UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

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1 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA EVALUACIÓN DE TRES PROTOCOLOS DE SINCRONIZACIÓN A TIEMPO FIJO EN VACONAS MESTIZAS EN LA AMAZONÍA ECUATORIANA Trabajo de Grado presentado como requisito parcial para obtener el Título de Médico Veterinario y Zootecnista. AUTOR: Rolando Querubín Lara Izurieta TUTOR Dr. Juan Alberto Vargas Tipan. METODÓLOGA: Dra. Margarita Medina Quito, Diciembre, 2013

2 DEDICATORIA A Dios quien me supo guiarme por los senderos del bien, respeto, honestidad y sobre todo por las bendiciones recibidas dia a dia para mi formación como persona y profesional. A mi esposa Erika Dalgo, por ser pilar fundamental de mi vida y fuente de inspiración que con su amor, apoyo, paciencia, entrega fue parte fundamental para la culminación de esta etapa de mi vida. A mi hijo Juan Daniel por ser uno de mis motivos de superación. A mis padres, quienes con su esfuerzo y dedicación inculcaron valores, enseñándome a luchar y conseguir lo que me proponga sin importar cuán difícil sea el camino por recorrer, día a día me brindan su apoyo incondicional y sus sabios consejos para la formación y superación como persona. A todos ellos gracias de todo corazón. Rolando Querubín Lara Izurieta ii

3 AGRADECIMIENTO Mi infinito agradecimiento a Dios por bendecirme y otorgarme salud y fortaleza en todo momento de mi vida. Un sincero agradecimiento a mis padres Querubín y Victoria por apoyarme siempre en todas las etapas de mi vida y hacer de este sueño realidad. A mi hermana Ana María por su apoyo y consejos recibidos. A mis suegros Marco y Leonor por la paciencia y apoyo recibido siempre, un sincero Dios le pague. A mi Tutor de tesis el Dr Juan Vargas por su guía, consejos brindados para llegar a la culminación de este trabajo y sobre todo por brindarme su amistad incondicional. Al tribunal de mi tesis: a los Doctores Miguel Jumbo, Richard Salazar, Dario Pérez y Francisco de la Cueva, quienes han apoyado y aportado con valiosas opiniones para la culminación de esta investigación. A la Universidad Central del Ecuador, en especial a la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia a toda su planta administrativa y maestros por la formación académica recibida. Finalmente y sin intención de omitir nombres, infinitas gracias a todos quienes participaron en la realización de esta investigación. Dios les pague de todo corazón. Rolando Querubín Lara Izurieta. iii

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6 HOJA DE APROBACIÓN DEL TRIBUNAL EVALUACIÓN DE TRES PROTOCOLOS DE SINCRONIZACIÓN A TIEMPO FIJO EN VACONAS MESTIZAS EN LA AMAZONÍA ECUATORIANA. El tribunal constituido por: PRESIDENTE: Dr. Miguel Jumbo. VOCAL PRINCIPAL: Dr. Darío Pérez.. VOCAL PRINCIPAL: Dr. Richard Salazar TUTOR: Dr Juan Vargas Luego de receptar la presentación del trabajo de grado previo a la obtención del título de Médico Veterinario Zootecnista presentado por el señor Rolando Querubín Lara Izurieta. Con el título: EVALUACIÓN DE TRES PROTOCOLOS DE SINCRONIZACIÓN A TIEMPO FIJO EN VACONAS MESTIZAS EN LA AMAZONÍA ECUATORIANA. Ha emitido el siguiente veredicto: APROBADO Quito DM, 11 de Diciembre del 2013 vi

7 ÍNDICE DE CONTENIDO RESUMEN... XV ABSTRACT... XVI INTRODUCCIÓN... 1 CAPITULO I... 2 EL PROBLEMA... 2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA FORMULACIÓN DEL PROBLEMA... 4 OBJETIVOS GENERAL ESPECÍFICOS JUSTIFICACIÓN CAPITULO II... 8 MARCO TEÓRICO... 8 ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN Inseminación Artificial a Tiempo Fijo en ganado Bos indicus USO DE DISPOSITIVOS CON DIFERENTES CANTIDADES DE PROGESTERONA Y ECG EN VACAS CON CRÍA EN BUENA CONDICIÓN CORPORAL FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA EL CICLO ESTRAL PROESTRO ESTRO METAESTRO DIESTRO DINÁMICA FOLICULAR BOVINA SINCRONIZACIÓN DE CELOS IMPORTANCIA DE LOS PROGRAMAS DE SINCRONIZACIÓN PUNTOS IMPORTANTES AL ESTABLECER UN PROGRAMA DE SINCRONIZACIÓN CONFIRMAR LA ACTIVIDAD CÍCLICA POR PALPACIÓN RECTAL ESTADO FUNCIONAL DE LOS ANIMALES CONDICIÓN CORPORAL Y ALIMENTACIÓN vii

8 RESULTADOS ESPERADOS DE LA SINCRONIZACIÓN DEL CELO HORMONAS UTILIZADOS EN EL MANEJO DEL CICLO ESTRAL DE LA VACA PROSTAGLANDINAS (PGF2) PROGESTÁGENOS FACTOR LIBERADOR DE GONADOTROPINAS (GNRH) GONADOTROPINA SÉRICA DE YEGUA PREÑADA (ECG) BENZOATO DE ESTRADIOL PROGRAMA DE SINCRONIZACIÓN DE CELOS Y OVULACIONES PROGESTÁGENOS Y ESTRÓGENOS PROGESTÁGENOS COMBINADOS CON GONADOTROPINA SÉRICA DE YEGUA PREÑADA (ECG) PROGESTÁGENOS SINTÉTICOS ASOCIADOS CON BENZOATO DE ESTRADIOL Y ECG EFECTO DE LA CONDICIÓN CORPORAL EN PROGRAMAS IATF HIPÓTESIS HIPÓTESIS DE INVESTIGACIÓN H H CARACTERIZACIÓN DE LAS VARIABLES VARIABLE INDEPENDIENTE VARIABLES DEPENDIENTES DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BÁSICOS FUNDAMENTACIÓN LEGAL CAPITULO III METODOLOGÍA DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN TIPO DE INVESTIGACIÓN Según la tendencia Según la orientación COMPARACIÓN DE POBLACIONES MUESTREADAS CARACTERÍSTICAS DEL ÁREA DE EXPERIMENTO POBLACIÓN Y MUESTRA PRUEBA DE HIPÓTESIS MEDIDAS DE TENDENCIA CENTRAL viii

9 INFERENCIA ESTADÍSTICA OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACIÓN VALIDEZ Y CONFIABILIDAD DE LOS INSTRUMENTOS TÉCNICAS DE PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE DATOS CAPITULO IV RESULTADOS Y DISCUSIÓN CAPITULO V CONCLUSIONES Y RESULTADOS RECOMENDACIONES CAPITULO VII BIBLIOGRAFÍA ANEXOS ix

10 ÍNDICE DE GRÁFICOS Figura 1. Interrelaciones hormonales del eje Hipotálamo-Hipófisis-Ovarios- Utero. (Carmel y col. 1976) Figura 2. Transporte de la PGF2 de la vena uterina a la arteria ovárica por mecanismo de contracorriente Figura 3. Pesos de los 30 experimentales del tratamiento uno Figura 4. Pesos de los 30 experimentales del tratamiento dos Figura 5. Pesos de los 30 experimentales del tratamiento tres Figura 6. Porcentaje de fertilidad alcanzado en el Tratamiento Figura 7. Porcentaje de fertilidad alcanzado en el Tratamiento Figura 8. Porcentaje de fertilidad alcanzado en el Tratamiento Figura 9. Correlación condición corporal vs preñez x

11 ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1. Tasa de Preñez a la IATF en 523 animales Bos indicus Cruza... 9 Tabla 2. Tasa de Preñez en hembras sincronizadas con norgestomet y valerato de estradiol e Inseminadas a Tiempo Fijo luego de la remoción del implante Tabla 3. Porcentaje de preñez en vacas q recibieron dispositivos con diferentes cantidades de progesterona e inseminación a tiempo según recibieron o no ecg Tabla 4. Variable independiente: protocolo de sincronización Tabla 5. Variable dependiente: fertilidad Tabla 6. Costo de los tratamientos Tabla 7. Costo Tratamiento uno Tabla 8. Costo Tratamiento dos Tabla 9. Costo Tratamiento tres Tabla 10. Costos materiales de IA Tabla 11. Costos generales Tabla 12. Costo Total Tesis xi

12 ÍNDICE DE CUADROS Cuadro 1. Fases del ciclo estral bovino Cuadro 2. Características internas y externas del ciclo estral bovino Cuadro 3. Peso de los 30 experimentales del Tratamiento Cuadro 4. Peso de los 30 experimentales del Tratamiento Cuadro 5. Peso de los 30 experimentales del Tratamiento Cuadro 6. Porcentaje de gestación alcanzado por tratamiento Cuadro 7. Promedio pesos de los tratamientos Cuadro 8. Resultados ANADEVA Cuadro 9. JI CUADRADO - t STUDENT COMBINADOS Cuadro 10. Condición corporal (CC) vs % de Preñez xii

