Laboratorio Nº 4 Tema: INTERRELACIONES METABÓLICAS

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1 Laboratorio Nº 4 Tema: INTERRELACIONES METABÓLICAS Contenidos conceptuales: Integración del metabolismo de hidratos de carbonos, lípidos y proteínas. Interrelación de diferentes tejidos y órganos. La glucosa sanguínea. Mecanismo regulatorios. Funcionamiento en distintas condiciones fisiológicas producidas por variaciones nutricionales y hormonales. Fases: absortiva y post-absortiva. Inanición. Ejercicio. Contenidos procedimentales: Toma de muestras de sangre por venipuntura. Determinación enzimática de glucosa, triglicéridos y colesterol en suero por métodos colorimétricos. Contenidos actitudinales: Integración en trabajo grupal. Predisposición para la resolución de problemas con espíritu crítico y rigor científico. Bioseguridad en el laboratorio. Autoconfianza. Precisión, sistematización y coherencia en los planteamientos. Responsabilidad para con las tareas encomendadas. Objetivos: Verificar el papel de diversas hormonas (insulina, glucagón) en la regulación de la glucemia. Comparar los perfiles metabólicos inmediatos en los metabolismos lipídico y glucídico. Adquirir destreza en venipunturas.

2 Fundamentos teóricos: Las acciones de la insulina abarcan diversas áreas del metabolismo y ponen en juego variados mecanismos fisiológicos: modificación de la actividad de sistemas de transporte de membrana, regulación de la síntesis de ARN y proteínas, y modulación de la actividad de enzimas. Los principales efectores de la acción de insulina son los tejidos muscular, adiposo y hepático. Efecto sobre el metabolismo de carbohidratos: la insulina es la principal hormona hipoglucemiante. Esta acción se debe a su capacidad de estimular el ingreso de glucosa en los tejidos con transportadores sensibles, y de activar la utilización de glucosa en los mismos. Se estimula la glucogenogénesis, la glucólisis, la oxidación total de la glucosa, la vía del fosfogluconato y la conversión de glucosa en lípidos. Estos efectos se deben no sólo a la modulación directa de la actividad de las enzimas, sino también a la inducción de la síntesis de enzimas de las vías citadas. En cuanto al metabolismo lipídico es típicamente lipogénica, aumenta la síntesis de ácidos grasos y de triacilglicéridos. Activa la lipoproteín-lipasa endotelial para facilitar la síntesis de triglicéridos en tejido adiposo, e inhibe a la lipasa hormonosensible de los adipocitos para prevenir la lipólisis. Cuando hay exceso de alimentos, la insulina dirige la acetil-coa preferentemente hacia la síntesis de ácidos grasos. El glucagón, por su parte, contrarresta los efectos de la insulina, promueve en los hepatocitos la glucogenólisis, no afecta el tejido muscular. Sin embargo promueve la lipólisis en tejido adiposo aumentando los ácidos grasos libres del plasma, que a su vez deprimen la captación de glucosa por el músculo. El efecto hiperglucemiante del glucagón es reforzado por su capacidad para incrementar la gluconeogénesis. Materiales y métodos: Guantes descartables Jeringas de 5 ml y agujas para venipuntura de 23/8 (estériles, descartables) Lazos de goma Alcohol y algodón Descartador de agujas Tubos de ensayo Gradilla Marcadores Centrífuga Baño a 37 C Micropipetas de 10 microlitros Pipetas de vidrio de 1 ml Propipetas Kits de reactivos para Glucosa, Triglicéridos y Colesterol (Total, HDL y LDL) (ver técnicas adjuntas) Agua destilada Espectrofotómetro Los alumnos deberán traer por grupo para este trabajo práctico: 75 gramos de D-glucosa (Dextrosa), para preparar la solución glucosada. 2

3 Los alumnos deberán traer por comisión para este trabajo práctico: Guantes descartables. Jeringas de 5 ml y agujas para venipuntura de 23/8 (estériles, descartables). Lazo de goma. Distribución de tareas: En cada grupo de laboratorio se realizarán extracciones de sangre a: A. Un alumno que haya almorzado normalmente una dieta mixta al mediodía (situación post-absortiva en reposo). Alumno: B. Un alumno que haya tenido una ingesta rica en lípidos inmediatamente antes del horario de inicio del práctico: 14:30 hs (situación absortiva inmediata en reposo). Alumno:.. C. Un alumno con ayuno de 8 horas (primera extracción). Luego, ingerirá una solución glucosada al 20% en no más de 10 minutos, permaneciendo en reposo para extracciones posteriores (segunda a los 60 minutos, y tercera a los 120 minutos de la ingesta). Alumno: Precauciones Las muestras se tomarán siguiendo las normas de bioseguridad con guantes, jeringas y agujas descartables bajo la supervisión de los docentes. Las muestras de sangre se recogerán sin anticoagulante en tubos rotulados que se colocarán en baño maría a 37 C hasta retracción del coágulo. Centrifugar 5 min a 1000 rpm, separando luego los sueros en otros tubos rotulados. Reservarlos para análisis y observación de su aspecto. Las determinaciones se realizarán siguiendo las indicaciones de los instructivos de los kits comerciales. 3

4 Determinación cuantitativa de Glucosa 4

5 Determinación cuantitativa de Glucosa (cont.) 5

6 Determinación cuantitativa de Triglicéridos 6

7 Determinación cuantitativa de Triglicéridos (cont.) 7

8 Determinación cuantitativa de Colesterol 8

9 Determinación Cuantitativa de Colesterol (cont.) 9

10 Determinación cuantitativa de HDL Colesterol 10

11 Determinación Cuantitativa de HDL Colesterol (cont.) 11

12 Determinación Cuantitativa de LDL Colesterol 12

13 Determinación Cuantitativa de LDL Colesterol (cont.) 13

14 Informe: Alumno:... Comisión Nº:... Grupo:... Fecha:.../.../... PRUEBAS A B C TIEMPOS: Basal Basal Basal 60 min 120 min Aspecto del suero Glucosa Triglicéridos Colesterol Total HDL Colesterol LDL Colesterol Cuestionario: 1. Cuáles serían los resultados esperados? PRUEBAS A B C TIEMPOS: Basal Basal Basal 60 min 120 min Aspecto del suero Glucosa Triglicéridos Colesterol Total HDL Colesterol LDL Colesterol Concuerdan los resultados obtenidos con los esperados? Justifique las posibles diferencias. PRUEBAS A B C TIEMPOS: Basal Basal Basal 60 min 120 min Aspecto del suero Glucosa Triglicéridos Colesterol Total HDL Colesterol LDL Colesterol 14

15 3. Compare y justifique las variaciones temporales de los dosajes de Glucosa correspondientes a la Prueba C. Bibliografía: - Bioquímica Humana. Orten J. M., Nehaus O. W. 10ma ed. Ed. Médica Panamericana Química Biológica. Blanco A. 9na edición. Editorial El Ateneo Todd-Sanford-Davidsohn. Diagnóstico y tratamiento clínicos por el laboratorio. Henry J.B. 8va ed. Salvat Vademécum. Wiener Laboratorios Alumno:... Comisión Nº:... Grupo:... Fecha:.../.../... 15

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