ENSAYO DE APTITUD EA-INF-LI-012

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1 INSTITUTO BOLIVIANO DE METROLOGÍA ENSAYO DE APTITUD EA-INF-LI-012 "Determinación de Parámetros Proximales en Harina de Soya" INFORME FINAL DIRECCIÓN DE METROLOGÍA INDUSTRIAL Y CIENTÍFICA DMIC Año 2014 Elaborado por Lic. Liliana Flores Fecha Revisado por Lic. Mabel Delgado Fecha

2 INDICE GENERAL INDICE GENERAL... 2 ORGANIZACIÓN... 3 UNIDAD DE COORDINACIÓN... 3 INTRODUCCIÓN... 3 OBJETIVOS... 3 ENSAYO DE APTITUD... 4 ITEM DE ENSAYO... 4 CRONOGRAMA... 4 MEDICIONES... 5 VALORES DE REFERENCIA... 5 HOMOGENEIDAD Y ESTABILIDAD... 5 CONFIDENCIALIDAD... 7 RESULTADOS... 7 Humedad... 7 Ceniza Grasa Proteína Fibra Actividad Ureásica Solubilidad Proteica RESUMEN DE RESULTADOS CONCLUSIONES LABORATORIOS PARTICIPANTES AGRADECIMIENTOS REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ANEXO METODOS

3 ORGANIZACIÓN Laboratorio de Química Dirección de Metrología Industrial y Científica DMIC Instituto Boliviano de Metrología-IBMETRO La Paz, Av. Camacho, casi Esq. Bueno Nº 1488 Tel/Fax (591-2) int. 118 Web: UNIDAD DE COORDINACIÓN Lic. Mabel Delgado Lic. Liliana Flores Tec. Sup. Paola Avendaño mdelgado@ibmetro.gob.bo mlflores@ibmetro.gob.bo pa.rivera@ibmetro.gob.bo INTRODUCCIÓN Los Ensayos de Aptitud son una importante herramienta para la determinación del desempeño de los laboratorios a través de comparaciones interlaboratoriales, indispensables para el aseguramiento de la calidad de los resultados en los ensayos según la NB-ISO-IEC-17025:2005 Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y de calibración. IBMETRO en su calidad de Instituto Nacional de Metrología es proveedor de Ensayos de Aptitud, atendiendo las necesidades de los laboratorios nacionales. Es por esto que proponemos el Ensayo de Aptitud Determinación de parámetros proximales en Harina de Soya EA-LI-012, para determinar el desempeño de los laboratorios en los parámetros propuestos. El presente ensayo está dirigido a apoyar a los laboratorios dedicados al análisis de alimentos e instituciones en general para que puedan contar con una herramienta mediante la cual puedan evaluar el estado de las mediciones según sus métodos de rutina OBJETIVOS Determinar el desempeño de los laboratorios participantes para el ensayo propuesto en la Determinación de parámetros proximales en harina de soya 3

4 Contribuir en la identificación de problemas en los laboratorios, en la implementación, toma y adopción de acciones correctivas. Apoyar a los laboratorios en el cumplimiento de la ISO/IEC ENSAYO DE APTITUD EA-PRO-LI-012 DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS PROXIMALES EN HARINA DE SOYA" ITEM DE ENSAYO Foto: Muestras enviadas a los participantes CRONOGRAMA Actividades Convocatoria y Difusión del Protocolo Inscripción de los participantes Envío del ítem de ensayo y código de participación Mediciones y envío de resultados Informe Preliminar Informe Final Fechas límites* 16 de junio 11 de julio 14 al 18 de julio 22 de agosto 5 de septiembre 25 de septiembre 4

5 MEDICIONES Las mediciones se realizaron bajo el siguiente esquema: Muestra A1 Muestra A2 Nº de replicas por muestra 3 3 VALORES DE REFERENCIA Los valores de referencia y su incertidumbre fueron asignados por consenso entre los laboratorios participantes en el ensayo. El método usado para la determinación del valor de referencia se describe en el capítulo 5.6 de la ISO 13528:2005, como el promedio robusto de los resultados reportados por todos los participantes utilizando el Algoritmo A. La incertidumbre estandar que deriva de este promedio se puede estimar mediante la siguiente expresión: Siendo = desviación estandar robusta obtenida mediante el Algoritmo A = Número de Laboratorios participantes HOMOGENEIDAD Y ESTABILIDAD El analisis de los resultados de los estudios de homogeneidad y estabilidad fueron realizados en los laboratorios de IBMETRO según la metodología establecida en el ANEXO B de la Norma ISO 13528:2005 Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons. Para el caso de la homogeneidad los resultados alcanzados en el estudio cumplen el criterio establecido Siendo = desviación estandar entre muestras = estimador de la dispersión de los laboratorios La homogeneidad de las muestras resultó adecuada para este ensayo. 5

6 Para el caso de la estabilidad se realizó un monitoreo de las muestras al inicio, durante el periodo del ensayo y en la fecha de envío de los resultados por parte de los participantes, los resultados obtenidos demuestran estabilidad adecuada de las muestras usadas. EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO El tratamiento de los datos para la evaluación del desempeño se realizó en base a la Norma ISO 13528:2005, Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons. La evaluación del desempeño de cada laboratorio se realizó mediante el índice z-score. Donde (Ec. 1) = Valor de referencia asignado según ISO = Resultado del laboratorio i = Dispersión asignada para evaluar el ensayo según ISO La clasificación de los resultados se realiza como: SATISFACTORIO, CUESTIONABLE, INSATISFACTORIO, a partir de la interpretación de este parámetro. A menor valor absoluto de z mejor es el desempeño del laboratorio. z 2 Satisfactorio 2 < z < 3 Cuestionable z 3 Insatisfactorio Para ambas muestras han sido reportados el grado de equivalencia que se calcula según: (Ec. 2) Donde = Resultado del Laboratorio 6

7 = Valor de referencia Para los laboratorios que reportaron resultados tanto en la muestra A1 como en la A2 se pudieron evaluar la precisión y el sesgo de la medición mediante gráficos de Youden. CONFIDENCIALIDAD Los resultados del Ensayo de Aptitud han sido tratados con absoluta confidencialidad, cada laboratorio ha sido identificado por un codigo individual, que es conocido solo por el laboratorio y por la Unidad de Coordinación del ensayo. RESULTADOS Humedad Parámetro Valor asignado del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo Incertidumbre del MR Humedad 11,84 g/100g 0,55 g/100g 0,12 g/100g Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 2A1 11,29 0,14-0,55-1,00 Satisfactorio 10A1 12,10 0,01 0,26 0,47 Satisfactorio 3A1 12,41 0,01 0,57 1,04 Satisfactorio 7A1 12,05 0,01 0,21 0,38 Satisfactorio 11A1 12,16 0,04 0,32 0,58 Satisfactorio 9A1 11,85 0,06 0,01 0,02 Satisfactorio 19A1 10,93 0,13-0,91-1,65 Satisfactorio 16A1 11,61 0,02-0,23-0,42 Satisfactorio 17A1 11,01 0,01-0,83-1,51 Satisfactorio 8A1 12,34 0,01 0,50 0,91 Satisfactorio 14A1 12,00 0,00 0,16 0,29 Satisfactorio 5A1 9,50 0,01-2,34-4,25 Insatisfactorio 18A1 12,34 0,01 0,50 0,91 Satisfactorio 1A1 12,39 0,00 0,55 1,00 Satisfactorio 12A1 11,77 0,01-0,07-0,13 Satisfactorio 4A1 11,93 0,02 0,09 0,16 Satisfactorio 2A2 11,07 0,01-0,77-1,40 Satisfactorio 10A2 12,07 0,02 0,23 0,42 Satisfactorio 3A2 12,35 0,00 0,51 0,93 Satisfactorio 7

8 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 17A1 8A1 14A1 5A1 18A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 17A2 8A2 14A2 5A2 18A2 1A2 12A2 4A2 Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 7A2 11,98 0,03 0,14 0,25 Satisfactorio 11A2 12,17 0,00 0,33 0,60 Satisfactorio 9A2 11,96 0,02 0,12 0,22 Satisfactorio 19A2 11,48 0,16-0,36-0,65 Satisfactorio 16A2 11,58 0,01-0,26-0,47 Satisfactorio 17A2 10,73 0,01-1,11-2,02 Cuestionable 8A2 12,46 0,01 0,62 1,13 Satisfactorio 14A2 11,90 0,14 0,06 0,11 Satisfactorio 5A2 9,44 0,02-2,40-4,36 Insatisfactorio 18A2 12,37 0,01 0,53 0,96 Satisfactorio 1A2 12,45 0,05 0,61 1,11 Satisfactorio 12A2 11,80 0,03-0,04-0,07 Satisfactorio 4A2 11,91 0,03 0,07 0,13 Satisfactorio Tabla 1: Resultados reportados por los laboratorio HUMEDAD Valor informado Valor medio interlaboratorio +/-s Laboratorios Participantes Grafico 1: Dispersion de resultados por Laboratorio 8

9 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 17A1 8A1 14A1 5A1 18A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 17A2 8A2 14A2 5A2 18A2 1A2 12A2 4A2 D 5A2 5A1 17A2 19A1 17A1 2A2 2A1 16A2 19A2 16A1 12A1 12A2 9A1 4A2 4A1 9A2 14A1 7A2 14A2 7A1 10A2 10A1 11A1 11A2 8A1 18A1 3A2 18A2 1A1 1A2 3A1 8A2 3 HUMEDAD Laboratorios Participantes Grafico 2: Indice z por laboratorio 1,00 0,50 0,00-0,50-1,00-1,50-2,00-2,50-3,00 Laboratorios Participantes Grafico 3: Grado de equivalencia por Laboratorio / Humedad 9

10 Grafico 4: Gráfico Youden por Laboratorio Todos los resultados que se encuentran dentro la primera elipse son válidos Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse, por encima o por debajo de la línea diagonal, son resultados con errores aleatorios Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados con elevada precisión Los resultados que estan fuera de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados precisos con errores sistemáticos Los resultados que estan fuera de la elipse y no se encuentran sobre la línea diagonal son resultados con errores crasos 10

11 Ceniza Parámetro Valor asignado del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo Incertidumbre del MR Ceniza 6,73 g/100g 0,45 g/100g 0,10 g/100g Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 2A1 8,45 0,37 1,72 3,82 Insatisfactorio 10A1 6,45 0,02-0,28-0,62 Satisfactorio 3A1 6,37 0,05-0,36-0,80 Satisfactorio 7A1 6,46 0,01-0,27-0,60 Satisfactorio 11A1 6,45 0,05-0,28-0,62 Satisfactorio 9A1 6,73 0,01 0,00 0,00 Satisfactorio 19A1 6,02 0,10-0,71-1,58 Satisfactorio 16A1 6,42 0,00-0,31-0,69 Satisfactorio 17A1 7,16 0,01 0,43 0,96 Satisfactorio 8A1 6,22 0,01-0,51-1,13 Satisfactorio 14A1 7,26 0,01 0,53 1,18 Satisfactorio 5A1 6,80 0,00 0,07 0,16 Satisfactorio 18A1 6,75 0,07 0,02 0,04 Satisfactorio 1A1 6,67 0,04-0,06-0,13 Satisfactorio 12A1 7,21 0,05 0,48 1,07 Satisfactorio 4A1 7,06 0,04 0,33 0,73 Satisfactorio 2A2 8,38 0,28 1,65 3,67 Insatisfactorio 10A2 6,47 0,03-0,26-0,58 Satisfactorio 3A2 6,36 0,00-0,37-0,82 Satisfactorio 7A2 6,43 0,04-0,30-0,67 Satisfactorio 11A2 6,57 0,01-0,16-0,36 Satisfactorio 9A2 6,67 0,02-0,06-0,13 Satisfactorio 19A2 6,10 0,05-0,63-1,40 Satisfactorio 16A2 6,37 0,01-0,36-0,80 Satisfactorio 17A2 7,33 0,01 0,60 1,33 Satisfactorio 8A2 6,18 0,01-0,55-1,22 Satisfactorio 14A2 7,24 0,04 0,51 1,13 Satisfactorio 5A2 6,88 0,01 0,15 0,33 Satisfactorio 18A2 6,87 0,06 0,14 0,31 Satisfactorio 1A2 6,73 0,02 0,00 0,00 Satisfactorio 12A2 7,25 0,00 0,52 1,16 Satisfactorio 4A2 7,07 0,01 0,34 0,76 Satisfactorio Tabla 2: Resultados reportados por los laboratorio 11

12 19A1 19A2 8A2 8A1 3A2 16A2 3A1 16A1 10A1 10A2 7A2 7A1 11A1 11A2 1A1 9A2 9A1 1A2 5A1 18A1 5A2 18A2 4A2 4A1 17A1 14A2 12A1 12A2 14A1 17A2 2A2 2A1 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 17A1 8A1 14A1 5A1 18A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 17A2 8A2 14A2 5A2 18A2 1A2 12A2 4A2 9 CENIZA Valor informado 8 Valor medio interlaboratorio +/-s Laboratorios Participantes Grafico 5: Dispersion de resultados por Laboratorio 3 CENIZA Laboratorio Participante Grafico 6: Indice z por laboratorio 12

13 Muestra A2 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 17A1 8A1 14A1 5A1 18A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 17A2 8A2 14A2 5A2 18A2 1A2 12A2 4A2 D 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00-0,50-1,00 Grafico 7: Grado de equivalencia por Laboratorio / Ceniza 6 CENIZA Muestra A1 Grafico 8: Gráfico Youden por Laboratorio 13

14 Todos los resultados que se encuentran dentro la primera elipse son válidos Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse, por encima o por debajo de la línea diagonal, son resultados con errores aleatorios Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados con elevada precisión Los resultados que estan fuera de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados precisos con errores sistemáticos Los resultados que estan fuera de la elipse y no se encuentran sobre la línea diagonal son resultados con errores crasos Grasa Parámetro Valor asignado del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo Incertidumbre del MR Grasa 2,60 g/100g 0,35 g/100g 0,08 g/100g Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 2A1 3,30 0,41 0,7 2,00 Satisfactorio 10A1 2,72 0,02 0,12 0,34 Satisfactorio 3A1 2,35 0,07-0,25-0,71 Satisfactorio 7A1 2,65 0,03 0,05 0,14 Satisfactorio 11A1 2,66 0,04 0,06 0,17 Satisfactorio 9A1 2,26 0,08-0,34-0,97 Satisfactorio 19A1 2,81 0,18 0,21 0,60 Satisfactorio 16A1 2,51 0,02-0,09-0,26 Satisfactorio 8A1 2,04 0,00-0,56-1,60 Satisfactorio 14A1 3,45 0,40 0,85 2,43 Cuestionable 5A1 2,23 0,01-0,37-1,06 Satisfactorio 18A1 2,88 0,08 0,28 0,80 Satisfactorio 1A1 2,58 0,06-0,02-0,06 Satisfactorio 12A1 2,27 0,01-0,33-0,94 Satisfactorio 4A1 2,70 0,02 0,1 0,29 Satisfactorio 2A2 3,66 0,15 1,06 3,03 Insatisfactorio 10A2 2,65 0,04 0,05 0,14 Satisfactorio 3A2 2,40 0,02-0,2-0,57 Satisfactorio 7A2 2,70 0,02 0,1 0,29 Satisfactorio 11A2 2,67 0,03 0,07 0,20 Satisfactorio 9A2 2,35 0,04-0,25-0,71 Satisfactorio 19A2 3,00 0,08 0,4 1,14 Satisfactorio 16A2 2,36 0,13-0,24-0,69 Satisfactorio 8A2 2,03 0,01-0,57-1,63 Satisfactorio 14

15 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 8A1 14A1 5A1 18A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 8A2 14A2 5A2 18A2 1A2 12A2 4A2 Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 14A2 3,07 0,08 0,47 1,34 Satisfactorio 5A2 2,55 0,00-0,05-0,14 Satisfactorio 18A2 2,82 0,06 0,22 0,63 Satisfactorio 1A2 2,62 0,05 0,02 0,06 Satisfactorio 12A2 2,31 0,05-0,29-0,83 Satisfactorio 4A2 2,75 0,01 0,15 0,43 Satisfactorio Tabla 3: Resultados reportados por los laboratorio 4,0 GRASA Valor informado Valor medio interlaboratorio +/-s 3,0 2,0 1,0 Laboratorios Participantes Grafico 9: Dispersion de resultados por Laboratorio 15

16 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 8A1 14A1 5A1 18A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 8A2 14A2 5A2 18A2 1A2 12A2 4A2 D 8A2 8A1 9A1 5A1 12A1 16A2 12A2 9A2 3A1 3A2 16A1 1A1 5A2 10A2 11A1 1A2 7A1 11A2 10A1 4A1 7A2 4A2 18A1 18A2 19A1 19A2 14A2 2A1 14A1 2A2 3 GRASA Laboratorio Participante Grafico 10 : Indice z por laboratorio 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0-0,2-0,4-0,6-0,8 Grafico 11: Grado de equivalencia por Laboratorio / Grasa 16

17 Muestra A2 GRASA Muestra A1 Grafico 12: Gráfico Youden por Laboratorio Todos los resultados que se encuentran dentro la primera elipse son válidos Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse, por encima o por debajo de la línea diagonal, son resultados con errores aleatorios Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados con elevada precisión Los resultados que estan fuera de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados precisos con errores sistematicos Los resultados que estan fuera de la elipse y no se encuentran sobre la línea diagonal son resultados con errores crasos 17

18 Proteína Parámetro Valor asignado del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo Incertidumbre del MR Proteína 46,36 g/100g 0,69 g/100g 0,16 g/100g Cód de Lab Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 2A1 51,03 0,10 4,67 6,8 Insatisfactorio 10A1 46,40 0,20 0,04 0,1 Satisfactorio 3A1 46,68 0,08 0,32 0,5 Satisfactorio 7A1 47,72 0,49 1,36 2,0 Satisfactorio 11A1 46,45 0,02 0,09 0,1 Satisfactorio 9A1 46,26 0,01-0,1-0,1 Satisfactorio 19A1 46,33 0,17-0,03 0,0 Satisfactorio 16A1 46,40 0,14 0,04 0,1 Satisfactorio 17A1 45,63 0,09-0,73-1,1 Satisfactorio 8A1 46,18 0,15-0,18-0,3 Satisfactorio 14A1 44,54 0,13-1,82-2,6 Cuestionable 5A1 46,09 0,00-0,27-0,4 Satisfactorio 1A1 45,69 0,31-0,67-1,0 Satisfactorio 12A1 46,53 0,03 0,17 0,2 Satisfactorio 4A1 45,90 0,14-0,46-0,7 Satisfactorio 2A2 51,17 0,18 4,81 7,0 Insatisfactorio 10A2 46,27 0,06-0,09-0,1 Satisfactorio 3A2 46,09 0,15-0,27-0,4 Satisfactorio 7A2 47,69 0,43 1,33 1,9 Satisfactorio 11A2 46,52 0,07 0,16 0,2 Satisfactorio 9A2 46,34 0,01-0,02 0,0 Satisfactorio 19A2 46,41 0,00 0,05 0,1 Satisfactorio 16A2 46,85 0,07 0,49 0,7 Satisfactorio 17A2 45,56 0,09-0,8-1,2 Satisfactorio 8A2 46,41 0,13 0,05 0,1 Satisfactorio 14A2 44,13 0,18-2,23-3,2 Insatisfactorio 5A2 46,05 0,04-0,31-0,4 Satisfactorio 1A2 45,60 0,16-0,76-1,1 Satisfactorio 12A2 46,51 0,11 0,15 0,2 Satisfactorio 4A2 47,49 0,07 1,13 1,6 Satisfactorio Tabla 4: Resultados reportados por los laboratorio 18

19 14A2 14A1 1A2 17A1 17A2 4A1 1A1 8A1 5A2 5A1 3A2 19A1 10A2 9A1 9A2 19A2 11A1 16A1 8A2 10A1 12A1 11A2 12A2 3A1 16A2 7A1 7A2 4A2 2A2 2A1 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 17A1 8A1 14A1 5A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 17A2 8A2 14A2 5A2 1A2 12A2 4A2 52,00 PROTEINA 50,00 48,00 46,00 44,00 42,00 40,00 Valor informado Valor medio interlaboratorio +/-s Valor de referencia 38,00 Laboratorios Participantes Grafico 13: Dispersion de resultados por Laboratorio 3 PROTEINA Laboratorio Participante Grafico 14: Indice z por laboratorio 19

