integrantes del equipo Semestre Grupo 0.25 puntos

8 2 Objetivo de la práctica (Iniciar redacción del objetivo con un verbo). 3 Introducción Marco teórico Antecedentes: citando la fuente, de acuerdo con los conocimientos previos sobre metodología) 4 Materiales para la práctica: Ningún equipo de trabajo debe retardar la práctica por falta de materiales para realizarla (se tomará en cuenta al pase de lista) 5 Procedimiento: Con un diagrama de flujo del proceso, explicando inmediatamente después cada una de las etapas del proceso) 6 Resultados y discusión: En tablas o figuras, comparando los resultados con datos reportados por otros autores, citando la fuente bibliográfica. 6* Resultados: Comience diciendo, los resultados se muestran en la Tabla X o Figura Y. Discusión o explicación de los resultados: Por ejemplo: en la columna 3 de la Tabla Z se nota claramente que el contenido de azúcar de la muestra A fue superior al de la muestra B, pero no concuerdan con los resultados encontrados por Garcia y col. (1999). 7 Anexos o apéndices ( tablas o cálculos relacionados con los resultados) 8 Referencias bibliográficas (en orden alfabético): de 3 a 5 referencias como mínimo TOTAL 0.25 puntos 3 puntos: ( ) 1 punto 2 puntos 3 puntos 0.25 puntos 0.25 puntos PUNTOS NOTA. EL REPORTE ESCRITO FINAL DE LA PRACTICA TIENE UN VALOR DE 25 %; LAS EXPOSICIONES DE LOS AVANCES DEL DESARROLLO DE LA PRACTICA TIENE UN VALOR DE 25 % (TOTAL DE LA PRACTICA: 50 %) Profesor Julio Ballinas D. ballinasdiaz@hotmail.com cell: