UNIDADES CIENTÍFICAS DE APOYO Presentación, Equipamientos y Servicios

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2 UNIDADES CIENTÍFICAS DE APOYO Presentación, Equipamientos y Servicios GENÓMICA CULTIVOS CELULARES MICROSCOPÍA CITOMETRÍA & SORTER ORGANISMOS MODELO RECURSOS BIOLÓGICOS LAVADO Y ESTERILIZACIÓN ISÓTOPOS & SEGURIDAD BIOQUÍMICA PRODUCCIÓN CELULAR HISTOLOGÍA

3 GENÓMICA

4 GENÓMICA PRESENTACIÓN EQUIPAMIENTO Conocer la secuencia de un genoma es el primer paso para Genómica Funcional, un área que persigue entender la función del genoma a escala global y su repercusión en el desarrollo y la fisiología de un organismo. La posibilidad de caracterizar la función de los genes de distintos organismos a través de estrategias globales como el análisis de los perfiles de expresión génica mediante micromatrices (microarrays), los análisis fenotípicos de mutantes o el análisis de interacciones proteicas, constituyen hoy herramientas imprescindibles en la investigación biológica y biomédica. El manejo de una gran cantidad de muestras procesadas en un periodo reducido de tiempo, con alta reproducibilidad y exactitud, permite un estudio rápido y extenso de un número elevado de genes de interés. Esto es posible gracias a diversas tecnologías de alto rendimiento que recurren al uso de sistemas robotizados. CABIMER dispone del siguiente equipamiento específico: Ion Torrent PGM Sequencer de Life Technologies. Instrument System de Affymetrix, que consta de: Horno de Hibridación Modelo 640, Estación Fluídica 450, Escáner G con autoloader para un máximo de 40 cartuchos y láser con excitación a 532nm. Horno de hibridación para Microarrays impresos de Agilent modelo G2545A. ImageXpress Micro System for High Content Screening System, de Molecular Devices. Real-Time PCR Viia7 from Life Technologies (blocks for 384-well platesgenechip Escáner GenePix 4100A de Axon para el Análisis de imagen y cuantificación de datos de fluorescencia de Microarrays. Bionalyzer 2100 de Agilent Technologies (con Vortex MS S8/S9) Sistema de cuantificación de ácidos nucleicos Qubit 2.0 (Life Technologies) Nanodrop ND-1000 Robot picador de colonias RoToR HDA de Singer Instruments Robot Microlab Star de Hamilton 1 homogenizador refrigerado para la rotura de células Multi-Beads Shocker MB5000E de Yasui Kikai

5 GENÓMICA SERVICIOS TARIFAS 1. MICROARRAYS de Affymetrix y Agilent para: a) Análisis de expresión génica (i.e.: 3 Expression Arrays, Exon/Gene Arrays, microrna. b) Estudio de genomas completos (i.e.: Tiling Arrays, Promoter/Encode Arrays ). Precio ( /Muestra) Tarifa Académica Y SSPA Microarrays Bioinformática Análisis Básico Análisis Funcional Análisis de Calidad del ARN ANÁLISIS BIOINFORMÁTICO de datos de Microarrays: a) Análisis Básico (Procesamiento, Control de calidad, normalización, Bioestadística, ) b) Análisis Funcional (Filtrado, GO, Enriquecimiento Funcional, Análisis de Regiones Cromosómicas, Intervalos de Enriquecimiento ) c) Análisis Comparativo (Integración de Datos, comparación con datos públicos ) 3. Análisis de CALIDAD de ARN/ADN: Estudio de la calidad y cantidad de ácidos nucleicos (ARN y ADN) mediante el uso de la técnica desarrollada por Agilent Technologies para el Bioanalyzer SECUENCIACIÓN MASIVA Ion-Torrent PGM: La Unidad de Genómica ofrece Servicio de Secuenciación Masiva (NGS) utilizando la plataforma Ion Torrent Personal Genome Machine (PGM) de Life Technologies basada en la tecnología de semiconductores. Aplicaciones: AmpliSeq TM RNA/DNA Panels, Chip- Seq, RNA-Seq, Target-Seq, De novo, Small RNA Tarifa Empresas y otras Instituciones SECUENCIACIÓN MASIVA Ion-Torrent PGM Precio ( /Muestra) >10-20M > M >1Gb Tarifa Académica Y SSPA Tarifa Empresas y otras Instituciones CONTACTO Responsable Científico Andrés Aguilera // andres.aguilera@cabimer.es Responsables Técnicos Eloísa Andújar // eloisa.andujar@cabimer.es Mónica Pérez // monica.perez@cabimer.es genómica@cabimer.es

6 CULTIVOS CELULARES

7 CULTIVOS CELULARES PRESENTACIÓN EQUIPAMIENTO CABIMER cuenta con una extensa área dedicada al Cultivo Celular, distribuida en tres plantas. En la planta sótano, la Unidad cuenta con un área dedicada al cultivo primario no humano, anexa al Animalario. En las restantes plantas, existen áreas destinadas al cultivo de líneas celulares humanas y murinas y, concretamente en la primera, se hallan dos áreas restringidas destinadas al cultivo de células troncales humanas y una sala de seguridad biológica de nivel P2. La Unidad de Cultivos del centro pone a disposición de los usuarios la posibilidad de cultivar todo tipo de células animales, tanto cultivos primarios como líneas celulares establecidas y de realizar diferentes técnicas que permitan su estudio y caracterización a nivel molecular y celular. El equipamiento científico de la Unidad de Cultivos se compone de varias unidades de: Frigoríficos y congeladores Cabinas de flujo laminar Incubadores Microscopios Centrífugas Electroporadores Baños de agua Agitadores Asimismo el centro cuenta con dos áreas anexas al área de cultivo de Ultracongelación para la crioconservación del material, que actualmente cuenta con 6 contenedores de nitrógeno líquido con autoinyección. El Área de Cultivos cuenta con una potente infraestructura que permite facilitar y agilizar la labor del investigador. En el área se concentra el instrumental necesario para poder llevar a cabo el cultivo celular en sí y el control de su crecimiento, así como su manipulación.

8 CULTIVOS CELULARES SERVICIOS TARIFAS La Unidad de Cultivos, actualmente: Facilita a los usuarios el uso y aprovechamiento de las instalaciones de que se dispone, poniendo a punto y manteniendo la infraestructura Vela por el cumplimiento de las normas de trabajo con el fin de evitar la contaminación de los cultivos y procurando la práctica de buenos hábitos de trabajo. Efectúa control periódico de las instalaciones y sus componentes Controla aquellos parámetros críticos en el cultivo celular y programas de limpieza, desinfección y/o esterilización del instrumental utilizado. Supervisa el suministro de CO2 y nitrógeno, tanto líquido como gaseoso, del centro, controlando el funcionamiento de los tanques de crioconservación celulares. Oferta alícuotas de FBS inactivo, de penicilina/estreptomicina, de glutamina, de tripsina-edta así como PBS 1X estéril. La Unidad de Cultivos, más adelante: Ofertará ensayos de detección de contaminación por micoplasmas mediante PCR. Ofrecerá la oportunidad de adquirir viales de Líneas Celulares que presenten mayor demanda por parte de los investigadores. SERVICIOS INTERNOS SOLO Precio (sin IVA) Alícuotas de 50 ml de FBS inactivo (SIGMA F7524) 9,00 Alícuotas de 5 ml Pen/Strep (SIGMA P0781) 0,70 Alícuotas de 5 ml Glutamina (SIGMA G7513) 0,65 Alícuotas de 10 ml Tripsina-EDTA (SIGMA T4049) 1,00 PBS 1x estéril (500 ml) 1,90 CONTACTO Responsable Científico Dr. Mario García Domínguez // mario.garcia@cabimer.es Responsables Técnicos Dra. Mercedes Dana Jiménez // mercedes.dana@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla

9 MICROSCOPÍA

10 MICROSCOPÍA PRESENTACIÓN EQUIPAMIENTO La Unidad de Microscopía se dedica a la adquisición de imágenes digitales a partir de muestras biológicas mediante microscopía óptica de fluorescencia convencional y microscopía confocal. Las muestras son preparadas por los usuarios basándose en la utilización de diversos marcadores fluorescentes in vivo en la muestra (en el caso de adquisición de imágenes a tiempo real) o bien mediante el uso de técnicas de inmunofluorescencia. La unidad ofrece diferentes servicios de microscopía confocal a los usuarios, y las tarifas a aplicar dependen de la actividad a realizar. Además, la unidad ofrece servicio científicotécnico para la cuantificación, procesamiento y análisis de imágenes mediante software específico de análisis de imágenes y estadísticos, esenciales en la interpretación de los resultados. Para apoyar a la comunidad científica y desarrollar este tipo de estudios la Unidad de Microscopía de CABIMER cuenta con el siguiente equipamiento: Microscopio Confocal Leica TCS SP5 (AOBS). Dispone de las siguientes líneas de excitación: 405, 458, 476, 488, 496, 514, 561, 594 y 633nm. Este sistema está dotado de una cabina termostatizada que permite realizar experimentos in vivo. Microscopio Confocal Leica TCS SP5 (Dic. Conv.). Dispone de las siguientes líneas de excitación: 405, 458, 476, 488, 496, 514, 543 y 633nm. Unidad de procesamiento de imágenes: con softwares como Metamorph, Image-J y Fiji, para el análisis y cuantificación de resultados.