20 Muestra A2 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 17A1 8A1 14A1 5A1 1A1 12A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 17A2 8A2 14A2 5A2 1A2 12A2 4A2 D 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0-1,0-2,0-3,0 Laboratorios Participantes Grafico 15: Grado de equivalencia por Laboratorio / Proteína Gráfico Youden Muestra A1 Grafico 16: Gráfico Youden por Laboratorio 20

21 Todos los resultados que se encuentran dentro la primera elipse son válidos Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse, por encima o por debajo de la línea diagonal, son resultados con errores aleatorios Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados con elevada precisión Los resultados que estan fuera de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados precisos con errores sistemáticos Los resultados que estan fuera de la elipse y no se encuentran sobre la línea diagonal son resultados con errores crasos Fibra Parámetro Valor asignado del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo Incertidumbre del MR Fibra 4,21 g/100g 0,61g/100g 0,15 g/100g Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 2A1 3,49 0,06-0,72-1,18 Satisfactorio 10A1 4,14 0,19-0,07-0,11 Satisfactorio 3A1 3,91 0,07-0,3-0,49 Satisfactorio 7A1 4,77 0,17 0,56 0,92 Satisfactorio 11A1 4,15 0,08-0,06-0,10 Satisfactorio 9A1 4,57 0,02 0,36 0,59 Satisfactorio 19A1 4,70 0,40 0,49 0,80 Satisfactorio 16A1 4,21 0,30 0 0,00 Satisfactorio 8A1 3,55 0,07-0,66-1,08 Satisfactorio 5A1 5,06 0,01 0,85 1,39 Satisfactorio 1A1 3,49 0,04-0,72-1,18 Satisfactorio 12A1 4,89 0,01 0,68 1,11 Satisfactorio 2A2 3,02 0,23-1,19-1,95 Satisfactorio 10A2 4,46 0,19 0,25 0,41 Satisfactorio 3A2 3,97 0,03-0,24-0,39 Satisfactorio 7A2 4,67 0,12 0,46 0,75 Satisfactorio 11A2 4,22 0,06 0,01 0,02 Satisfactorio 9A2 4,67 0,02 0,46 0,75 Satisfactorio 19A2 4,27 0,03 0,06 0,10 Satisfactorio 16A2 3,95 0,03-0,26-0,43 Satisfactorio 8A2 3,35 0,07-0,86-1,41 Satisfactorio 21

22 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 8A1 5A1 1A1 12A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 8A2 5A2 1A2 12A2 Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 5A2 4,78 0,00 0,57 0,93 Satisfactorio 1A2 3,66 0,08-0,55-0,90 Satisfactorio 12A2 4,98 0,06 0,77 1,26 Satisfactorio Tabla 5: Resultados reportados por los laboratorio 6 FIBRA Valor informado 3 Valor medio interlaboratorio +/-s 3 Laboratorios Participantes Grafico 17: Dispersion de resultados por Laboratorio 22

23 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 16A1 8A1 5A1 1A1 12A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 16A2 8A2 5A2 1A2 12A2 D 2A2 8A2 2A1 1A1 8A1 1A2 3A2 3A1 16A2 16A1 10A1 11A2 11A1 19A2 19A1 9A1 7A2 10A2 7A1 9A2 5A2 12A1 12A2 5A1 3 FIBRA Laboratorio Participante Grafico 18: Indice z por laboratorio 1 0,5 0-0,5-1 -1,5 Grafico 19: Grado de equivalencia por Laboratorio / Fibra 23

24 Muestra A2 FIBRA Muestra A1 Grafico 20: Gráfico Youden por Laboratorio Todos los resultados que se encuentran dentro la primera elipse son válidos Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse, por encima o por debajo de la línea diagonal, son resultados con errores aleatorios Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados con elevada precisión Los resultados que estan fuera de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados precisos con errores sistemáticos Los resultados que estan fuera de la elipse y no se encuentran sobre la línea diagonal son resultados con errores crasos Actividad Ureásica Parámetro Valor asignado del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo Incertidumbre del MR Actividad Ureasica 0,075 réplicas/uph 0,048 réplicas/uph 0,013 replicas/uph Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 24

25 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 8A1 5A1 1A1 12A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 8A2 5A2 1A2 12A2 2A1 0,08 0,00 0,01 0,10 Satisfactorio 10A1 0,04 0,00-0,04-0,73 Satisfactorio 3A1 0,08 0,01 0,01 0,10 Satisfactorio 7A1 0,05 0,01-0,03-0,52 Satisfactorio 11A1 0,16 0,01 0,09 1,77 Satisfactorio 9A1 0,05 0,00-0,03-0,52 Satisfactorio 19A1 0,06 0,01-0,02-0,31 Satisfactorio 8A1 0,03 0,01-0,05-0,94 Satisfactorio 5A1 0,39 0,00 0,32 6,56 Insatisfactorio 1A1 0,05 0,01-0,03-0,52 Satisfactorio 12A1 0,11 0,00 0,04 0,73 Satisfactorio 2A2 0,09 0,00 0,02 0,31 Satisfactorio 10A2 0,04 0,00-0,04-0,73 Satisfactorio 3A2 0,05 0,00-0,03-0,52 Satisfactorio 7A2 0,04 0,01-0,04-0,73 Satisfactorio 11A2 0,16 0,01 0,09 1,77 Satisfactorio 9A2 0,05 0,00-0,03-0,52 Satisfactorio 19A2 0,07 0,01 0,00-0,10 Satisfactorio 8A2 0,03 0,01-0,05-0,94 Satisfactorio 5A2 0,39 0,00 0,32 6,56 Insatisfactorio 1A2 0,06 0,00-0,02-0,31 Satisfactorio 12A2 0,13 0,01 0,06 1,15 Satisfactorio Tabla 6: Resultados reportados por los laboratorio ACTIVIDAD UREÁSICA 0,45 0,40 0,35 0,30 Valor informado Valor medio interlaboratorio +/-s 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00 Laboratorios Participantes 25

26 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 19A1 8A1 5A1 1A1 12A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 19A2 8A2 5A2 1A2 12A2 D 8A2 8A1 7A2 10A1 7A1 1A1 10A2 9A1 3A2 9A2 1A2 19A1 19A2 2A1 3A1 2A2 12A1 12A2 11A1 11A2 5A1 5A2 Grafico 21: Dispersion de resultados por Laboratorio 3 ACTIVIDAD UREÁSICA Laboratorio Participante Grafico 22: Indice z por laboratorio 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00-0,05-0,10 Laboratorios Participantes Grafico 23: Grado de equivalencia por Laboratorio / Actividad ureásica 26

27 Muestra A2 Actividad ureásica Muestra A1 Grafico 24: Gráfico Youden por Laboratorio Todos los resultados que se encuentran dentro la primera elipse son válidos Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse, por encima o por debajo de la línea diagonal, son resultados con errores aleatorios Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados con elevada precisión Los resultados que estan fuera de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados precisos con errores sistemáticos Los resultados que estan fuera de la elipse y no se encuentran sobre la línea diagonal son resultados con errores crasos Solubilidad Proteica Parámetro Valor asignado del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo Incertidumbre del MR Solubilidad Proteica 77,97 g/100g 10,80 g/100g 3,02 g/100g Código de Promedio valores reportados SD D Z Clasificación 2A1 87,32 0,86 9,35 0,87 Satisfactorio 27