13 ÍNDICE DE ANEXOS ANEXO A. Matriz para selección vaconas ANEXO B. Matriz de la colocación de Implante en vaconas ANEXO C. Matriz de retiro de implantes en vaconas ANEXO D. Matriz de inseminación artificial ANEXO E. Tratamiento uno, datos de selección de vaconas en la Parroquia Madre Tierra ANEXO F. Tratamiento uno, datos de colocación de implante en vaconas en la Parroquia Madre Tierra ANEXO G. Tratamiento uno, datos de retiro de implante en vaconas en la Parroquia Madre Tierra ANEXO H. Tratamiento uno, datos de IA en vaconas en la Parroquia Madre Tierra ANEXO I. Tratamiento uno, datos de diagnostico de gestación en vaconas en la Parroquia Madre Tierra ANEXO J. Tratamiento dos, datos de selección de vaconas en la Parroquia Simón Bolívar ANEXO K. Tratamiento dos, datos de IA en vaconas en la Parroquia Simón Bolívar ANEXO L. Tratamiento dos datos de diagnostico de gestación en vaconas en la Parroquia Simón Bolívar ANEXO M. Tratamiento tres, datos de selección de vaconas en la Parroquia Fátima ANEXO N. Tratamiento tres, datos de IA en vaconas en la Parroquia Fátima ANEXO O. Tratamiento tres, datos de diagnostico de gestación en vaconas en la Parroquia Fátima Anexo. 1. Capacitación a ganaderos de las zonas a realizar la investigación xiii

14 Anexo. 2. Chequeo ginecológico a vaconas que ingresan al programa IATF Anexo. 3. Identificación de los animales q ingresan al programa IATF Anexo. 4. Desinfección del implantador intravaginal e implante Anexo. 5. Lubricación del implante intravaginal Anexo. 6. Colocación del dispositivo intravaginal Anexo. 7. Aplicación de hormonas Anexo. 8. Retiro de implantes Anexo. 9. Materiales de inseminación artificial Anexo. 10. Inseminación artificial Anexo. 11. Diagnóstico de gestación xiv

15 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA Carrera de MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA EVALUACIÓN DE TRES PROTOCOLOS DE SINCRONIZACIÓN A TIEMPO FIJO EN VACONAS MESTIZAS EN LA AMAZONÍA RESUMEN ECUATORIANA Autor: Rolando Querubín Lara Izurieta Tutor: Dr Juan Vargas Fecha: Quito, Diciembre, 2013 Existen técnicas que mejoran los parámetros reproductivos como son los métodos de sincronización a tiempo fijo, es así que los dispositivos intravaginales que liberan Progesterona y que son mantenidos en la vagina por un período de 7 a 8 días. El tratamiento consiste en administrar benzoato de estradiol (EB) por vía intramuscular (im) junto con la inserción del dispositivo en lo que se denomina el Día 0 del tratamiento; en el Día 7 a 8, se extrae el implante se aplica PGF im acompañado de ecg y 24 h después se administra EB im. Se realiza IATF entre las 52 y 56 h de la remoción del dispositivo. La función fundamental de la aplicación de estrógenos en el inicio del tratamiento es provocar la atresia de los folículos existentes e impedir de esta manera la formación de folículos persistentes que interfieren negativamente en la fertilidad. Como la atresia es seguida por el comienzo de una nueva onda folicular a los 4 días se asegura de esta manera la presencia de un folículo nuevo y un ovocito viable en el momento de retirar el dispositivo. Palabras Claves: DISPOSITIVO INTRAVAGINAL, INSEMINACIÓN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO, ATRESIA FOLÍCULOS, FERTILIDAD, OVOCITO. xv

16 EVALUATION OF THREE PROTOCOLS OF SYNC IN FIXED TIME IN CROSSBRED COWS IN THE ECUADORIAN AMAZON ABSTRACT Author: Rolando Querubín Lara Izurieta Tutor: Dr. Juan Vargas Date: Quito, December 2013 There are techniques that improve reproductive parameters, such as the synchronization methods at a fixed time; so that intra-vaginal Progesterone-releasing devices and that are kept in the vagina for a period of 7-8 days. The treatment involves administering estradiol benzoate (EB) intramuscularly (im) with the insertion of the device in what is called the Day 0 of the treatment; on Day 7-8 days, the implant is removed, PGF im is applied accompanied with ecg and 24 h later, EB is administered im. IATF is done between 52 and 56 h after the device removal.the primary function of the application of estrogen in the initiation of treatment is to cause atresia of the existing follicles and thus prevent the formation of persistent follicles that negatively interfere with fertility. As atresia is followed by the beginning of a new follicular wave at 4 days, thus ensuring the presence of a new follicle and a viable ovocyte at the time of the device removal. KEYWORDS: INTRA-VAGINAL DEVICE, FIXED TIME ARTIFICIAL INSEMINATION, ATRESIA FOLLICLES, FERTILITY, OVOCITY. xvi

17 INTRODUCCIÓN Las principales limitaciones para el empleo de la inseminación artificial en el ganado manejado en condiciones pastoriles son fallas en la detección de celos y anestro posparto. Para evitar los problemas de la detección de celos en rodeos de cría se han desarrollado protocolos de sincronización de la ovulación que permiten además inseminar un gran número de animales en un período de tiempo establecido. Estos tratamientos se conocen con el nombre de protocolos de Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF) Desde que se conocen las hormonas de la reproducción, se ha pretendido controlar la actividad reproductiva. La modificación de los ciclos estrales para que todas las hembras presenten celo en un período breve de tiempo es el objetivo que ha estimulado el desarrollo de numerosas líneas de trabajo de investigación por muchos años. Estas investigaciones, llevaron al diseño de protocolos que permiten realizar la inseminación artificial sin detección de celos, con lo cual se elimina uno de los factores que afectan significativamente los resultados logrados en programas de inseminación artificial. La utilización de dispositivos intravaginales con progesterona en combinación con estrógenos, prostaglandinas, GnRH, ecg ó hcg ha demostrado ser una herramienta eficiente para el control del desarrollo folicular y la ovulación y permite la implementación de programas de inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) es decir sin la necesidad de detectar celo. El objetivo es lograr por medio de estos tratamientos incrementar el número de vientres preñadas en forma anticipada y en un periodo corto de tiempo. Lograr un ternero por vaca por año es uno de los objetivos principales en un planteo de cría. 1

18 CAPITULO I EL PROBLEMA Planteamiento del Problema. La Inseminación Artificial es una de las biotecnologías reproductivas más antiguas e importantes para el mejoramiento genético de los hatos bovinos, a pesar de que su implementación en la Sierra Ecuatoriana está muy difundida, ha existido escasa aplicación de la I.A. en el Trópico y Subtropico. (R. Matute, 2003) Los protocolos de IATF constituyen una valiosa herramienta en programas de mejoramiento genético en países como el nuestro, donde posiblemente menos del 4% del total de hembras en fase reproductiva son inseminadas (Caiza, F comunicación personal). La pobre y variable fertilidad bajo condiciones de manejo extensivo contribuyen a la dificultad para implementar programas convencionales de I.A. con ganado Bos taurus e indicus (Cavalieri y Fitzpatrick, 1995). El éxito de los programas de I.A. en los trópicos ha sido impedido por la baja eficiencia en la tasa de detección de celos, ya que; este tipo de ganado no demuestra o enmascara la expresión de estro natural. (Galina et al., 1996). Esta baja eficiencia también ha sido documentada bajo sistemas tradicionales de detección de celos como la utilización de toros con bozal marcador y observación visual con resultados no superiores al 60% en detección de celos, lo que compromete significativamente la eficiencia de un programa de I.A. (Cavalieri y Fitzpatrick, 1995). Las hormonas utilizadas para controlar el ciclo estral, imitan las hormonas reproductivas que se encuentran en la vaca normal. La mayoría de los sistemas de sincronización de celo emplea un método para controlar el 2

19 desarrollo de la onda folicular, promoviendo la ovulación en vaquillas en anestro, haciendo que regrese el cuerpo lúteo en vacas cíclicas y sincronizando el celo y la ovulación al final del tratamiento. Los beneficios de un sistema de inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) aumentan en condiciones de bajas tasas de detección de celo y de concepción.. (Cavalieri y Fitzpatrick, 1995). Por eso la aceptación de estos programas en USA y México, por ejemplo, es bastante alta y está creciendo significativamente en los países Sudamérica. La menor aceptación inicial los programas de IATF en sistemas pastoriles de Australia y Nueva Zelandia está cambiando gradualmente, debido a que la aparente alta tasa de detección de celos que tenían estos sistemas está en franca caída debido al incremento del número de vaquillas que están sufriendo los tambos y la imposibilidad de utilizar benzoato de estradiol para estimular la expresión de celos y la ovulación en las vacas en anestro tratadas con dispositivos con progesterona como el CIDR. Sin importar el sistema de producción, muchas vacas deben ser re-inseminadas por no resultar preñadas a la primera inseminación. La presencia de vacas que no están preñadas y que no vuelven a entrar en celo presenta un serio desafío para los productores, tanto con sistemas pastoriles como intensivos. El diagnóstico temprano de preñez mediante ultrasonografía y una segunda IATF son cruciales reducir los efectos de negativos de la no observación de celos en las vacas vacías después del primer servicio.( Bó, G.A.,2007) La actual situación de la ganadería exige a los productores máxima eficiencia para garantizar el retorno económico. En este contexto, la optimización de la eficiencia reproductiva es uno de los principales factores que contribuyen para mejorar las ganancias. (Miller, J.M. 1991). La incorporación de técnicas diseñadas para controlar la dinámica folicular y la ovulación en los últimos años ha reducido los problemas 3

20 asociados con la detección de celos y permitido sistematizar en gran medida los trabajos reproductivos en los tambos. Es posible optar por distintos tratamientos de sincronización de celos que van desde los más simples, que utilizan inyecciones periódicas de prostaglandina F2α, a los más complejos, que utilizan además GnRH o dispositivos con progesterona. La adición de gonadotrofina coriónica equina (ecg) a los tratamientos con dispositivos con progesterona y estradiol ha brindado la posibilidad de aplicar la IATF con altas tasas de pre-ñez en vacas para leche cíclicas y no cíclicas. (Bó, G.A., 2002). Instituto de Reproducción animal de Córdova-Argentina. Una de las alternativas más útiles para incrementar la cantidad de vacas inseminadas en un período corto es la utilización de protocolos que sincronizan la ovulación y permiten la inseminación sistemática sin la necesidad de detectar celo, generalmente denominados protocolos de inseminación artificial a tiempo fijo (IATF). Además, el desarrollo de protocolos para las vacas en anestro posparto permitirá la inseminación de una población de animales significativamente mayor. (Cutaia L,2004). A nivel local no existe información de trabajos realizados en IATF que se pueda utilizar en vaconas y adaptados a las condiciones de manejo que se practica en la Amazonía ecuatoriana, particularmente en la provincia de Pastaza. Formulación del Problema Cuál es el mejor protocolo de sincronización de celo e inseminación artificial a tiempo fijo en vaconas mestizas para alcanzar porcentajes altos de concepción y adaptación a las condiciones de manejo en la Amazonía ecuatoriana; particularmente de la Provincia de Pastaza, en un período de seis meses. 4

21 Objetivos. General. Evaluar el uso de tres protocolos de sincronización de celo e inseminación artificial a tiempo fijo en la fertilidad de vaconas mestizas. Específicos. Valorar la influencia de los sistemas de tratamiento hormonal en el porcentaje de preñez de vaconas en la Amazonía. Investigar un método IATF que funcione en las condiciones del área en estudio. Determinar la tasa de preñez a los 35 días mediante ecografía transrectal. 5

22 Justificación. La sincronización de celos ofrece las siguientes ventajas: 1. El tiempo requerido para la detección de estros se reduce disminuyendo los costos asociados a ellos. 2. Los animales presentan celo dentro de un tiempo predecible, lo que facilita la inseminación artificial. 3. Se puede agrupar los nacimientos de las crías que nazcan en una época de mayor abundancia de alimento. (Valencia G. 2008). En esta investigación participarón 21 ganaderos de la provincia de Pastaza de las parroquias Simón Bolívar, Fátima y Madre Tierra, trabajando con un total de 90 vaconas mestizas con un peso igual o superior a los 300 kg, distribuidas en tres experimentales en las parroquias mencionadas. La aplicación de implantes intravaginales con Progesterona (CIDR, DIB ) y de productos parenterales como Benzoato de Estradiol, Prostaglandina F2 alfa, EcG; son técnicas usadas en la IATF, probando diferentes protocolos de acuerdo a las zonas donde se va a realizar la investigación. Con ello se pretende demostrar que el uso oportuno y adecuado de uno de estos protocolos incrementando el porcentaje de preñez que es lo que interesa conseguir para asi obtener más crías por año y beneficiar la productividad del ganadero. El método más difundido y adaptado en la zona para el mejoramiento genético es la monta natural con reproductores del sector, permaneciendo éstos en forma libre dentro de la finca cubriendo a toda hembra bovina que entre en celo, principalmente a vaconas en etapas muy tempranas y con un peso inadecuado (primer celo), dificultando el desarrollo corporal adecuado, es decir disminuyendo su potencial genético para la 6

23 producción de leche y carne; incluso desconociendo el día que fueron cubiertas, dificultando un manejo adecuado en el preparto y parto. Por las condiciones en que se desenvuelve la ganadería en la Amazonia y al uso inadecuado de toros dentro del hato se pretende disminuir la incidencia de enfermedades reproductivas en vaconas que están iniciando su ciclo sexual. A pesar que los costos de esta técnica de sincronización con inseminación a tiempo fijo son un poco altos es justificable ya que se obtendrán más crías al año que cuando se realiza de la forma convencional ya sea con monta natural e inseminación con celo natural. Las técnicas de sincronización hormonal de celo mejoran la productividad del ganado bovino. De esta forma es posible planificar el celo y las condiciones óptimas de cada hembra bovina para la inseminación y concepción. Se han desarrollado una serie de protocolos hormonales destinados a inducir o sincronizar el celo y la ovulación, favoreciendo la inseminación artificial (IA) sistemática a tiempo fijo, sin necesidad de detectar los celos (Bo y Barucelli, 2002). 7

24 CAPITULO II MARCO TEÓRICO Antecedentes de la Investigación. 1. Inseminación Artificial a Tiempo Fijo en ganado Bos indicus Fabián Pita., Rafael Matute., Iván Intriago/ INTERVET ECUADOR 2. SINCROBO IATF en el Ecuador Resultados a campo Nuestro grupo de trabajo utiliza el Programa Crestar (Intervet) para implementar protocolos de IATF en ganado Bos indicus sin la necesidad de detección de celos, este programa incluye un implante subcutáneo que contiene 3 mg de norgestomet y se administra junto a una solución inyectable que contiene 5 mg de valerato de estradiol y 3 mg de norgestomet. Se mantienen los implantes durante 9 a 10 días y se realiza la IATF entre 48 h a 56 h de la remoción del implante. También se puede incluir 300 UI 500 UI de ecg (Folligón, Intervet) al momento del retiro del implante para estimular el desarrollo folicular en animales con anestro o en vacas con post- parto temprano y condición corporal comprometida. Este es un protocolo ampliamente utilizado en el mundo tanto por productores de leche y care con resultados aceptables, no obstante los resultados de fertilidad han sido variables con porcentajes de preñez del 33% al 68% (Odde, K., 1990) Las diferencias en las tasas de preñez puede deberse en parte, al nivel de ciclicidad y a la condición corporal (Humbolt et al., 1996) por tal motivo son factores que deben ser tomados en cuenta a la hora de decidir implementar un programa de IATF. 8

25 En el año 2003 nuestro grupo realizó IATF en el trópico seco de la provincia de Manabí sobre un total de 523 animales Bos indicus cruza con resultados comparables a los obtenidos por otros grupos técnicos de diferentes países que han incorporado a la IATF en programas de mejoramiento genético. (Tabla 1) y (Tabla 2). Tabla 1. Tasa de Preñez a la IATF en 523 animales Bos indicus Cruza HATO # VACAS PREÑADAS % , , , , , , , , ,31 Tasa de Preñez ,03 Pita, F., Matute, R., Intriago, I

26 Tabla 2. Tasa de Preñez en hembras sincronizadas con norgestomet y valerato de estradiol e Inseminadas a Tiempo Fijo luego de la remoción del implante. Referencia Año Número de animales Tasa de Preñez Brink y Kiracofe % Brown y col % Favero y col % Baruselli y col % Bo y col % Baruselli y col % Moura y col % Silva y col % ACUMULADO % Uno de los puntos críticos para alcanzar altas tasa de preñez a la IATF es la sincronización del momento de la ovulación, sin embargo ha habido varios informes de disminución de la fertilidad debido al aumento de circulación de niveles de cortisol asociado con el temperamento y el manejo intensivo de ganado no acostumbrado inmediatamente antes del pico de LH (Hormona Luteinizante) con la subsecuente disminución de la expresión de celo e incidencia en la ovulación normal. (Dobson&Smith, 1995) esto es una condición común en ganado Bos indicus bajo condiciones extensivas e incluidos en programas de sincronización de celos. Con el objetivo de sortear este inconveniente varios investigadores 10

27 han incorporado la utilización de un análogo de Hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH) tanto al momento de la IATF o 30 horas postretiro del implante con mejorías en la tasa de preñez (Valle et al., 1986) o la utilización de ecg al momento del retiro del implante con la finalidad de incrementar los niveles de estrógenos circulantes y fijar mejor el momento de la ovulación. Sin embargo otros investigadores no han encontrado diferencia cuando incorporan la GnRH al final del protocolo. (Baruselli et al., 2003). Realizamos una investigación donde se incluyeron 300 vaconas Bos indicus cruza con el objetivo de mejorar la sincronía de la ovulación administrando 10 mcg de Buserelina (Conceptal, Intervet), Grupo 1 n 100: 10 mcg de Buserelina al momento de la IATF, Grupo 2 n 100: 10 mcg de Buserelina 30 horas post retiro del implante, el Grupo 3 n 100: fue sometido al protocolo tradicional que recomienda la casa comercial. No existió diferencia significativa entre los grupos, como conclusión podríamos afirmar que la aplicación de GnRH no constituye ningún aporte en la mejoría de las tasas de preñez a la IATF, siendo la ecg (Folligón, Intervet) eficiente en la sincronización de la ovulación. 1. Uso de dispositivos con diferentes cantidades de progesterona y ecg en vacas con cría en buena condición corporal Beriso, R.; Oca, C.; Teruel, M. y Callejas, S. Actividad privada. Tandil. Prov. Buenos Aires. Alumna FCV. UNCPBA. Área de Reproducción. FCV. UNCPBA. Tandil. Buenos Aires./2009. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de administrar ecg en vacas con cría con una CC 3 (escala 1 a 5) tratadas con dispositivos intravaginales con diferentes cantidades de progesterona sobre su eficiencia reproductiva. Se utilizaron 136 vacas Angus (post parto: 25 a 40 días), distribuidas aleatoriamente a 3 grupos: 1) Grupo DISP1, el d0 se 11

28 colocó un dispositivo intravaginal con progesterona (DIB, 1g, Syntex S.A.) más una inyección de 2 mg de benzoato de estradiol (BE, Benzoato de Estradiol, Syntex S.A.). El d8, se retiró el dispositivo y se inyectó 150 μg de D (+) Cloprostenol (Cyclase, Syntex S.A.). En este momento las vacas fueron distribuidas aleatoriamente a recibir o no 400 UI de Ecg (Novormon, Syntex S.A.). El día 9 se administró 1 mg de BE. El día 10 se realizó IATF; 2) Grupo DISP2: Idem tratamiento anterior utilizando un dispositivo DIB de segundo uso y 3) Grupo DISP05: Idem al Grupo DISP1, utilizando un dispositivo con 0,5 g de progesterona (DIB 0,5 Syntex S.A.). Se realizó IATF utilizando semen congelado/descongelado en pajuelas de 0,5 ml, provenientes de dos toros de probada fertilidad. En el día 20 comenzó el servicio natural, utilizando un 2% de toros, durante 40 días. El diagnóstico de gestación se realizó mediante ultrasonografía (Transductor transrectal de 5 MHz, SIUI CTS-200) en el día 40 para diagnosticar las vacas preñadas por IATF; y por palpación transrectal, dos meses después, para diagnosticar preñez por servicio natural. Se evaluó el efecto dispositivo, uso de la ecg y su interacción sobre los porcentajes de preñez a la IATF, retorno y final (IATF + retorno). Para analizar la preñez de IATF se incluyó el efecto toro. Para el análisis estadístico se utilizó el Proc CATMOD y la Prueba Exacta de Fisher (SAS, 1989). No se observó efecto del toro, por lo que los datos se agruparon. Se observó una tendencia de interacción del dispositivo utilizado con la administración de ecg (P=0,059) sobre el porcentaje de preñez a la IATF. Dentro de las vacas que no recibieron ecg, el porcentaje de preñez fue significativamente inferior en las vacas del Grupo DISP05 (P<0,05; Tabla 1). Este efecto no se observó en las vacas que fueron inyectadas con ecg. Por otro lado, la administración de ecg en las vacas del grupo DISP1 tendió a perjudicar el porcentaje de preñez (P=0,059; Tabla 1). 12

29 Tabla 3. Porcentaje de preñez en vacas q recibieron dispositivos con diferentes cantidades de progesterona e inseminación a tiempo según recibieron o no ecg. Los porcentajes de preñez del retorno (DISP1: 100%; DISP2: 75,9%; DISP05: 93,3%) y final (DISP1: 100%; DISP2: 89,6%; DISP05: 95,8%) no difirieron entre grupos (P>0,05). En conclusión, el uso de ecg en animales con buena CC ( 3) no mejora la eficiencia reproductiva; por otro lado, el uso de dispositivos con 0,5 g de progesterona en vacas que no recibieron ecg afectó negativamente el porcentaje de preñez a la IATF. 13

30 FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA El ciclo estral El ciclo estral se define como el tiempo que hay entre dos periodos de estro, el tiempo promedio del ciclo estral de la vaca es de 21 días (rango 17-25) y se produce en forma continua a lo largo del año, por lo que se clasifica a las hembras bovinas como poliéstricas continuas (Hurnik 1987, Hafez, 1996). Durante su vida reproductiva, las hembras de las especies domésticas presentan ciclos estrales. Éstos comprenden unas series de eventos ováricos, endocrinos y conductuales recurrentes que tienen la finalidad que ocurra la ovulación, el apareamiento y la gestación. (Galina C. Valencia J, 2008). Figura 1. Interrelaciones hormonales del eje Hipotálamo-Hipófisis- Ovarios-Utero. (Carmel y col. 1976). Lo primero que se debe acotar es que las vacas son hembras poliéstricas típicas, es decir, presentan su ciclo estral durante todo el año independientemente de la raza. Aunque la madurez fisiológica (pubertad), habilita al animal para producir gametos y reproducirse, no debe hacerlo hasta alcanzar la madurez zootécnica (peso y edad según la raza). Esto 14

31 para garantizar el desarrollo corporal adecuado que le permiten al animal sobrellevar la monta, la gestación, el parto y la lactancia. El celo en la vaca se repite cada 21 días, dura de 6 a 30 horas y la parte más fértil es la segunda mitad del celo ( 2010). Los acontecimientos del ciclo estral de la vaca pueden dividirse en dos fases la folicular y la luteinita. En la fase folicular, relacionada con el crecimiento del folículo se observan dos períodos denominados Proestro y Estro, y en la Luteínico, caracterizada por el crecimiento del cuerpo amarillo se presentan el Metaestro y Diestro. (MCDONALD, L.E. 1991). Proestro Este período, cuya duración es de 3 días, comienza con la regresión del cuerpo lúteo del ciclo anterior y finaliza con la manifestación de celo (Zheng y col, 1994). La PGF2, de origen uterino, es el principal agente luteolítico (Niswender y col, 1994) que llega al ovario mediante un mecanismo de contracorriente establecido entre la vena uterina y arteria ovárica (Hixon y Hansel, 1974; McDonald, 1978; Knickerboker y col., 1986). En su secreción intervendrian diferentes hormonas entre las que se pueden mencionar la oxitocina, lo estrógenos, la progesterona y la LH. Figura 2. Transporte de la PGF2 de la vena uterina a la arteria ovárica por mecanismo de contracorriente. ( Mc. Donald, 1976). 15

32 Al producirse la destrucción del cuerpo lúteo tenemos una caída en los niveles de progesterona y posteriormente una pérdida de tejido luteal, siendo la PGF2, de origen uterino el principal luteolítico en los animales domésticos y en la mayoría de los roedores. Como consecuencia de la caída de los niveles de progesterona, disminuye el feed back negativo que dicha hormona tenía a nivel hipotalámico y comienzan a aumentar la frecuencia pulsátil de las hormonas gonadotróficas (FSH y LH) y se estimula el crecimiento folicular con el desarrollo de un gran folículo y el aumento en los niveles de estradiol. Cuando los estrógenos alcanzan cierto nivel, se estimula la receptividad al macho y comienza el período de celo o estro ( 2010). Estro Esta fase comienza con la receptividad al macho (la hembra se deja montar por otras hembras- conducta homosexual- y por el toro), e involucra todos los cambios que permiten la ovulación y el comienzo de la formación del cuerpo lúteo ( Holy, 1983; Bonafoz y Ghinther, 1995.) El celo o estro es la etapa más fácilmente reconocible del ciclo estral. porque es caracterizada por una serie de cambios visibles en el comportamiento que incluyen la receptividad sexual y la copulación. El estradiol es la hormona dominante durante esta etapa del ciclo y no solamente induce estos cambios del comportamiento sino que también provoca cambios fisiológicos en el tracto reproductivo. Cuando la hembra entra en celo lo hace gradualmente y no es totalmente receptiva al principio, puede demostrar algunas características de su aproximación a la etapa receptiva las cuales incluyen incremento en la locomoción, en la vocalización, nerviosismo e intentos de montar a otros animales (esto es valido especialmente para la hembra bovina). Sin embargo en esta etapa no es todavía receptiva. A medida que el celo progresa también incrementa el grado de aceptación del macho y se puede realizar la cópula. Esta voluntad de la hembra de recibir al macho (u otras hembras), se denomina reflejo de parada o quietud. Es en este momento que la 16

33 hembra adopta una postura característica arqueando el dorso (lordosis) y este reflejo puede incluso ser utilizado por el hombre para detectar el celo y de esta manera planificar el servicio o IA (Aguilar, J. 2001). Durante el estro, cuya duración es de 18±6 horas, la vaca manifiesta inquietud, ansiedad, brama con frecuencia y pierde el apetito; en el caso de las vacas lecheras, se reciente su producción. Las vacas presentan descarga de mucus con mínima viscosidad (filante), cuyo olor atrae y excita al toro (presencia de feromonas), edema de vulva y en el útero se produce un aumento del tono miometrial, detectado fácilmente por palpación transrectal. Durante esta fase, los estrógenos en altas concentraciones alcanzan el umbral de estimulación del centro cíclico hipotalámico, estimulando a las neuronas hipotalámicas a producir el pico de GnRH y en consecuencia el pico de LH. Con respecto a la FSH, disminuye su secreción, consecuencia del feed back negativo estrogénico y de la inhibina, con excepción del momento en que se produce el pico preovulatorio de LH, en que puede aparecer un pico de FSH. Posteriormente, 4 a 12 horas después de la onda de LH,.se incrementan la concentración basal y la amplitud de los pulsos de FSH, relacionándose esto con la primera onda de crecimiento folicular ( 2010). Metaestro El período inmediato a la finalización del celo, es el metaestro (6 días). En este período ocurre la ovulación de la vaca, a diferencia de las otras especies que lo hacen durante el celo, y comienza la organización celular y desarrollo del cuerpo lúteo. La ovulación ocurre 28 a 32 horas de iniciado el celo y es desencadenada por el pico preovulatorio de LH. A la ovulación sigue hemorragia profunda y el folículo se llena de sangre convirtiéndose en cuerpo hemorrágico. En la formación del cuerpo lúteo (luteinización), se producen una serie de cambios morfológicos y bioquímicos que permiten que las células foliculares se transformen en células luteales, cambios que finalizan al séptimo día con un cuero lúteo funcional ( 2010). 17