11 MICROSCOPÍA APLICACIONES Adquisición de imágenes a partir de muestras fijadas y marcadas mediante técnicas de inmunofluorescencia, con uno o múltiples fluorocromos. Adquisición de imágenes a partir de muestras vivas (ya sea un cultivo celular o un organismo). Time lapse fluorescence imaging FRAP: Fluorescence Recovery After Photobleaching FLIP: Fluorescence Loss in Photobleaching FRET: Fluorescence Resonance Energy Transfer Photoactivation y Photoswitching Fluorescencia combinada: adquisición de imágenes con fluorescencia y luz transmitida simultáneamente. Plataforma de análisis de imágenes: Ensayos de migración celular; Cuantificación celular; Cuantificación vesicular o de partículas. Análisis selectivo celular; de proliferación celular; de muerte celular por apoptosis. Análisis comparativo por regiones o áreas de interés. Deconvolución 2D, 3D y 4D. Edición de videos, procesamiento de imágenes para presentaciones, figuras, pósters, etc. Análisis de imágenes de aplicaciones avanzadas: Estudios de la dinámica de proteínas mediante FRAP y FLIP midiendo fracción móvil, etc. Análisis de la interacción entre proteínas mediante FRET y la interpretación de resultados. TARIFAS Precio Tarifa Académica Y SSPA Tarifa Empresas y otras Instituciones Microscopía Confocal (con operador) ( /h) REQUERIMIENTO DE LAS MUESTRAS Para observar muestras mediante microscopía confocal, éstas deben preparase en un medio libre de fluorescencia y sobre un soporte de base de vidrio de 0.17 mm de grosor. Las placas con base de vidrio pueden solicitarse a la Unidad de Microscopía. FUNCIONAMIENTO DE LA UNIDAD DE MICROSCOPÍA Para solicitar cualquiera de nuestros servicios, previamente debe hacerse una reserva con, al menos, una semana de antelación. Análisis de imágenes* ( /análisis) CONTACTO Responsable Científico: Dr. Fernando Monje Casas fernando.monje@cabimer.es Análisis de imágenes avanzado *** ( /análisis) 24 /h /h * Todos los análisis de imágenes de microscopía confocal serán facturados adicionalmente a las horas de uso de microscopía confocal. **En todos los casos se necesitará un mínimo de dos muestras requeridas (réplicas) para cada análisis. *** Puede consultar las tarifas detalladas por aplicación de análisis avanzado contactando con la Unidad de Microscopía. Responsable Técnico: Dr. Paloma Domínguez Giménez paloma.dominguez@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla

12 CITOMETRÍA

13 CITOMETRÍA PRESENTACIÓN La Citometría de Flujo es una técnica de análisis celular multiparamétrico, es decir, puede combinar las medidas de distintos parámetros analizados sobre la misma célula y relacionarlos. Su fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado. El impacto de cada célula con el rayo de luz produce señales que corresponden a diferentes parámetros de la célula y que son recogidos por distintos detectores. Estas señales luminosas detectadas se transforman en impulsos eléctricos que se amplifican y se convierten en señales digitales que son procesadas por un equipo informático. Los Cell Sorters o Separadores Celulares tienen las mismas prestaciones y posibilidades que los Citómetros de Flujo analíticos pero con la capacidad adicional de separar y recuperar partículas selectivamente de la suspensión líquida en función de sus características. EQUIPAMIENTO Para el desarrollo de esta técnica la Unidad de Citometría de CABIMER dispone de los siguientes equipos: Clitómetro de flujo BD FACSCalibur Equipos: 2 Casa comercial: BD Biosciences Características técnicas: Dispone de dos líneas láser; 488 nm (azul) y 633 nm (rojo) y de cuatro detectores de fluorescencia independientes (FL1, FL2, FL3 y FL4). Separador celular BD FACSAria Equipos: 1 Casa comercial: BD Biosciences Características técnicas: Dispone de tres líneas láser; 488 nm (azul), 633 (rojo) y 407 (violeta). Puede detectar hasta 13 parámetros de fluorescencia y 2 parámetros de dispersión al mismo tiempo así como purificar diferentes tipos de poblaciones celulares en base a características determinadas. Admite diferentes soportes tanto para la adquisición como para la separación de muestras. Está equipado con una unidad ACDU (Automated Cell Deposition Unit) para la separación en placas multipocillos o en portaobjetos. Dispone también de un sistema de refrigeración que permite la adquisición y separación de muestras con control de la temperatura.