28 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 8A1 5A1 1A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 8A2 5A2 1A2 4A2 10A1 85,13 0,53 7,16 0,66 Satisfactorio 3A1 86,26 0,64 8,29 0,77 Satisfactorio 7A1 67,93 0,28-10,04-0,93 Satisfactorio 11A1 84,20 0,03 6,23 0,58 Satisfactorio 9A1 81,07 0,52 3,1 0,29 Satisfactorio 8A1 82,29 0,78 4,32 0,40 Satisfactorio 5A1 5,37 0,06-72,6-6,72 Insatisfactorio 1A1 86,56 0,28 8,59 0,80 Satisfactorio 4A1 81,80 0,91 3,83 0,35 Satisfactorio 2A2 85,58 1,65 7,61 0,70 Satisfactorio 10A2 84,29 0,40 6,32 0,59 Satisfactorio 3A2 84,78 0,46 6,81 0,63 Satisfactorio 7A2 68,62 0,14-9,35-0,87 Satisfactorio 11A2 84,77 0,08 6,8 0,63 Satisfactorio 9A2 81,75 0,13 3,78 0,35 Satisfactorio 8A2 80,62 0,54 2,65 0,25 Satisfactorio 5A2 5,07 0,07-72,9-6,75 Insatisfactorio 1A2 87,51 0,26 9,54 0,88 Satisfactorio 4A2 80,52 0,55 2,55 0,24 Satisfactorio Tabla 7: Resultados reportados por los laboratorio 100,01 SOLUBILIDAD PROTEICA 90,01 80,01 70,01 60,01 50,01 40,01 30,01 20,01 Valor informado Valor medio interlaboratorio +/-s 10,01 0,01 Laboratorios Participantes Grafico 25: Dispersion de resultados por Laboratorio 28

29 2A1 10A1 3A1 7A1 11A1 9A1 8A1 5A1 1A1 4A1 2A2 10A2 3A2 7A2 11A2 9A2 8A2 5A2 1A2 4A2 D 5A2 5A1 7A1 7A2 4A2 8A2 4A1 9A1 9A2 8A1 10A2 11A1 11A2 3A2 10A1 1A1 3A1 2A2 1A2 2A1 3 SOLUBILIDAD PROTEICA Laboratorio Participante Grafico 26: Indice z por laboratorio Laboratorios Participantes Grafico 27: Grado de equivalencia por Laboratorio / Solubilidad proteica 29

30 Muestra A2 Solubilidad Proteica Muestra A1 Grafico 28: Gráfico Youden por Laboratorio Todos los resultados que se encuentran dentro la primera elipse son válidos Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse, por encima o por debajo de la línea diagonal, son resultados con errores aleatorios Todos los resultados que estan dentro de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados con elevada precisión Los resultados que estan fuera de la primera elipse y sobre la línea diagonal son resultados precisos con errores sistemáticos Los resultados que estan fuera de la elipse y no se encuentran sobre la línea diagonal son resultados con errores crasos RESUMEN DE RESULTADOS Características Humedad Ceniza Grasa Proteína Fibra Actividad Ureásica Solubilidad Proteica Laboratorios que reportaron resultados Resultados satisfactorios Resultados cuestionables

31 Resultados insatisfactorios Valor asignado del MR Incertidumbre del MR Dispersión asignada para evaluar el ensayo ,84 g/100g 0,12 g/100g 0,55 g/100g 6,73 g/100g 0,10 g/100g 0,45 g/100g 2,60 g/100g 0,08 g/100g 0,35 g/100g 46,36 g/100g 0,16 g/100g 0,69 g/100g 4,21 g/100g 0,15 g/100g 0,61 g/100g 0,075 réplicas/uph 0,013 replicas/uph 0,048 réplicas/uph 77,97 g/100g 3,02 g/100g 10,80 g/100g Tabla 8. Resultados reportados por Laboratorio CONCLUSIONES Los objetivos del Ensayo han sido cumplidos, por cuanto se ha podido realizar todo el Programa y se ha podido determinar el desempeño de los Laboratorios participantes. El valor de referencia y su incertidumbre así como la dispersión asignada al ensayo fueron determinados por consenso entre los laboratorios participantes, mediante estadística robusta establecida en la Norma ISO Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons. El valor asignado a cada parámetro ha sido comparado con el valor reportado por el laboratorio experto. Se utilizó el índice z-score para la evaluación del desempeño de los laboratorios participantes. En general se obtuvo un buen desempeño en todos los parámetros, se encuentran mayores dispersiones en los parámetros fibra, solubilidad proteica y actividad ureasica. Se recomienda que los laboratorios participantes que han obtenido resultados cuestionables e insatisfactorios puedan realizar un análisis crítico en la evaluación de los resultados teniendo en cuenta la incertidumbre estándar del valor asignado u otro parámetro que usen en sus controles internos de calidad. En el análisis del Grafico de Youden se observan errores sistemáticos y aleatorios. Se sugiere revisión de los procedimientos, la calibración de instrumentos envueltos en la medición, así como la calificación de los equipos de medición analítica; el uso de Materiales de Referencia Certificados, además de los procedimientos de control interno de la calidad de los resultados con el fin de corregir los errores encontrados. Es importante que los laboratorios puedan participar en rondas anuales de Ensayos de Aptitud, de esta manera se proporciona una herramienta al laboratorio para vigilar y controlar sus procedimientos de análisis con el fin de establecer el control sobre sus mediciones y reportar resultados confiables. LABORATORIOS PARTICIPANTES 31

32 Es importante resaltar que la numeración de la tabla 9 es solamente un indicativo del número de laboratorios participantes en el EA, no está asociada a la identificación de los laboratorios en la presentación de los resultados. Nº Institución Departamento 1. ASOCIACIÓN DE AVICULTORES SANTA CRUZ 2. ADM- SAO SANTA CRUZ 3. CENTRO DE ALIMENTOS Y PRODUCTOS NATURALES COCHABAMBA 4. CIDTA -UAGRAM SANTA CRUZ 5. FUNDACIÓN CETABOL SANTA CRUZ 6. GRAVETAL BOLIVIA SANTA CRUZ 7. INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGÍA INDUSTRIAL ARGENTINA 8. INDUSTRIAS OLEAGINOSAS S.A. SANTA CRUZ 9. ITIKA S.A. TARIJA 10. LABORATORIO BIOCENTER SANTA CRUZ 11. LABORATORIO DE CALIDAD AMBIENTAL LA PAZ 12. LABORATORIO DE REFERENCIA DEL ORIENTE BOLIVIANO SANTA CRUZ 13. LABORATORIO QUIMICA DE ALIMENTOS -INLASA LA PAZ 14. SENASAG- LIDIVECO COCHABAMBA 15. SGS BOLVIA S.A. LA PAZ 16. SPECTROLAB ORURO Tabla 9. Laboratorios participantes AGRADECIMIENTOS A todos los laboratorios participantes agradecerles por el cumplimiento de los plazos del cronograma y por el interés mostrado durante esta actividad. Un agradecimiento especial al Instituto Nacional de Tecnología Industrial (INTI- Argentina) por su cooperación para el éxito de esta actividad. Nuestro agradecimiento LABROB y CIDTA por los ensayos realizados para los test de homogeneidad y estabilidad del presente Ensayo. 32