34 Las células de la granulosa se hipertrofian junto con la amplia red de capilares que forman el cuerpo lúteo secretor de Progesterona. La producción de Estradiol disminuye. En esta etapa algunas vacas presentan sangrado metaestral (González, G. 2010). Diestro González, G. (2010), señala que al 5to día hay un cuerpo lúteo maduro. Las concentraciones en sangre de Progesterona son mayores a 1 ng/ml. El Diestro continúa hasta el día 14. La Progesterona es responsable de la formación del Endometrio para el establecimiento y mantenimiento de la gestación. Estimula la secreción de sustancias que nutren al embrión hasta que existe la placenta; inhibe las contracciones del útero, el moco cervical se torna más viscoso y cierra la cerviz evitando la entrada de agentes extraños al útero. También estimula en la glándula mamaria la síntesis alveolar y la secreción láctea. Después de 12 días de acción de la Progesterona, en el útero se agotan sus receptores y se vuelve refractario a esta hormona. El Estradiol folicular estimula en el útero la formación de receptores para la Oxitocina y la producción de enzimas Fosfatasa A y Ciclooxigenasa, indispensables para la síntesis de Prostaglandina F2 alfaa. De esta forma la Oxitocina producida por el cuerpo lúteo estimulara la secreción de Prostaglandina F2 a en las glándulas endometriales en forma pulsátil cada 6 a 8 horas. Esto provoca la regresión del cuerpo lúteo y los niveles de Progesterona bajan a menos de 1 ng/ml terminando el diestro y comenzando el proestro. El cuerpo lúteo secreta Progesterona en cantidades máximas desde el día 7 hasta el día 15. Cuando la secreción de Progesterona declina bruscamente (día 17), desencadena la secuencia de cambios hormonales que producen el Estro y la ovulación. Por lo tanto, la función del cuerpo lúteo es el reloj biológico que controla la duración del ciclo estral. 18

35 En resumen Agro Capacitación Argentina (AGROCOR. 2005), señala que el ciclo estral del bovino esta caracterizado por eventos fisiológicos y endocrinológico que se resumen en los cuadros 1, 2. Cuadro 1. Fases del ciclo estral bovino Fase Fase Días del ciclo Duración Eventos Folicular Proestro 19-celo 3 días - Regresión de CL Estro horas -Maduración folicular -Aumento de estrógenos -Pico LH- Estrógenos Luteal Metaestro días -Ovulación Diestro días -CL maduro - Respuesta PGF Fuente: AGROCOR Cuadro 2. Características internas y externas del ciclo estral bovino. Día de Hallazgos clínicos ciclo estral Palpación rectal Útero Signos externos CL 20 a 25 mm Discreto aumento Ausencia de signos de estro. Folículo 8 a 10 mm del tono, al final CL 10 a 15 mm Presencia de tono Pro estro: vulva poco turgente, Folículo 12 a 15 mm vestíbulo ligeramente congestionado 0 CL menos de 10 mm Marcada Estro: Turgencia vulvar, Folículos mm tonicidad vestíbulo hiperémico, Suaves y lisos. Después ovulación. Área suave y descargas copiosas de moco cristalino. cráter en el ovario. 1 4 Cl que alcanza 15 mm al Edema 4to. Día CL del 8vo día mm CL del 10mo día mm Fuente: AGROCOR. (2005) Edema Fisiológicamente flácido 19 Meta estro: 1er día después del estro leve descarga mucosa, puede presentarse el sangrado metaestral. Discreta congestión de la mucosa vestibular al inicio de este periodo

36 Dinámica folicular bovina Rajakoski (1960, citado por Roche y Boland, 1991) propuso ya en 1960 (citado por Roche Y Boland, 1991) la existencia de dos ondas de crecimiento folicular ubicadas entre los 3 a 12 y 13 a 0 del ciclo estral. No obstante, ello se propuso que el crecimiento folicular ocurriría en forma continua e independiente del ciclo estral y que el número total de folículos grandes aumentaba a medida que se aproximaba en el momento de la ovulación (Spitcer y Echternkamp, 1986). Posteriormente con la aplicación de ultrasonografia como un método efectivo para realizar el seguimiento y evaluación de la actividad folicular ovárica (Pierson y Ginther, 1984) diversos investigadores confirmaron la presencia de ondas de crecimiento folicular (Pierson y Ginther, 1987b, 1988, 1989b; Ireland y Roche, 1983; Sirois y Fortune, 1988; Ginther y col., 1989; Turzillo y Fortune 1990). Una onda de crecimiento folicular está caracterizada por presentar las fases del reclutamiento, selección, dominancia (Hodgen, 1982; citado por Lucy y col., 1992) y atresia folicular. Esta última se presenta solo en aquellos folículos no ovulatorios (Sunderland y col., 1992) la fase de reclutamiento está dada por el desarrollo de cohorte de folículos que comienza a madurar bajo un aporte adecuado de gonadotrofinas que le permiten avanzar hacia la ovulación. La fase de selección, es proceso por el cual un folículo evita la estresia con la posibilidad de llegar a la ovulación. La fase de dominancia, es el proceso por el cual el folículo seleccionado ejerce un efecto inhibitorio sobre el reclutamiento de una nueva cohorte de folículos. Este folículo dominante alcanza un tamaño mercadamente superior a los demás. Es responsable de la mayor secreción de estradiol y adquiere la capacidad de continuar su desarrollo en un medio hormonal adverso para el resto de los folículos. Por ultimo, la fase de atresia consiste en la 20

37 desaparición del folículo dominante que no ovula (Savio y col., 1988; Sunderland y col., 1994). En el comienzo del ciclo estral se produce un reclutamiento de una cohorte de folículos del pool de folículos antrales mas pequeños (2 a 4 mm) y después 2 a 4 días (días 2,3 y 5 del ciclo estral), se detectan por medio de ultrasonografía varios folículos de un tamaño medio, de 6 a 9mm (Lucy y col.,1992) Inmediatamente después de este periodo de selección en el cual un folículo emerge del pool de folículos reclutados y continua creciendo (Pierson y Ginther, 1987). Posteriormente este folículo se transforma en dominante (periodo de dominancia) e inhibe el crecimiento de los demás (Pierson y Ginther, 1987 Lucy y col 1992). Este folículo se lo define como un folículo grande de un diámetro mayor a 10mm, que es reclutado y seleccionado en onda de crecimiento folicular (Lucy y col., 1992; Adams y col 1993; Fig 7). El reclutamiento de los folículos que desencadenan el inicio de la primera onda de crecimiento folicular es estimulado por el segundo pico de FSH que ocurre luego de la ovulación) Turzillo y Fortune, 1990). De igual manera, las otras ondas de crecimiento folicular surgen a consecuencia de un aumento transitorio de FSH (Sunderland y col., 1994). Una vez que el crecimiento ha comenzado, se requiere de la presencia de gonadotrofinas (Gong y col, 1996; Lussier y col., 1994b) y péptidos intraovaricos tales como la activina, la folistatina (Findlay, 1994) y la inhibina (Martin y col., 1991) para que la dinámica folicular se lleve a cabo. El numero de ondas presentes en cada ciclo varia de 1 a 4 )Savio y col., 1988; Knof y col., 1989; Ginther y col., 1989; Kaneco y col 1991; Taylor Rajamahendram, 1991; Figueiredo y col., 1995; Ahmad y col., 1997) o 3 ondas (Savio y col., 1988; Savio y col., 1993). En un ciclo estral de 2 ondas de crecimiento folicular, la maduración del segundo folículo dominante coincide con la regresión del cuerpo lúteo y culmina con la ovulación del mismo (Knopf y col., 1989; Ginther y col., 1989ª). En otros casos se presenta 3 ondas de crecimiento folicular (Savio y col., 1988; Srois y Fortune, 1988) y coinciden con un ciclo estral de mayor duración, 21

38 debido a que se posterga el celo al no ovular el segundo folículo dominante y, en consecuencia, el tercer folículo requiere de un tiempo para madurar y poder ovular. La tasa de crecimiento (mm/día) del folículo dominante es mayor al comienzo o final del ciclo estral que aquel que se desarrolla en la mitad de la fase luteal (Savio y col., 1988), indicando que el nivel de progesterona la afecta. Para explicar la causa por el cual el folículo dominante de las primeras ondas (1 de 2 ondas, 2 de 3 ondas y 3 de 4) sufre regresión, se ha propuesto que se debería a una disminución en la frecuencia de los pulsos de LH debido a altos niveles de progesterona (Taylor y col., 1994). Ello provocaría una menor síntesis de andrógenos y en consecuencia del estradiol (Lucy y col., 1992; Savio y col., 1993). En otra hipótesis. Manikkam y Rajamahendram (1997) sugirieron que la atresia del folículo dominante estaría relacionada con una menor actividad de la enzima aromatasa de las células granulosas y no por una falta de sustrato (andrógenos). Por último, se ha observado una mayor cantidad de folículos _ 2 mm en el ovario que tenía el cuerpo luteo (Pierson y Ginther, 1987b) y que el ovario derecho presentó mayor actividad folicular en coincidencia con una mayor frecuencia de ovulación de dicho ovario (Pierson y Ginther, 1987b). Estas observaciones plantean que el cuerpo ejerce un efecto sobre la dinámica folicular, siendo la progesterona intraovárica una de las causales de dichas modificaciones. Sincronización de celos Larocca, C, et al. (2005), señala que diferentes métodos de sincronización del estro han sido utilizados como una herramienta de manejo, procurando concentrar los mismos durante un período de tiempo lo más corto posible manteniendo una adecuada tasa de concepción. De esta 22