14 CITROMETRÍA APLICACIONES TARIFAS Las principales aplicaciones que se llevan a cabo en la Unidad de Citometría son: Inmunofenotipado. Identificación de genes reporteros. Ensayos de viabilidad celular. Análisis de ciclo celular. Apoptosis y necrosis. Ensayos funcionales. Separación celular. Precio ( /hora) Citometría Sorter Tarifa Académica y SSPA 25 /h 50 /h Tarifa Empresas y Otras Instituciones 50 /h 90 /h FUNCIONAMIENTO DEL SERVICIO Para optimizar el uso de los equipos se establecerá un sistema de reservas del servicio, para realizar dicha reserva contactar con el responsable técnico de la Unidad con al menos una semana de antelación. El uso de cualquiera de los equipos de la Unidad de Citometría por usuarios externos se hará con un operador de dicha Unidad que será el que maneje los equipos. La preparación de la muestra correrá a cargo del usuario, debiendo traerlas ya preparadas y listas para el análisis y/o la separación. La facturación del servicio se hará en intervalos de media hora. En todos los casos de separación celular se facturará una hora extra, según las tarifas vigentes, que corresponde al tiempo necesario para la preparación del equipo. CONTACTO Responsable Científico Abelardo López Rivas // abelardo.lopez@cabimer.es Responsables Técnicos Mª José Quintero // mariajose.quintero@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla Para cualquier otra consulta relativa a las tarifas o a la posibilidad de otras aplicaciones de la técnica contactar con el personal de la Unidad.

15 ORGANISMOS MODELO

16 ORGANISMOS MODELO PRESENTACIÓN La investigación tanto básica como aplicada que se desarrolla en el CABIMER requiere el uso de Organismos Modelo tales como E. coli, S. cerevisiae y C. elegans. Actualmente, estos organismos se utilizan a dos niveles: 1. Organismos usados como herramientas de investigación (ingeniería genética, expresión ectópica de proteínas recombinantes, ensayos in vivo de expresión génica ), y 2. Organismos usados como modelos vivos para el estudio de procesos celulares específicos, tales como la estabilidad genética, la segregación cromosómica, la expresión génica o la dinámica de la cromatina. El objetivo de la Unidad es dar apoyo técnico a los usuarios en relación con el uso de estos organismos. Adicionalmente, esta Unidad cubre las necesidades básicas de los usuarios en relación a soluciones y tampones de usos general en laboratorios de biología molecular y biomedicina. EQUIPAMIENTO La unidad dispone tanto de grandes equipos que incluyen campanas de flujo laminar y de extracción (Telstar y Cruma, respectivamente), y un Fermentador Sartorious con un Sistema de homogenización acoplado (Panda 2K), así como de pequeños equipos tales como agitadores magnéticos ph-metros, balanzas, etc. SERVICIOS El servicio ofrecido por esta Unidad cubre principalmente los siguientes aspectos: Preparación de soluciones generales y medios de cultivo Preparación de células competentes y electroporables Obtención y homogenización (rotura por descompresión) de biomasa para purificación de complejos protéicos Organización y mantenimiento de colecciones generales de organismos modelo

17 ORGANISMOS MODELO TARIFAS INTERNAS SOLO. SOLUCIONES TARIFAS INTERNAS SOLO. MEDIOS Servicios Formt Precio Acetato Sódico 3M ph 5,2* 0,5 L 34 EDTA-Na ph 8,0* 1 L 15,3 NaCL 5M* 1 L 1,3 NaOH 1oM 0,5 L 2,5 PBS 10X* 1 L 2,6 SDS 10% 0,5 L 12,0 SDS 20% 0,5 L 24,2 SOB* 0,2 L 1 SOL I (mini-preps) 0,5 L 0,2 SOL II (mini-preps) 0,5 L 3,5 SPE 20X 1 L 3,1 SSC 20X 1 L 1,3 TAE 50X 1 L 15 TBE 5X 1 L 3,5 TBS 10X* 1 L 2 Tris 1M ph 6.8* 1 L 6,2 Tris 1M ph 8.8* 1 L 8,8 TRIS-CL ph 7,5* 1 L 6 ph 8,0* 1 L 6 M 9* 1 L 1,1 RUNINIG BUFFER 5X 1 L 2,2 RUNINIG BUFFER 5X sin SDS 20% 1 L 1 PEG 50% 250 ml 7 Acetato de Litio 10X 250 ml 7 Solución de Hibridación 1 L 17,9 * AUTOCLAVED Medios LB Formt Precio LB Liquido (pirex o matraz) 100 ml 0,10 CONTACTO Responsable Científico // Responsable Técnico // con AP 200 ml 0,20 15 Placas sin AP 500 ml 0,50 con AP 1000 ml 1,00 LB Sólido (matraz) 100 ml 0,20 15 Placas con o sin AP 15 2,20 15 Placas con KANAMICINA 15 2,10 MYOB Formt Precio 1 Litro MYOB 35 placas / 1L 3,7 Electrocompetentes (BL21 DE3) 1 semana de antelación Competentes (E.Coli DH5á) 1 semana de antelación Aprox. 35 viales 9,0 Aprox. 50 viales 9,0 Félix Prado // felix.prado@cabimer.es Cristina Hernández // cristina.hernandez@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla

18 RECURSOS BIOLÓGICOS

19 RECURSOS BIOLÓGICOS PRESENTACIÓN EQUIPAMIENTO La manipulación del genoma del ratón se ha convertido en una poderosa herramienta para la investigación biomédica. La transgénesis en ratón permite desde el estudio de la función de genes en el contexto de un organismo completo hasta la creación de modelos de enfermedad que pueden ser investigados desde el punto de vista patológico y terapéutico. La Unidad de Recursos Biológicos de CABIMER ofrece a los usuarios los recursos necesarios para poder llevar a cabo una investigación de calidad utilizando como modelo experimental el ratón. La instalación creada a tal efecto en CABIMER ocupa una superficie de unos 500 m2 con capacidad máxima para estabular unos 8000 ratones en microaisladores ventilados. La función principal de esta unidad es el mantenimiento en condiciones óptimas de las diferentes líneas de ratón utilizadas por los usuarios en estas instalaciones así como facilitar a los investigadores la generación de ratones modificados genéticamente. La unidad dispone de un laboratorio de micromanipulación / microinyección de embriones, tres laboratorios de experimentación general y siete salas para el alojamiento de ratones en modernos racks ventilados. La zona de lavado y esterilización está dotada con moderno equipamiento, autoclaves, lavaracks y SAS biológicos con conexión a sistema de descontaminación mediante peróxido de hidrógeno. El laboratorio de micromanipulación de embriones cuenta con el siguiente equipamiento: Plataforma para micromanipulación Leica AM 6000 Mesa antivibratoria Newport Microforge MF-900 Narishige Estirador de capilares P-97 Sutter Instruments Microinyector CellTram Vario Eppendorf Microinjector CellTram Oil Eppendorf, Primetech piezo impact drive PMM-150 Femtojet microinyector Eppendorf, Estereomicroscopio Olympus con platina térmica. Fuente de luz fría Incubador CO2 Centrífuga Eppendorf

20 RECURSOS BIOLÓGICOS SERVICIOS Estabulación de ratones en microaisladores ventilados. En la unidad se llevan a cabo las siguientes técnicas: Microinyección de ADN en pronúcleo de zigotos. Microinyección de células ES en blastocistos o embriones de ocho células. Transferencia de embriones a oviducto/útero. Rederivación de líneas Desde esta unidad también se gestiona el Comité Ético de Experimentación Animal (CEEA) del centro, encargado de evaluar los procedimientos experimentales que se soliciten llevar a cabo en estas instalaciones. En la intranet de Cabimer están disponibles impresos de solicitud de servicios científico-técnicos ofertados por esta unidad TARIFAS EXTERNAS Mantenimiento de ratones en racks ventilados Usuarios Externos 25 /microaislador/mes Microinyección de ADN en pronúcleo de zigotos 5000 Microinyección de células ES en blastocistos 5000 El personal técnico se encarga del mantenimiento en condiciones óptimas de las diferentes líneas de ratón utilizadas por los grupos de investigación, así como de dar soporte a los servicios ofertados por el laboratorio de micromanipulación de embriones. La unidad también cuenta con personal veterinario especializado en salud y bienestar animal. CONTACTO Responsable Científico Dr. Luis Sánchez Palazón // luis.sanchez@cabimer.es Responsables Técnicos Míriam González // miriam.gonzalez@cabimer.es Flora Guerrero // flora.guerrero@cabimer.es Rosario Segarra // rosario.segarra@cabimer.es Veterinaria asesora en salud y bienestar animal Itziar Benito // itziar.benito@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla Rederivación de líneas 2000 Fertilización in vitro consultar

