MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

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1 MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO CARRERA Ingeniería en Biotecnología ASIGNATURA: Microbiología Gral. FICHA TECNICA

2 Fecha: Nombre del catedrático: 13-SEPT-2012 FICHA TÉCNICA MICROBIOLOGÍA GENERAL Jesús Hernández Romano Nombre de la práctica: Clave: Preparación de medios de cultivo II: pico de flauta, líquidos, semisólidos. Número de práctica: 1 Duración en horas: 2 Justificación: Objetivos/Resultados de aprendizaje: Como parte de sus actividades, el IBT con frecuencia deberá sembrar, aislar o describir agentes microbianos, para lo cual necesitará utilizar medios de cultivo. Conocer la preparación de los mismos es parte fundamental de su preparación. Que el alumno sea capaz de preparar adecuadamente distintos tipos de medios de cultivo. Laboratorio donde se desarrolla de la práctica: Actividades a desarrollar: Preparación de medio de cultivo Evidencia a generar en el desarrollo de la práctica: Medios de cultivo en cajas de Petri con diferentes medios de cultivo. COMPETENCIAS Capacidad de trabajar en equipo HABILIDADES Preparar medios de cultivo para aislar microorganismos de interés biotecnológico para su aplicación en procesos a través de los métodos microbiológicos adecuados. Elaboró: Revisó: INTRODUCCIÓN La sobrevivencia y crecimiento de los microorganismos depende de los nutrientes disponibles y de condiciones ambientales favorables. En el laboratorio, las preparaciones de nutrientes que se usan para cultivar a los microorganismos se denominan medios de cultivo. Los microorganismos pueden cultivarse

3 utilizando medios químicamente definidos, para los cuales se conocen las cantidades exactas de los compuestos que los integran, o bien medios complejos, los cuales incluyen materiales cuya composición exacta se desconoce, como extracto de levadura, de carne, peptonas, etc. Estos componentes son ricos en vitaminas y nutrientes, pero se desconoce su composición exacta. Los medios complejos son los que se emplean rutinariamente en laboratorios de bacteriología. La preparación de medios a partir de productos comerciales deshidratados es simple y directa. Cada bote trae en su etiqueta las instrucciones para la preparación del medio. Siempre que vaya a preparar medio, utilice un recipiente de una capacidad de al menos lo doble del volumen de medio que va a usted a preparar. La esterilización se lleva a cabo utilizando la autoclave, sin embargo debe revisar antes si el medio a esterilizar no contiene componentes sensibles a las condiciones de esterilización (121ºC a 15 libras de presión). OBJETIVO Que el alumno sea capaz de preparar adecuadamente distintos tipos de medios de cultivo. MATERIALES REQUERIDOS POR EQUIPO (Cristalería) CANTIDAD MATERIAL ESPECIFICACIONES 4 Matraz Erlenmeyer 250 ml 2 Espátula 2 Vidrio de reloj 1 Mechero Fisher 40 Tubos de ensayo con tapa de rosca 18x150 2 propipetas 2 Pipetas serológicas 10 ml 2 Probetas 10 ml 2 Gradillas para tubos de ensayo Para tubos de 18x150 EQUIPO REQUERIDOS NOMBRE ESPECIFICACIONES 1 Autoclave 1 Balanza analítica 1 Balanza granataria

4 OTROS MATERIALES REQUERIDOS (No suministrados por el Laboratorio) CANTIDAD MATERIAL ESPECIFICACIONES 1 Algodón Paquete 1 Gasa Paquete 1 Encendedor 1 Marcador Indeleble 1 Maskin Tape 1 Papel aluminio Agar nutritivo Agar bacteriológico REACTIVOS REQUERIDOS NOMBRE CANTIDAD S I R O S: Riesgo a la Salud I: Riesgo de Incendio R: Riesgo de reactividad O:especificaciones Manejo y disposición de los reactivos requeridos: Los medios de cultivo sobrantes, se colocan en un bote de plástico etiquetado como Desechos de medios de cultivo. Nombre del reactivo Datos importantes de la ficha técnica Incendio: combate, derrame Salud Ambiente Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se utilizarán en el laboratorio. Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se utilizarán en el laboratorio Datos de la ficha de seguridad de cada uno de los reactivos que se utilizarán en el laboratorio