39 forma, la sincronización ha permitido tener control sobre decisiones que afectan en forma directa la eficiencia del sistema productivo. Permitiendo el uso de tecnologías como la inseminación artificial a tiempo fijo, o en períodos muy controlados de tiempo, la monta dirigida o controlada con toros asegurando la paternidad de un reproductor cuando se usan más de uno por rodeo de distinto valor genético. Ben, G., et al. (2002), indican que los tratamientos para sincronizar los celos y las ovulaciones a través del control de las ondas de desarrollo folicular del ovario, permiten inseminar sistemáticamente un gran número de vientres en el mismo horario obteniéndose índices de preñez idénticos a los obtenidos con celo natural. La detección de celo lleva mucho tiempo y mano de obra, depende de las influencias ambientales (mal piso e inclemencias del tiempo) y suele ser ineficiente e imprecisa. Pero estos programas de tratamientos que aseguren concentraciones circulares elevadas de Progesterona sincronizan tanto la emergencia de una nueva onda de folículos ováricos como la ovulación y que utilizan la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) sin detección de celo pueden resultar en un desempeño reproductivo satisfactorio. La presencia de comportamiento de celo no tiene importancia en los protocolos IATF. (Colazo MG., 2004). El objetivo primordial de la sincronización es la capacidad de controlar el ciclo estral, lo que facilita establecer programas de inseminación artificial, eliminando los trabajos en la detección de calores, acorta el tiempo del parto y nos permite obtener descendencias de alta calidad genética (AGROCOR. 2005). Importancia de los programas de sincronización La sincronización estral es una técnica de manejo, que utiliza hormonas para controlar, o reprogramar, el ciclo del estro (Walker, D., et al. 2010). El objetivo de un programa de sincronización es manipular los procesos reproductivos, para que un alto porcentaje de hembras en un grupo dado, 23

40 puedan ser concebidas en un período corto, ya sea utilizando inseminación artificial o servicio natural. (Blezinger, S. 2000). Antes de iniciar el programa, se debe determinar el porcentaje de animales cíclicos y su condición corporal, así como hacer un seguimiento del mismo, preferiblemente por detección del celo, aun cuando se emplee inseminación artificial a tiempo fijo (Larson, B. 2010). A través de la utilización de sincronizadores se pueden obtener las ventajas de la inseminación artificial y a la vez reducir los problemas asociados con la detección del celo. Todos los animales entrarán en el estro y dentro de un horario estrecho (Gilson, W. 2000). Las vacas que se preñan y paren más temprano destetan terneros más grandes, más pesados y tienen un porcentaje mayor de terneros en su vida reproductiva. Tienen más tiempo para descansar y volver a ciclar entre el parto y la siguiente cubrición. Uno de los objetivos de sincronizar estro en vacas lecheras es mantener un intervalo de partos aceptable de 12 a 13 meses. Investigadores estiman pérdidas de 3 a 5 o más dólares, cuando una vaca permanece más de 100 días abiertos. La sincronización agrega sus propias ventajas a la inseminación artificial. Los programas de inseminación artificial basados en sincronizaciones resultan en una temporada de cubriciones más corta con obviamente, una temporada de partos menor. Ambos hechos demandarán menos tiempo utilizable en otras labores y van ha recibir más atención que si éstos fueran distribuidos a través de varios meses. Desde el punto de vista del parto, los beneficios serán, acortar los intervalos entre partos y obtener terneros con edades similares, esto significa que el manejo puede ser también más uniforme. Además se puede programar las cubriciones y partos de tal forma que se adapten a otros trabajos y poder aprovechar todas las ventajas en la-época con mayor disponibilidad de alimento de la finca (Gilson, W. 2000). Con el uso de sincronización del estro, la mayoría de las vacas del hato pueden inseminarse 60 días post parto o poco después. Esto permitirá 24

41 dos inseminaciones antes de 85 días post parto. En promedio una vaca presenta su primer celo post- parto sin el uso de prostaglandinas a los 71 días. Por consiguiente el promedio de días a primer servicio puede ser reducido a 11 días o más. En la práctica probablemente más de 11 días debido al porcentaje alto de estros inadvertidos en la mayoría de los hatos. (Gilson, W. 2000). En forma resumida a través del uso eficaz de un programa de la sincronización, se puede lograr lo siguiente (Blezinger, S. 2000): Facilitar el uso de la inseminación artificial. Elección del momento de inseminación artificial y por lo tanto de la temporada de nacimientos. Reducción de días abiertos y programación de intervalo entre partos. Menos tiempo utilizado en la detección de estros. Se obtienen lotes uniformes, mayor cosecha de terneros, y por lo tanto mayores ingresos. Las vacas se preñan y paren en una misma época. Además para trabajar up programa de sincronización deben de considerarse varios factores (Blezinger, S. 2000): Nutrición. El ganado debe estar en una buena condición corporal. Esto involucra niveles adecuados de materia seca en general, pero específicamente proteína, minerales y vitaminas. Se puede decir que la nutrición es el factor más importante que podría dictar el éxito o fracaso del programa. Para el éxito de algunos protocolos de sincronización de estros, es esencial que las hembras estén ciclando. Las vacas necesitan un mínimo de 45 días post parto antes de iniciar el tratamiento. Se examinan todas las vacas para determinar que sus tractos reproductivos hayan tenido una involución uterina adecuada. Salud de las vacas, la prevención y tratamiento de 25

42 enfermedades, así como el control de parásitos es importante antes de la sincronización. Tiempo y trabajo disponible para la administración del producto, detección de celo sobre todo cuando se utiliza la inseminación artificial. Medios adecuados para realizar la inseminación artificial. Semen de alta calidad e inseminador experimentado. Tener medios adecuados y trabajo adicional para el manejo del ganado durante el tratamiento. Puntos importantes al establecer un programa de sincronización AGROCOR. (2005), indica que los puntos importantes al establecer un programa de sincronización son: Confirmar la actividad cíclica por palpación rectal. Estado nutricional del hato. Estado de salud del hato. Registros individuales. Programa de inseminación artificial. Estado funcional de los animales Ben, G., et al. (2002), señala que en los programas de sincronización de celos es necesario tener en cuenta el estado funcional de los animales, para lo cual se establece las siguientes referencias: Vacas: Paridas de más de 40 días, con involución puerperal normal, útero en posición pelviana y de diámetro menor de 6 cm, son aptas cuando están ciclando aunque estén en anestro, siempre que estén ganando peso. Vaquillonas: Que hayan alcanzado la edad reproductiva (mayores de 15 meses), con desarrollo corporal, genital y con síntomas de actividad ovárica. 26

43 Condición corporal y alimentación Ben, G., et al. (2002), indican que la condición corporal es un parámetro importante, que mide la deposición de grasa sobre el animal como garantía de reservas de energía. En una escala de 1 a 5 (1 flaco, 2.5 intermedio y 5 exceso de gordura), es necesario que los animales estén con una condición mínima de 2 a 2.5 y ganando peso. Es indispensable que los animales estén comiendo bien, de acuerdo a su estado funcional y época del año, recuperando condición corporal y ganando peso. El balance energético positivo favorece la actividad ovárica, la fertilidad y la viabilidad embrionaria. Brogliattí, G. (2003), manifiesta que la condición corporal de los animales es un factor de suma importancia. Los resultados con animales de condición corporal 3 (escala de 1 a 9), son de entre el 25 % y 35 % de preñez, mientras que animales de condición corporal 5 o más los porcentajes oscilan entre el 55 % y el 65 % de preñez. Con vacas de una condición corporal de 7, con un post parto de más de 4 meses y sin ternero al pie se lograron resultados del 71,2 % de preñez. Estos resultados solo se pueden alcanzar con un excelente manejo de los animales y la utilización de un semen de alta calidad. Resultados esperados de la sincronización del celo Según Ben, G., et al. (2002), los resultados esperados de la sincronización del celo son: Indice de preñez de primera inseminación en vacas con cría 50 %; y en vaquillonas y vacas secas 60 %. Indice de preñez con inseminación de los primeros retornos: entre 70 y 75% en vaquillonas y entre 60 y 65% en vacas con cría, en seis días de IA y 25 días entre servicios. Indice de preñez final en 60 días, con servicio de repaso con toro, superior al 90%. 27

44 Hormonas utilizados en el manejo del ciclo estral de la vaca Prostaglandinas (PGF2) Son ácidos grasos insaturados de veinte carbonos derivados del ácido prostanóico. Dependiendo de la estructura química del anillo ciclo pentano, las prostaglandinas se dividen en cuatro grupos A, B, E Y F, cada grupo posee diferentes propiedades fisiológicas y farmacológicas. La acción biológica más grande de las prostaglandinas en los bovinos es su poder de producir la regresión del cuerpo lúteo. Una inyección de prostaglandina aplicada entre el día 6 y el día 16 (momento de la descarga natural de PGF2a), del ciclo inducirá la regresión del cuerpo lúteo que finaliza la fase luteínica. Como consecuencia, se inicia una nueva fase folicular y el animal presentará celo y ovulará. (O'Connor, M. 2000). Debido a que las prostaglandinas tienen actividad luteolítica, las hembras deben estar ciclando normalmente para que sean efectivas. Cabe mencionar que la prostaglandina solo es efectiva después del día 6 ó 7 del ciclo. La fertilidad subsiguiente a la luteolisis con PGF2 es equivalente a la que se produce en celos espontáneos. l parto. La Prostaglandina F2a (PGF) y sus análogos son los agentes farmacológicos más utilizados en programas de sincronización de celos. El tratamiento con PGF causa la regresión del cuerpo lúteo (CL), maduro y se han desarrollado muchos protocolos de sincronización de celos que la utilizan. Uno de los problemas de la sincronización de celos con PGF es la baja fertilidad a los esquemas de IATF. Esto se debe a que el intervalo desde el tratamiento hasta la ovulación es afectado por el estadio del folículo dominante en el momento de la aplicación de la PGF. Por lo tanto, para tener buenas tasas de preñez con estos esquemas es necesario detectar el celo de los animales para realizar la IA a las 12 horas, es decir, que la detección de celos sigue condicionando su aplicación y resultados (Bó, G., et al. 2002). 28