21 LAVADO Y ESTERILIZACIÓN

22 LAVADO Y ESTERILIZACIÓN PRESENTACIÓN La Unidad de Limpieza y Esterilidad se encarga de procesar todo el material procedente de los distintos grupos de investigación. El personal de esta Unidad se encarga de la recogida en los laboratorios del material para lavar y procesar, el lavado se realiza por el procedimiento más adecuado en cada caso (programa, temperatura, tiempo, ), secado y su posterior procesamiento. Por otro lado, se encarga de la recepción del material a esterilizar, clasificándolo dependiendo del tipo de esterilización deseada (ya sea por calor húmedo o por calor seco a 200º C), pudiéndose modificar los parámetros según las necesidades del usuario, también se encarga de la distribución del material esterilizado a cada uno de los laboratorios y así como de mantener un stock de material estéril ya sea fungible, vidrio o líquidos tanto en la Unidad de Apoyo como en los distintos Departamentos del Centro. Es también en esta Unidad donde se procesan los residuos biológicos, tanto líquidos como sólidos, para su posterior desecho. El material de vidrio y polipropileno de uso más habitual del Centro se encuentra centralizado en esta Unidad, de manera que en ella se controla el consumo y la demanda de los mismos, pudiendo cada grupo de investigación pedir desde esta Unidad el material que considere necesario para desarrollar su actividad científica. Todo el proceso de trabajo se realiza de acuerdo con las normas de bioseguridad, garantizando en todo momento la calidad del servicio de esterilización, su gestión y control. En este proceso participan los distintos grupos de investigación consiguiendo así elaborar mejoras en el servicio. SERVICIOS Recogida de material sucio. Lavado del material. Secado del material. Reparto del material. Procesado de todo tipo de material. Pipetas de vidrio Pipetas pasteur Material de vidrio Tubos de cultivo Frascos Iso Llenado de botes de Eppendorf Rack de carga de puntas azules µl Mantenimiento de stock de agua. Lavado de tejidos. Esterilización mediante autoclavado Tratamiento de los residuos biológicos.

23 LAVADO Y ESTERILIZACIÓN EQUIPAMIENTO Agitador magnético con calefacción (1unidad). Cimarec. Barnstead/ Thermolyne Baño sonicador ultrasonido. 9 litros (1 unidad). Ultrasons, SELECTA. Baño limpieza por ultrasonido con elevador y secado automático (1 unidad). Ultrasons UB SELECTA. Autoclaves y accesorios. (4 unidades). AUTESTER-E 75 DRY de SELECTA Lavavajillas de laboratorio y accesorios. (4 unidades). Professional G 7883 de MIELE. Secadora de ropa..balay. Agitador magnético sin calefacción. (2 unidades) Cimarec.Barnstead/Thermolyne. Uno de ellos está en la unidad de organismos modelos. Balanza de precisión (2 unidades). Explorer Pro de OHAUS Horno de secado de material de vidrio. (3 unidades). DRY-BIG de SELECTA Lavadora automática Balay. PH metros. GLP21. (1unidad). Agitador Vortex. (2 unidades) Heidolp. Uno de ellos está en la unidad de organismos modelos. Armario para productos químicos, ácidos y bases. Cajas para transportar productos químicos peligrosos. (2 unidades). Una de ellas está en organismos modelos. Congelador -20ºC (1 unidad).liebherr confort. Frigorífico (1 unidad). LIEBHERR Premium. Productoras de agua destilada ELIX 70 (2 unidades). MILLIPORE. Una de ellas está ubicada en ultra congelación 3. Productoras de agua Mq, bidestilada, Synthesis A10. (2 unidades). MILLIPORE. Una de ellas está ubicada en ultra congelación 3. Campana de flujo laminar. (1 unidad). Telstar MH-100 CONTACTO Responsable Científico Francisco Bedoya // francisco.bedoya@cabimer.es Responsable Técnico María José Figueroa // maria.figueroa@cabimer.es Técnico de la Unidad Dolores Marín // dolores.marin@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla

24 ISÓTOPOS Y SEGURIDAD BIOQUÍMICA

25 ISÓTOPOS Y SEGURIDAD BIOQUÍMICA PRESENTACIÓN La Unidad de Isótopos y Seguridad Bioquímica se encarga de realizar el control, prevención e información de los riesgos a los que está expuesto el personal de CABIMER que trabaja con productos radiactivos, químicos y biológicos, según la normativa y legislación vigentes en materia de radiactividad, seguridad biológica y química, y producción de residuos tóxicos y peligrosos. Asimismo se encarga del diseño y puesta en marcha de las instalaciones y del equipamiento técnico necesario, así como de la planificación y control periódico de los trabajos que en ellas se realizan garantizando su correcto funcionamiento, elaborando y gestionando la normativa interna y toda la documentación legal necesaria para ello. La unidad también realiza la gestión y control de la eliminación de los residuos radiactivos, y de los residuos químicos y biológicos considerados como tóxicos y peligrosos. EQUIPACIÓN Las instalaciones de manipulación y almacenamiento de isótopos radiactivos de CABIMER están catalogadas como de 2ª categoría, y constan de 2 laboratorios y 1 almacén de residuos radiactivos. El acceso a las instalaciones radiactivas está restringido y su uso es obligatoriamente autorizado por la Unidad de forma individualizada. El laboratorio beta está situado en la planta baja del edificio y está diseñado y equipado para trabajar con las siguientes fuentes de emisiones beta: 32 P, 33 P, 35 S, 14 C y 3 H con el siguiente equipamiento: 1 refrigerador de 4ºC Liebherr. 1 congelador de -20ºC Liebherr. 1 contador de centelleo líquido (beta) LS600 3 termobloques mod hornos de hibridación HB-1000 de UVP. 2 sistemas electroforesis verticales para proteínas EC sistema electroforesis secuenciación ADN EC80. 1 sistema de secado de geles mod. 583 de Bio-Rad. 1 termociclador capacidad para 25 tubos de 0.2 ml. 1 centrífuga sobremesa, multiárea con 3 rotores 4 detectores de radiactividad beta MCB21. 1 monitor de contaminación beta y gamma LB concentrador de muestras Savant SPD 121P. 1 campana de extracción de gases de Romero. 1 cabina de flujo laminar de Flufrance. 5 cabinas trabajo material radiactivo metacrilato 1cm espesor 6 pantallas protección metacrilato 1 cm espesor.