33 Agradecemos de igual manera a ADM-SAO por su colaboración en la provisión de muestras para llevar a cabo el ensayo. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS NB/ISO/IEC 17043:2010 Evaluación de la conformidad Requisitos generales para los ensayos de aptitud. ISO 13528:2005 Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons. NTC 5755: 2010 Métodos estadísticos para utilizar en ensayos de aptitud mediante comparaciones interlaboratorios ISO Guide 35:2006 Reference Material-General and Statistical Principles for Certification 33

34 ANEXO METODOS Código Descripción del Método Utilizado-Humedad 10 Secado a 130 C, durante 2 horas 3 Pesar 2,0 g de muestra, dentro de un platillo de aluminio en estufa a 130 C por 2 horas, enfriar y pesar 18 Se basa en la determinación gravimétrica de la pérdida de masa, de la muestra desecada hasta masa constante en estufa de aire 7 Método gravimétrico de secado en estufa a 105 C, hasta peso constante 2 Secado a 105 C hasta peso constante 1 Determina la humedad y cualquier material volátil a 130 C durante 2 horas. 11 Determinación del contenido humedad por pérdida de peso 34

35 Código Descripción del Método Utilizado-Humedad 12 Gravimétrico - 3 horas a 130 C 4 Se pesan 5 g ± 0,01 g de muestra y se lleva a estufa de aire forzado a 130 C ± 3 C durante 2 h, se pesa. 9 El método consiste en pesar 5 g de muestra, secar en la estufa a 130 C / 3 horas, la diferencia entre el peso inicial y el peso seco,dividido entre la masa por 100 es el porcentaje de humedad 19 a) Pesar el plato de aluminio 50 x 20 mm previamente secado, preparado para tara y enfriado en desecador. b) Pesar 2,0 g de la muestra a ser analizada en el plato de aluminio. c) Colocar en la estufa de secado a 130 C ± 3 C por el lapso de 2 horas. d) Retirar la muestra de la estufa y llevar inmediatamente al desecador hasta obtener una temperatura ambiente y pesar lo más rápidamente posible al 0,1 mg por el carácter higroscópico de la ceniza. 16 Determinar el contenido de humedad por la pérdida en peso de la muestra. Tarar las cápsulas a 130 C durante 1 hora, enfriar y pesar 5 g de muestra previamente homogeneizada. Realizar el secado a 130 C ± 3 C por 2 h. 17 Método gravimétrico 5 Este método se basa en secar la muestra a 130 C ± 3 C (por 90 minutos para harinas) para después pesar, determinar el contenido de su humedad. 8 Método por secado en estufa a 130 C ± 1 C, Tiempo 2 horas Código Descripción del Método Utilizado- Ceniza 10 Calcinado a 550 C, durante 3,5 horas 3 Pesar la capsula limpia, pesar 2,0 g de muestra dentro de la cápsula, anotar el peso de la muestra, colocar en una mufla a 600 C por 2 horas, retirar de la mufla enfriar en desecador a temperatura ambiente, pesar. 18 Destrucción de la materia orgánica presente en la muestra por calcinación y determinación gravimétrica del residuo. 7 Método gravimétrico carbonización y calcinación de la muestra a 550 C hasta peso constante 35

36 Código Descripción del Método Utilizado- Ceniza 2 Calcinación a 300 C por 30 min y 500 C por 4 h 1 El método determina como ceniza el residuo que queda después de la incineración a 600 C. 11 Determinación de ceniza por calcinación 12 Gravimétrico - Calcinación a 550 C durante 1 hora 4 Se pesan 2 g ± 0,01 g de muestra, se calcina y se lleva a mufla a 600 C ± 15 C durante 2 h, se pesa. 9 Pesar de 2 a 3 gramos de muestra en un crisol tarado, incinerar en la mufla a 600 C ± 15 C por 2 horas, enfriar en un desecador y pesar. La diferencia de peso entre el residuo (cenizas) y el peso del crisol vacío dividido entre la masa por 100, es el porcentaje de cenizas, 19 a) Pesar el crisol de porcelana previamente secado, preparado para tara y enfriado en desecador. b) Pesar 2,0 g de la muestra a ser analizada en el crisol de porcelana de 40 ml. c) Colocar en la mufla graduada a 550 C ± 20 C por el lapso de 3 horas. d) Retirar el crisol de la mufla y colocar inmediatamente en un desecador, dejándolo enfriar a temperatura ambiente durante no menos de media hora e) Estando el crisol cerca de la balanza analítica extraer el crisol y pesar lo más rápidamente posible al 0,1 mg por el carácter higroscópico de la ceniza. 16 Tarar los crisoles de porcelana en mufla a 600 C ± 15 C durante 1 hora, enfriar y pesar 2 gramos de muestra, pre incinerar la muestra y luego incinerar la muestra en mufla a 600 C ± 15 C por 2 horas, enfriar y pesar. 17 Calcinación ( Se realizó el cálculo utilizando factor de corrección de humedad) 5 Este método se basa en la incineración de la muestra a una temperatura de 550 C ± 20 C (rojo sin brillo) hasta la obtención de residuo incombustible. 8 Gravimetría, calcinación a 550 C Código Descripción del Método Utilizado-Grasa 36

37 Código Descripción del Método Utilizado-Grasa 10 Extracción con éter de petróleo durante 7 horas 3 Pesar un balón but, adicionar 80 ml de éter de petróleo e instalar el extractor but, doblar en cono papel filtro y adicionar a un cartucho de celulosa y pesar 5 gramos de muestra y cubrir con algodón, llevar a extracción por tres horas, recuperar el solvente y el balón llevar a estufa de 130 C por 30 min sacar de la estufa a un desecador enfriar y pesar 18 Muestra homogeneizada pesada se somete a una extracción con éter de petróleo. Posteriormente se realiza la extracción total de la materia grasa libre por soxhlet. 7 Hidrolisis acida de la muestra, secado en estufa y extracción con hexano por 4 horas 2 Extracción consecutiva por 8 h, con 1:1 Éter etílico: bencina de petróleo 1 La grasa constituye al residuo obtenido de la extracción con éter de petróleo de una muestra seca y homogenizada 11 Determinación de materia grasa por extracción con hexano 12 Extracción por shoxlet con éter de petróleo durante 6 horas 4 Se pesan 5 g ± 0,01 g de muestra, se realiza la extracción con 25 ml de Éter de Petróleo en equipo twisselman durante 3 h, se elimina el solvente en rotavapor. Se lleva a estufa de aire forzado a 130 C + 3 C durante 2 h y se pesa. 9 El método consiste en extraer el aceite contenido en el la harina molida (malla 1 mm) con bencina de petróleo como solvente por un tiempo de 3 horas en el extractor Soxhelt. 19 a) Limpiar la muestra. b) Homogenizar y moler 100 g de muestra en el molino butt. c) Pasar la muestra molida por el tamiz Nº 20. d) Pesar 2,0 g de la muestra preparada en el filtro papel Whatman Nº2, poner en un segundo filtro papel doblado de tal manera que prevenga el escape de la harina. El segundo papel se deja abierto en la parte superior como dedal. c) El cartucho preparador colocar en el extractor SOXHLET con solvente de hexano, controlando que la velocidad del goteo del solvente no sea menor a 150 gotas por minuto. 37