45 Larocca, C, et al. (2005), indica que en estudios utilizando PGF2oc y sus análogos en programas de sincronización de celos, obtuvo 61,3 y 59,0% de tasas de concepción y preñez respectivamente en un ensayo con 77 vaquillonas Holstein. Progestágenos La progesterona (P4), es la hormona encargada del mantenimiento de la gestación, ya que proporciona el estimulo hormonal que es requerido para el desarrollo uterino y posterior implantación placentaria, además de mantener la inmovilidad uterina (Wanke, D., et al. 2010). (2010), reporta que la progesterona (también conocida como P4), es el principal de los progestágenos. Junto con los estrógenos, los progestágenos forman el binomio hormonal femenino por excelencia. Es la hormona responsable del desarrollo de caracteres sexuales secundarios en una mujer, y sirve para mantener el embarazo. El fundamento de su empleo es que tanto la progesterona endógena como la exógena bloquean la liberación de hormona folículo estimulante (FSH) y hormona luteinizante (LH) y cuando se retira se produce un incremento gradual de la concentración de estas gonadotropinas, principalmente de la LH que culmina en una oleada ovulatoria; aproximadamente a las 48 horas después de retirado el efecto de la progesterona en el caso de las vacas que responden al tratamiento. El norgestomet actúa como un cuerpo lúteo artificial, sensibilizando el eje hipotálamo- hipofiso-gonadal (Walker, D., etal. 2010). La progesterona tiene un rol importante sobre la dinámica folicular ovárica, los niveles supraluteales (>1 ng/ml), provocan la regresión del folículo dominante y aceleran el recambio de las ondas foliculares, este cese de la secreción de productos foliculares (estrógeno e inhibina), produce el aumento de FSH que va a ser la responsable del comienzo de la emergencia de la siguiente onda folicular. Por otro lado la caída de Progesterona a niveles subluteales (< 1 ng/ml), inducen el incremento 29

46 de la frecuencia de los pulsos de LH, el crecimiento y la persistencia del folículo dominante con concentraciones muy altas de Estradiol que provocan por un lado el celo y a nivel endocrino inducen finalmente el pico de LH que es seguido por la ovulación ( 2010). Factor liberador de gonadotropinas (GnRH) El resultado de inyectar GnRH es inducir la secreción por parte de la hipófisis de las hormonas LH y FSH, provocando el desarrollo y maduración de los folículos, así como la ovulación y luteinización. Las hormonas FSH y LH son liberadas por la hipófisis poco después de la aplicación de GnRH, detectándose los niveles máximos de estas una y media hora posterior a la inyección intramuscular. La cantidad liberada de gonadotropinas depende de la dosis de GnRH administrada. La dosis de 0.1 mg. de Fertagyl produce una respuesta significativa de LH en la vaca equivalente a la descarga de LH que precede a la ovulación. La dosis que reporta la literatura consultada oscilan entre 0.1 y 0.5 mg (INTERVET. 2009). En los protocolos clásicos para superovulación, GnRH se aplica 7-8 días antes de la inyección de PGF2a. Mas recientemente se ha empleado otro protocolo de aplicación conjunta de GnRH y PGF2a al día cero seguido de una segunda aplicación de GnRH para mejorar la sincronización de la ovulación (De la Sota, R. 2002). Gonadotropina sérica de yegua preñada (ecg) La Gonadotropina sérica de yegua preñada (ECG), se aísla de las yeguas preñadas y en consecuencia, fue uno de los materiales gonadotrópicos del que primero se dispuso comercialmente. Esta gonadotropina es una glicoproteína de gran peso molecular, que tiene acción estimulante sobre los folículos ováricos y es producida por los cálices endometriales de la yegua gestante a partir del día 30-35, con un pico alrededor del día 70 y 30

47 se mantiene hasta el día 150 aproximadamente (Hincapié, 1996). Esta gonadotropina se secreta en capas endometriales en el útero equino. Tales estructuras están formadas por células trofoblásticas especializadas que invaden el endometrio materno y son de origen fetal y no materno. La ECG es una gonadotropina con actividad de la hormona FSH y de la hormona LH. En la hembra, la ECG estimula el crecimiento y maduración de los folículos. En el macho estimula el desarrollo del tejido intersticial del testículo y la espermatogénesis (INTERVET. 2009). Bó, G., et al. (2002), señala que desde hace muchos años se promueve, sobre todo en Europa, la utilización de una dosis de Gonadotrofina Coriónica Equina (conocida internacionalmente con las siglas ecg o ECG), al final del tratamiento para estimular el desarrollo folicular en vaquillonas prepúberes, vacas con cría o vacas lecheras en anestro pos parto. Se ha observado un mayor porcentaje de preñez en vacas en anestro pos parto y con condición corporal comprometida o en vacas con menos de 60 días pos parto, cuando se agrega ecg al tratamiento. Sin embargo, hay otros trabajos que no han encontrado un beneficio en utilizar ecg en vacas pos parto con alto porcentaje de ciclicidad y buena condición corporal. En pruebas de campo trataron 106 vacas con Crestar+eCG+GnRH y se obtuvo un 58,5% de preñez (62/106), mientras que de 49 vacas IATF con ecg pero sin GnRH resultaron preñadas 25 (51%), sin embargo estas no fueron significativas y habría que hacer nuevas comparaciones con un número mayor de animales para obtener resultados concluyentes. Con respecto al uso de ecg en vaquillonas, los resultados dependen en gran medida de la condición corporal y de la ciclicidad de los animales. La utilización de ecg es especialmente útil en rodeos donde, el porcentaje de anestro es alto. No obstante, el porcentaje de vacas cíclicas en el rodeo y la condición corporal de los animales siempre condicionan los resultados de preñez. Además, señala que la utilización de ecg al momento de la remoción de dispositivos con P4 para sincronizar el celo de animales en anestro, 31

48 aumentó el porcentaje de ciclicidad y los porcentajes de preñez en vacas con estrés nutricional, pero, si la causa del anestro está asociada solamente al efecto del amamantamiento y no al amamantamiento sumado a un estrés nutricional, la adición de ecg no aumenta el porcentaje de preñez. Benzoato de estradiol El uso de Benzoato de Estradiol al momento de la aplicación del progestágeno (considerado este como día 0), provoca una nueva onda folicular; la aplicación del Benzoato de Estradiol a la extracción del progestágeno induce un pico preovulatorio de LH a través del feed back positivo del estradiol sobre el GnRH y LH lo que resulta en una alta sincronía de ovulaciones. Su empleo se recomienda en anestro posparto, celo silencioso y como sincronizador del celo ( 2010). Las dosis a utilizar dependen del uso que se destine, así: Anestro postparto: administrar 1 mg de benzoato de estradiol después del progestágeno. Celo silencioso: administrar 2mg de benzoato de estradiol antes del progestágeno. Sincronización de celo: administrar 2 mg de benzoato de estradiol antes del progestágeno y 1 mg, después del progestágeno. Programa de sincronización de celos y ovulaciones Hay varios programas y métodos tradicionales disponibles para sincronizar estro en las hembras. Se han diseñado métodos que imitan o controlan el cuerpo lúteo en el ovario. Actualmente también se han diseñado nuevos métodos para controlar la ovulación y/o las olas foliculares que ocurren en el ovario durante los 21 días del ciclo estral (Rasby, R. 2000). 32

49 Progestágenos y estrógenos Bó, G., et al. (2002), señalan que una de las alternativas para sincronizar el desarrollo folicular es la utilización de dosis farmacológicas de estrógenos y progestágenos para que, a través de la inhibición de las gonadotrofinas circulantes, induzcan la atresia de los folículos en crecimiento y resulte, de esta manera, en el desarrollo de una nueva onda folicular. En una serie de experimentos demostraron que el tratamiento con progestágenos (P4) y estradiol-17b (E-17B), o benzoato de estradiol (BE), administrados en cualquier momento del ciclo estral, inducen el crecimiento sincrónico de una nueva onda folicular, aproximadamente 4 días después. El tratamiento con dispositivos intravaginales CIDR-B (dispositivo liberador de progesterona), combinados con E-17G. y P4, administrados por vía intramuscular (im), resultó en el comienzo sincrónico de una nueva onda folicular 3 a 5 días después, dando como resultado que todas las vaquillonas tuvieran un folículo dominante en la fase de crecimiento en el momento de la remoción del CIDR-B en el Día 7. En otros trabajos también se observó que para tener mayores índices de preñez en programas de IATF había que inducir la ovulación utilizando una segunda dosis de estradiol (E- 17G.). Progestágenos combinados con Gonadotropina sérica de yegua preñada (ecg) El Norgestomet en combinación con Gonadotropina sérica de yegua preñada (ECG), al final del tratamiento para estimular el desarrollo folicular fue estudiado para ser utilizada en vaquillonas, vacas con cría o vacas lecheras en lactancia. Con este tratamiento el grado de ciclicidad de los animales influye drásticamente sobre el porcentaje de preñez final, siendo aproximadamente un 60% en vacas cíclicas y un 40% en vacas en anestro. Al utilizar 300 Ul en vaquillonas y 400 Ul en vacas, en ambos casos la inyección de ecg se aplicó al momento de retirar el implante y se IATF a las 48 horas. El porcentaje de preñez promedio obtenido fue 33