26 ISÓTOPOS Y SEGURIDAD BIOQUÍMICA El laboratorio gamma está situado en la planta alta del edificio y está equipado para trabajar con fuentes de emisiones gamma ( 125 I). Está formado por dos salas, la primera es una esclusa de seguridad que da paso a otra sala donde están los equipos y donde se desarrollan los trabajos. Presenta el siguiente equipamiento: 1 refrigerador de 4ºC. 1 congelador de -20ºC.. 1 contador radiactividad gamma 1 termobloque mod termobloque AccublockTM mod. D hormo de hibridación HB-1000 de UVP. 2 sistemas electroforesis verticales proteínas EC detector de radiactividad beta MCB21 1 monitor de contaminación beta y gamma LB12. 1 campana de extracción de gases con filtros especiales para radioisótopos de yodo. 1 pantalla de protección de metacrilato plomado. SERVICIOS 1. Servicios de seguridad química y biológica Gestión de residuos tóxicos y peligrosos tanto de origen biológico como químico, siguiendo la normativa vigente. Asesoramiento y medios materiales para la correcta segregación y manipulación de residuos. Fichas de seguridad de los reactivos que empleen en investigaciones. Información sobre procedimientos de trabajo y asesoramiento en las medidas preventivas y de protección específicas del nivel de contención biológica utilizado. 2. Servicios de laboratorios de isótopos Supervisión de las instalaciones radiactivas del Centro Entrega a usuarios de los isótopos necesarios para la realización de sus experimentos (32P dctp). Control técnico del equipamiento de las instalaciones o la descontaminación de las zonas/personas en caso de accidente con fuente radiactiva. Informar a los usuarios de las medidas de protección radiológica y de seguridad. Gestión de la dosimetría personal de los usuarios. Gestión de los residuos radiactivos generados en los laboratorios de isótopos. TARIFAS INTERNAS SOLO Radioactividad 1.5 euros por microlitro de 32P dctp CONTACTO Responsable Científico: José Carlos Reyes jose.reyes@cabimer.es Responsable Técnico: Juan Carlos Ostos Juan.ostos@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla

27 PRODUCCIÓN CELULAR

28 PRODUCCIÓN CELULAR PRESENTACIÓN LINEAS DE ACTUACIÓN La Unidad de Apoyo de Producción Celular (UAPC) de CABIMER, orienta sus actividades a la producción de células troncales humanas consideradas desde el año 2003 como medicamento en investigación (M.E.I.), su producción se lleva a cabo bajo las normas de correcta fabricación (NCF) para su utilización en ensayos clínicos experimentales y tratamientos establecidos de terapia celular. La producción celular se realiza en dos salas blancas que han sido acreditadas por la Agencia Española del Medicamento y Productos Sanitario (AEMPS). La unidad UAPC-CABIMER produce células mesenquimales autólogas derivadas de tejido adiposo subcutáneo humano, destinadas una vez alcanzada la dosis celular, a ser infundidas a los pacientes reclutados en los ensayo clínico en los que participara CABIMER. La producción celular se realiza bajo una estricta calidad, sometiendo a controles continuos no solo al producto intermedio y final si no al personal, equipos, instalación, materiales y reactivos. Todos los ensayos clínicos en los que esta participando la UAPC-CABIMER han sido aprobados por la Agencia Española del Medicamento y Productos Sanitario (AEMPS) y cuenta con coordinadores científicos y clínicos que son los responsables de los mismos. UAPC- CABIMER participa en ellos como unidad de producción contratada. Figura 1. Esquema de las instalaciones de la UAPC