5 PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA En la preparación de todos los medios se utilizará caldo o agar nutritivo, cuya composición es la que sigue: Caldo nutritivo: Peptona Extracto de carne Agar nutritivo: Peptona Extracto de carne Agar 5 g/l 3 g/l 5 g/l 3 g/l 15 g/l Los medios con gelatina llevarán: Caldo Nutritivo + gelatina Peptona 5 g/l Extracto de carne 3 g/l Gelatina 120 g/l Preparación de medio sólido en cajas de Petri: 1. Se pesa por cuadruplicado la cantidad necesaria para preparar 100 ml de Agar nutritivo en polvo. 2. Se colocan 100 ml de agua destilada en 4 matraces Erlenmeyer de 250 ml con tapón y se vierte en cada uno la cantidad pesada de cada medio. 3. Se etiquetan los matraces con el nombre del medio que contienen. 4. Se mezcla el medio con el agua, se tapan los matraces sin cerrar herméticamente y se meten a la autoclave. 5. Preservando la esterilidad de las cajas de Petri, se etiquetan de acuerdo con el medio que van a contener. 6. Una vez estériles, los medios se dejan enfriar hasta que la temperatura del medio se soporte con el dorso de la mano, posteriormente se vierte en las cajas de Petri, en zona de esterilidad (cerca del mechero) colocando una cantidad de medio tal que apenas cubra la mitad del volumen de la caja (NO LLENE LAS CAJAS CON MEDIO). 7. Las cajas se dejan enfriar para que el medio solidifique. Preparación de medio en pico de flauta: 1. Cada tubo en pico de flauta llevará 5 ml de agar nutritivo, por lo que se pesan las cantidades necesarias para preparar 60 ml de agar nutritivo y se colocan en un matraz Erlenmeyer de 250 ml conteniendo los 60 ml de agua destilada. 2. Se mezcla perfectamente para obtener una suspensión homogénea. 3. Con agitación continua para evitar la sedimentación del agar, se colocan 5 ml de medio en cada uno de 15 tubos etiquetado como Pico de Flauta. ES IMPORTANTE QUE CADA VEZ QUE TOME MEDIO DEL MATRAZ AGITE LA SUSPENSIÓN PARA EVITAR QUE EL AGAR SE DISTRIBUYA DE MANERA NO HOMOGÉNEA. 4. Se cierran los tubos de manera que no quede herméticamente cerrados para evitar que se rompan por la presión del vapor. 5. Se esterilizan en la autoclave de acuerdo con las instrucciones del profesor. 6. Una vez estériles y antes de que solidifiquen, se inclinan en un ángulo de 10º aproximadamente (puede ser con la ayuda de un cuaderno) y se dejan solidificar. Preparación de tubos con caldo nutritivo: 1. Se pesa la cantidad necesaria de caldo nutritivo para preparar 40 ml de caldo nutritivo. 2. Se disuelve el medio en 40 ml de agua destilada. 3. Se colocan 3 ml en cada uno de los 10 tubos con tapón de malaquita etiquetados como Caldo nutritivo. 4. Se cierran los tubos de manera que no quede herméticamente cerrados para evitar que se rompan por la presión del vapor. 5. Se esterilizan en el autoclave de acuerdo con las instrucciones del profesor.

6 Preparación de tubos con caldo nutritivo + gelatina. 1. Se pesan las cantidades necesarias de caldo nutritivo y gelatina para preparar 60 ml. 2. Se adicionan los reactivos a un matraz Erlenmeyer conteniendo 60 ml de agua destilada. 3. Se mezcla perfectamente para obtener una suspensión homogénea. 4. Con agitación continua para evitar la sedimentación de la gelatina, se colocan 5 ml de medio en cada uno de 15 tubos etiquetado como Gelatina. ES IMPORTANTE QUE CADA VEZ QUE TOME MEDIO DEL MATRAZ AGITE LA SUSPENSIÓN PARA EVITAR QUE LA GELATINA SE DISTRIBUYA DE MANERA NO HOMOGÉNEA. 5. Se cierran los tubos de manera que no quede herméticamente cerrados para evitar que se rompan por la presión del vapor. 6. Se esterilizan en el autoclave de acuerdo con las instrucciones del profesor. 7. Se dejan solidificar en posición vertical. 8. Una vez solidificados y esterilizados los medios, cada equipo deberá tener: a. 40 cajas de cultivo. b. 10 tubos en pico de flauta c. 10 tubos con caldo nutritivo d. 10 tubos con Caldo nutritivo + gelatina Estos medios se guardan por equipo, debidamente etiquetados, en refrigeración hasta su próximo uso. REPORTE DE LA PRÁCTICA EVIDENCIAS DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS DURANTE LA PRÁCTICA En este espacio se ponen las observaciones, graficas, cálculos matemáticos dibujos, datos, esquemas, tabla de datos, etc. Que se generaron durante el desarrollo de la práctica. DISCUSIÓN CONCLUSIÓN BIBLIOGRAFÍA

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