38 Código Descripción del Método Utilizado-Grasa d) Mantener constante el volumen del disolvente durante la extracción por el lapso de 3 horas para la harina. e) Transcurrido el tiempo, recuperar el disolvente hexano. f) Luego lleve a la estufa por espacio de 30 min a temperatura de 130 C. g) Enfriar en desecador durante 20min hasta temperatura ambiente y pesar el balón. 16 Tarar los balones en estufa por una hora a 103 C, enfriar y pesar. Pesar en un cartucho de papel filtro previamente tarado de 4-5 gramos de muestra, agregar solvente (éter o hexano) al balón y colocar la muestra en el tubo de extracción y conectar al equipo de extracción. 5 Este método indica la extracción de grasa utilizando el método SOXHLET en la que se usa solvente orgánico (Éter de Petróleo) que extrae la grasa durante 4 horas y una posterior evaporación del solvente a una temperatura de 100 C, para culminar se realiza el pesaje de los vasos mas la grasa extraída para luego realizar los cálculos. 8 Extracción por solvente (soxhlet), residuo determinado por peso Código Descripción del Método Utilizado-Proteína 10 Digestión con ácido sulfúrico concentrado, destilado y recepcionado en ácido bórico, titulado con ácido sulfúrico 0,11 N 7 Digestión de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado, utilizando sulfato de sodio para elevar el punto de ebullición, formándose sulfato de amonio, luego destilación con arrastre de vapor y neutralización con hidróxido de sodio para liberar amoniaco que es absorbido en solución de ácido sulfúrico y finalmente titulado con hidróxido de sodio 2 Pre digestión y digestión húmeda con H 2 SO 4 y 1 g de catalizador, destilación agregando NaOH por 3 min y titulación 38

39 Código 1 Descripción del Método Utilizado-Proteína Se basa en la digestión de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado, formándose sulfato de amonio que en exceso de Hidróxido de sodio libera amoniaco el que se destila y se recibe en ácido bórico formándose borato de amonio, el que se titula con ácido clorhídrico. 11 Micro Kjeldahl usando como catalizador mezcla sulfato de potasio sulfato de cobre 12 Método Kejdahl Digestión 2 horas a 400 C, titulación con HCl 0,05 N Se pesan 0,5 g ± 0,01 g de muestra se le agregan 20 ml de H₂SO₄ y se digiere en equipo BUCHI. Se recupera el nitrógeno por destilación por arrastre con vapor y se titula con HCl 0,2 N. El método consiste en digestionar 0,5 g de muestra con ácido sulfúrico concentrado y en presencia de catalizadores (Sulfato de Cobre y potasio) a una temperatura de 420 C / 2 h, luego se procede a destilar la muestra añadiendo hidróxido de Sodio y recibiendo el destilado en Ácido Bórico. Se valora con ácido Sulfúrico 0,1 N PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 1. Triturar, homogeneizar y mezclar la muestra. 2. Pesar 0.5 gramos triturada +/ de muestra. 3. Colocar dentro del tubo macro. DIGESTIÓN Añadir 10ml de H 2 SO % al tubo macro conteniendo la muestra y más 2,8 g de catalizador mezcla 10:1 (sulfato de potasio y sulfato de cúprico). Colocar los tubos muestra en el bloque del digestor, bajo la campana de extractor de gases. Realizar la digestión en 2 pasos: 1. En función del contenido de agua de la muestra, empezar la digestión a 200 C durante 30 minutos. 2. Continuar la digestión a 400 C durante 2 horas. DILUCIÓN Sacar los tubos muestra del bloque digestor y dejar enfriar a T ambiente. Añadir unos 30 ml de agua destilada al tubo. Para evitar pérdidas de nitrógeno y reacciones violentas no introducir el tubo todavía caliente al destilador. DESTILACIÓN Situar un Erlenmeyer de 500 ml a la salida del refrigerante con 100 ml de ácido Bórico al 2% y 3 gotas de indicador mixto. 39

40 Código 16 5 Descripción del Método Utilizado-Proteína Programar la dosificación de 75 ml de NaOH al 38 BE. Introducir el tubo con la muestra en el destilador. Destilar hasta recoger 150 ml en el Erlenmeyer (100 ml Bórico ml de destilado). Pesar una cantidad de muestra mayor a 0,700 g, colocar la muestra en el tubo de digestión adicionar pastilla catalizadora y 20 ml de H 2 SO 4 concentrado, realizar la digestión elevando la temperatura del digestor inicialmente a 180 C y controlar 30 minutos, pasado ese tiempo elevar la temperatura a 400 C, una vez que llegue el equipo a esta temperatura verificar que la coloración de la muestra sea verde claro y controlar de 45 a 60 minutos, terminada la digestión agregar agua a los tubos destilar la muestra adicionando al tubo 65 ml de NaOH al 40%, recibir el destilado en un matraz con 50 ml de H 3 BO 3 destilar hasta obtener 200 ml, luego titular la muestra con HCl 0,2 N hasta un cambio de color celeste a rosa. Realizar una muestra en blanco. El método Kjeldahl consiste en convertir el nitrógeno presente en el cereal en sulfato de amonio por digestión con ácido sulfúrico concentrado en presencia de un catalizador. El sulfato de amonio formado se lleva a medio alcalino por adición de hidróxido de sodio en exceso, liberándose el amoniaco que se recibe en una solución valorada de ácido sulfúrico o clorhídrico. el contenido de nitrógeno se determina valorando el exceso de ácido con solución de hidróxido de sodio. 8 volumetría, digestión-destilación Kjeldahl Código Descripción del Método Utilizado-Fibra 10 Digestión con ácido sulfúrico 0,255 N durante 30 minutos y digestión con hidróxido de sodio 0,313 N durante 30 minutos, secado y calcinado 7 Método gravimétrico, realizando un tratamiento ácido-básico de la muestra 2 Digestión por 30 min consecutivamente con solución H 2 SO 4 y solución NaOH 1 La muestra previamente desgrasada se somete a una doble hidrólisis ácidaalcalina, filtrado se seca a 130 C y se pesa. Luego se lleva a incineración a mufla hasta la destrucción de la materia orgánica. La diferencia de pesadas da 40