29 PRODUCCIÓN CELULAR PERSONAL La UAPC cuenta con la colaboración de un equipo multidisciplinar, experto de las diferentes áreas que sustentan la producción de un medicamento celular: 1. Departamento técnico 2. Departamento de producción 3. Departamento de control de calidad 4. Departamento de garantía de calidad TARIFAS Los precios de producción de los distintos productos celulares dependen del tipo celular, dosis requerida y controles establecidos en el PEI (protocolo experimental de investigación). Se realizarán estudios de coste para cada ensayo clínico en el que participa la unidad. Servicio Tarifa Académica y SSPA Tarifa Empresas/ Instituciones Ensayo de Esterilidad Detección de Micoplasma Ensayo de Endotoxinas Consultar Fabricación de un medicamento celular (suspensión de células mesenquimales) CONTACTO Responsable Científico Dr. Bernat Soria // bernat.soria@cabimer.es Dirección Técnica Dr. Karim Hmadcha // Dirección Técnica suplente Dr. Bernat Soria // bernat.soria@cabimer.es Responsable de Producción Victoria Jiménez // victoria.jimenez@cabimer.es Responsable de Garantía de Calidad María Gálvez // maria.galvez@cabimer.es Responsable de Control de Calidad María Bermejo // maria.bermejo@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla

30 HISTOLOGÍA

31 HISTOLOGÍA PRESENTACIÓN SERVICIOS La Histología, como rama de las ciencias morfológicas, constituye un eslabón indispensable para conocer la forma y estructura de los tejidos, tanto en condiciones normales como patológicas. El estudio cuidadoso de sus componentes permite deducir muchos aspectos de la función de células y tejidos. EQUIPAMIENTO La Unidad cuenta con los siguientes equipos: Procesador de tejidos automático Leica TP 1020 Estación de inclusión parafina Leica EG 1150 H Placa Refrigeradora Leica EG 1150 C Estufa de 60º C Selecta. Frigorífico y congelador. Microtomo motorizado Leica RM 2255 Criostato motorizado Leica CM 3050 S Vibratomo Leica VT 1000 S Microscopio de rutina Zeiss Axioskop 40, equipado con una cámara digital, y M. inverso. Cytospin Shandon 4 Thermo Scientific Campana de extracción Flowtronic Baño de flotación Leica HI Balanza Agitador magnético calefactado VWR VMS-C4 Pinza térmica Leica EG Lupa de luz fría Leica CLS 100X Procesamiento de muestras en parafina: Programación y control del Procesador de inclusión automático de tejidos. Descalcificación de muestras. Procesamiento completo de inclusión en parafina. Corte seriado en microtomo y montaje de tejidos. Desparafinado de cortes, realización tinciones, Deshidratación y montaje de portaobjetos. Procesamiento de muestras en congelación: Preparación de bloques por congelación. Corte seriado de bloques por congelación en el Criostato y recogida de cortes en portaobjetos o en flotación. Tinción de los cortes por congelación. Preparación de muestras para corte en Vibratomo: Corte seriado de muestras en Vibratomo, montaje y tinción. Citocentrifugación: Procesamiento de muestras líquidas en el Cytospin: programación, preparación de la muestra, centrifugación, fijación y tinción. Tinciones: Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Masson, Azul de toluidina, Nissl, Panóptico Rápido. Se pueden poner a punto protocolos específicos de tinción según demanda.

32 HISTOLOGÍA TARIFAS INTERNAS SOLO FUNCIONAMIENTO Servicio Preparar un bloque de parafina Unidad 1 U = 1 bloque Importe por Unidad ( ) 6.72 Cortar un bloque de parafina 1 U = 10 portaobjetos U = 5 portaobjetos 4.06 Contrastar parafina 1 U = 10 portaobjetos U = 5 portaobjetos 4.06 Preparar un bloque congelado 1 U = 1 bloque 2.80 Cortar un bloque congelado (criostato) 1 U = 10 portaobjetos U = 5 portaobjetos 4.06 Contrastar congelado 1 U = 10 portaobjetos U = 5 portaobjetos 2.10 Cortar una biopsia en vibratomo (flotación) 1 U = 3x3 cm Cortar una biopsia en vibratomo y montar 1 U = 10 portaobjetos U = 5 portaobjetos 3.36 Contrastar vibratomo 1 U = 10 portaobjetos U = 5 portaobjetos 2.10 Panóptico Cytospin 1 U = 4 portaobjetos 4.76 Tricrómico de Masson. - Parafina + desparafinado 1 U = 10 portaobjetos Tricrómico de Masson. - Criostato + deshidratación 1 U = 10 portaobjetos 9.10 Descuento 25% en 5-10 muestras 50% en +10 muestras El técnico de Histología se responsabilizará de la correcta manipulación de las muestras biológicas y de entregar, en el menor plazo posible, los bloques de inclusión, las series de cortes y tinciones que se soliciten. CONTACTO Responsable Científico: Manuel Álvarez Dolado manuel.alvarez@cabimer.es Responsable Técnico: Cindy Cruz Zambrano cindy.cruz@cabimer.es Parque Científico y Tecnológico Cartuja Edificio Cabimer Avenida Américo Vespucio s/n Sevilla

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