41 Código Descripción del Método Utilizado-Fibra el contenido de fibra expresada en porcentaje 11 Determinación de fibra por digestión acida seguido de una digestión básica. 12 Hidrólisis acida e hidrólisis básica 9 19 El método consiste en pesar aproximadamente 2 g de muestra molida(malla 1 mm), digestionar con ácido Sulfúrico por 30 min, filtrar, lavar y digestionar con Hidróxido de Sodio por 30 min, filtrar en un papel filtro tarado, secar, pesar y llevar a la mufla a 550 C / 2 h a) Homogenizar y moler 100 g de muestra en el molino butt. b) Pesar 2,0 g de la muestra homogenizada, molida y vaciarla al vaso pp. c) Adicionar 200 ml de ácido sulfúrico al 1,25 % hirviendo. c) Colocar el vaso de precipitado de 600 ml y su contenido sobre el sistema de digestión de fibra. d) Digerir a temperatura de ebullición por el lapso de 30min, remover el vaso para evitar que la muestra se adhiera a los lados del vaso. e) Retirar el vaso de pp. y filtrar en el sistema de vacío su contenido utilizando el embudo buchner que contendrá una esfera de lana de vidrio. f) Lavar el vaso con 75 ml de agua destilada hirviendo y repetir el lavado por tres veces más con 50 ml de agua destilada. g) transferir la esfera de lana de vidrio del embudo al vaso original de digestión usando una corriente de NaOH al 1,25 %, enjuagar el embudo y adicionar álcali hasta 200ml. Volver a digerir por espacio de 30min. h) Preparar una esfera de lana de vidrio con espesor de 10 mm en el crisol gooch. i) Tomar con una pinza la lana de vidrio que esta sobrenadante en el vaso y colocarla en el crisol cuidado siempre de no perder muestra y luego vaciar el resto del líquido al crisol que se filtrara con ayuda del vacío j) Adicione 25 ml de ácido sulfúrico caliente y enjuague bien con otros lavados de agua destilada caliente y vaciarla al crisol para que se filtre con ayuda del vacío. k) Medir 25 ml de alcohol al 96 % y adicionarle al crisol, filtrar hasta que seque completamente. l) lleve el crisol a la estufa de 130 C por 1 hora, enfríe en el desecador y pese. Luego incinere en la mufla a una temperatura de 600 C ± 15 C por espacio de 30 min. m) Enfríe nuevamente en un desecador y realice el pesado en la balanza de precisión. 41

42 Código 16 5 Descripción del Método Utilizado-Fibra Pesar 2 g de muestra desengrasada, y digerir con 200 ml de H 2 SO 4 al 1,25 % durante 30 min., filtrar al vacío con lana de vidrio para retener la muestra, enjuagar con agua destilada caliente, colocar la lana con la muestra filtrada y digerir con 200 ml de NaOH al 1,25 % durante 30 min, filtrar al vacío en un crisol de gooch, enjuagar con agua caliente y alcohol. Colocar el crisol con la lana y muestra filtrada en estufa a 130ºC durante 2 horas pesar, enfriar, repetir el secado 30 min; luego colocar el crisol en la mufla a 600 C ± 15 C durante 30 min enfriar y pesar, repetir la incineración 30 min. Realizar una muestra en blanco El residuo proveniente de la extracción de grasa de la muestra según NB103 se somete una doble hidrólisis acida-alcalina, el filtrado se seca a 130 C y se pesa, luego se lleva a la ignición en mufla hasta la destrucción de la materia orgánica y se vuelve a pesar, la diferencia entre ambas pesadas da el contenido de fibra cruda que se expresa por 100 g demuestra seca. 8 digestión acida,digestión básica,secado,incinerado Código 7 Descripción del Método Utilizado-Actividad Ureasica Diferencia de ph entre la solución de la muestra y el blanco, el ensayo fue realizado sobre muestra tamizada (0,315 mm de abertura) (Método COVENIN (1980) Venezuela). 1 Consiste en determinar la actividad de la ureasa en una muestra tratada con una solución mixta de urea-fosfato de potasio 30 min a 30 C. 42

43 Código Descripción del Método Utilizado-Actividad Ureasica 11 Determinación de la actividad ureásica por efecto del incremento de ph debido a la hidrólisis resultante por la presencia de urea 12 Potenciometría El método consiste en colocar 0,2 g de muestra en cada uno de los dos tubos, al primero se le agrega 10 ml de solución de fosfato y al segundo 10 ml de solucion de úrea, se coloca a baño maría por 30 min agitando cada 5 min, leer el ph, la diferencia entre ambos es la actividad ureásica. a) Pesar 0,2 g ± 0,001 g de muestra, colocar en el tubo 1 de ensayo y adicionarle 10 ml de solución reguladora de fosfato (prueba en blanco); tapar, agitar y colocar el baño maría a 30 C b) Volver pesar 0,2 g ± 0,001 g de muestra, colocar en tubo 2 de ensayo y adicionarle 10 ml de solución reguladora de urea (prueba en problema); tapar, agitar y colocar el baño maría a 30 C c) La preparación entre ambos tubos debe ser de 5 min. d) Los tubos deberán estar en el baño maría por 30 min con agitación de cada 5 min. e) Transcurrido el tiempo se realiza la lectura del ph del tubo 1 en el equipo ph-metro, a los 5 min siguientes se leerá el ph del tubo 2. Consiste en determinar la variación del ph por la acción de la ureasa por el método potenciométrico utilizando una solución de buffer fosfato para el tubo blanco y buffer urea para el tubo problema. 8 proceso con soluciones buffer -urea, y buffer blanco, diferencia de ph Código Descripción del Método Utilizado-Solubilidad Proteica 7 Previa solubilidad dela muestra en medio básico (KOH), determinándose en el extracto soluble 1 La muestra es tratada con hidróxido de potasio para luego hacer la digestión y 43

44 destilación como para proteína 11 Solubilidad de la proteína en solución de KOH 0,2 % p/v 4 1,5 g de muestra se agitan durante 20 min a 25 C en 75 ml de KOH 0,036 M, se centrifuga una alícuota de 50 ml a 800 g. Se toman 15 ml del sobrenadante y se determina el contenido de N por Kjeldahl 9 5 El método consiste en pesar 2 g de harina molida (malla 0,45 mm), agregar 100 ml de hidróxido de potasio y agitar por 20 min a 160 rpm, centrifugar por 10 min a 2700 rpm, traspasar 20 ml a un tubo de proteína y proceder como una proteína bruta. El método consiste en realizar una extracción de la proteína soluble utilizando una solución alcalina de hidróxido de potasio 0,2 % con ph 12,5, posteriormente una digestión con ácido sulfúrico concentrado, luego una destilación y titulación. 8 preparación muestra granulometría 0,5 mm, solubilización al 0,2 % KOH, centrifugación, proceso de kjeldahl 44