50 del 50,19 y 50,12% para vaquillonas y vacas respectivamente (Bussi, P. 2010). Rodríguez, M. (2003), señala que en vacas lecheras se ha recomendado la administración de gonadotropina sérica dé yegua preñada (ecg), al retirar el implante, para reforzar el efecto gonadotrópico, estimulando la maduración folicular, el celo y la ovulación. Para la aplicación en novillas de carne se ha recomendado aplicar una inyección de ecg al retirar el implante, debido a que es frecuente que estos animales se encuentren en anestro, realizando una sola inseminación 48 horas más tarde. Además recomienda la aplicación de prostaglandinas (PGF), 48 horas antes de retirar el implante para mejorar tanto la sincronización como la fertilidad. Progestágenos asociados con Benzoato de estradiol y prostaglandinas Brogliatti. G. (2003), señala que en datos obtenidos de inseminaciones realizadas en las provincias de Chaco, norte y sur de Santa Fe, oeste de Buenos Aires, norte y sur de Córdoba (Argentina), con un total de vacas inseminadas utilizando distintos protocolos de sincronización de celos. Encontró que el tratamiento más utilizado fue la inserción de un dispositivo intravaginal de progesterona y la inyección de 2 mg de Benzoato de Estradiol en el día 0, remoción del dispositivo el día 7 u 8 junto con la aplicación de la prostaglandina. La aplicación de 1 mg de Benzoato de Estradiol el día previo a la IATF y la inseminación sistemática a la totalidad de las vacas sin detección de celo entre las 48 y 56 horas después de la remoción del dispositivo intravaginal. Los resultados obtenidos variaron entre el 45 % y el 65 % sobre el total de las vacas tratadas con cuatro encierres. No existieron diferencias significativas en el día de la remoción del dispositivo intravaginal en el día 7 u 8 (65 % versus 63 % de preñez sobre un total de 530 vacas), de esta forma permite iniciar a la totalidad de los animales y luego separar dos tropas para la IATF. Estos programas pueden realizarse tan temprano como a los 35 días post parto. 34

51 Progestágenos sintéticos asociados con benzoato de estradiol y ecg Fernández, A. (2003), reporta que este método de inducción y sincronización de celos se basa en la aplicación de dispositivos liberadores de progestágenos o progesterona, los cuales se mantienen durante un período de 9 a 10 días y al retirarlos los animales presentan celo entre las 36 y 48 horas siguientes. La progesterona tiene como misión producir un bloqueo del hipotálamo, de manera que impedirá, independientemente de la existencia de un cuerpo lúteo, que se produzcan ovulaciones mientras que los animales conserven el dispositivo. Además provoca una repleción de gonadotrofinas hipofisarias que se liberan bruscamente al retirarlo. De este modo, se minimiza la acción de un cuerpo lúteo durante 9-10 días, tiempo muy similar a la duración del cuerpo lúteo del ciclo. El estrógeno (benzoato de estradiol), se aplica el primero o segundo día del tratamiento y tiene como misión producir la regresión de un posible cuerpo lúteo en formación (los estrógenos son potentes agentes antiluteotróficos en los primeros días del ciclo) y al mismo tiempo, provoca la atresia del folículo dominante de la onda de desarrollo folicular en curso e induce una nueva onda folicular entre 4 y 5 días más tarde. Este es el principal motivo que explica la sincronización tan perfecta que se obtiene mediante estos tratamientos, ya que se consigue manipular las ondas de desarrollo folicular de manera que en todos los animales tratados se inicia una nueva onda prácticamente el mismo día. Así, al retirar la fuente de progesterona el día 9-10 del tratamiento, el folículo dominante de la onda que se inició a los 5 días de iniciado el mismo se encuentra siempre en una fase óptima de desarrollo folicular (día 4-5 de la fase de crecimiento) y la ovulación se producirá de un modo casi simultáneo en todos los animales alrededor de las 60 horas de retirar el dispositivo permitiendo entonces realizar inseminación a tiempo fijo sin control de celos. Esta metodología puede ser aplicada a todo tipo de animales (cíclicos y en anestro, en fase 35

52 folicular o luteínica), permitiendo inseminar los animales a tiempo prefijado con total independencia de la detección de celos. Efecto de la condición corporal en programas IATF. La respuesta de los protocolos de sincronización utilizados en los últimos años y en especial los que son a base de progestágenos, se ven influenciados por la Condición Corporal (CC); Al momento de la Inseminación Artificial (IA) la CC debe ser como mínimo de 2,5 ya que con valores inferiores los niveles de fertilidad se encuentran afectados (Hincapié et al., 2005). La baja CC se asocia a la inhibición de los pulsos de GnRH procedentes del hipotálamo, lo que indica que el efecto de la CC sobre la duración del periodo de anestro posparto es causado a través de la frecuencia de pulsos de LH (Wright et al., 1987; Wright et al., 1992). También se ha observado la disminución en el número de folículos grandes o de folículos totales, cuando las vacas son alimentadas con dietas de bajo contenido energético (Grimard et al., 1995). El rendimiento reproductivo de las vacas está relacionado aunque no invariablemente, con el peso, los cambios de peso y la CC. La reanudación de los ciclos estrales después del parto guardan relación con los cambios de peso al final de la gestación y el estado de carnes después del parto; las vacas que tienen una CC superior a 2,5 (en la escala de 1 a 5) presentan celo en un tiempo mínimo, sin embargo, las que pierden 10% del peso vivo después del parto retrasan la reanudación del celo hasta en 19 días (McClure, 1995). El tejido adiposo se considera un órgano endocrino y una de sus principales secreciones es la Leptina (Vernon et al., 2001). Esta hormona es de tipo proteico de 16 kda secretada por los adipocitos, participa en la modulación de la acción del eje hipotálamo-hipófisis-gónadas, en la regulación del apetito (hormona de la saciedad), en incrementar el 36

53 metabolismo, regular la ganancia de peso y la deposición de grasa (Miner, 1992; Ingvartsen y Boisclair, 2001). Se ha propuesto que el neuropéptido Y (NPY) presente en el Sistema Nervioso Central (SNC) específicamente en el hipotálamo, actúa como mediador primario de la acción de la Leptina regulando la LH y la somatotropina, lo cual es dependiente de la especie y del estado fisiológico. En condiciones de estrés nutricional, la expresión del RNAm para Leptina es suprimida y el NPY se eleva a nivel central, resultando en la disminución de la secreción de LH (Barash et al. 1996). Los efectos locales de la Leptina se han demostrado en las gónadas, donde una hiperleptinemia suprime la esteroidogénesis y afecta potencialmente la maduración de los gametos (Baskin et al., 1999; Smith et al., 2002). La Leptina en bovinos suprime la producción de estrógenos y progesterona en las células de la granulosa de los folículos pequeños y grandes que han sido estimulados por la FSH y la insulina. (Ruiz, Cortés et al., 2003). En un estudio sobre el efecto de la Leptina en la liberación de LH, la hormona del crecimiento (GH) y la prolactina (PRL) en cultivos de células pituitarias anteriores bovinas in vitro, se observó que la Leptina aumentó la concentración de LH en el medio de cultivo en un 44% y un 45%, y la de GH en el medio de cultivo en un 14 y 12% en dosis de 10-8 y 10-7 mol/l respectivamente (p<0,05) y la de PRL en un 26% a una dosis de 10-7 mol/l (p<0,05). Estos resultados muestran que la Leptina estimula la liberación de LH, GH y PRL actuando directamente sobre las células pituitarias anteriores bovinas (Barb y Kraeling, 2004; Nonaka et al., 2005). 37

54 Hipótesis Hipótesis de Investigación H1 Se obtendrá tasas altas de preñez con el tratamiento uno H2 Se obtendrá tasas altas de preñez con el tratamiento dos H3 Se obtendrá tasas altas de preñez con el tratamiento tres Caracterización de las variables Variable Independiente Protocolo de sincronización.- son procesos usados con el fin de 38

55 manipular hormonalmente a la vaca para que ovule el día que se programe. Es decir, se puede agrupar animales, sincronizarlos con el fin de inseminarlos el mismo día sin necesidad de detectar celos. Variables Dependientes Fertilidad.- es la capacidad de un animal, de producir o sustentar una progenie numerosa. En este sentido, todos los seres vivos tienen como principal función la de continuar la existencia, por lo cual todos ellos han sido dotados con la capacidad para reproducirse y crear a partir de los adecuados procesos de fertilización a seres iguales a sí mismos. Definición de términos básicos Copulación.- proceso por el cual los elementos sexuales masculinos se ponen en contacto con los elementos sexuales femeninos en el interior de los órganos genitales correspondientes. Cuerpo lúteo.- Estructura glandular del ovario que se forma tras el desprendimiento del óvulo. El color amarillento lo proporciona la luteína, un pigmento carotenoide derivado de la xantofila. Dominancia folicular.- es la etapa de desarrollo folicular que comprende desde la divergencia hasta el momento en que el folículo dominante produce la máxima cantidad de estradiol, antes de desarrollar atresia u ovular. Embrión.- es la etapa inicial de desarrollo de éste mientras se encuentra en el huevo o en el útero de su madre. Espermatozoide.- célula sexual masculina de los animales, destinada a la fecundación del óvulo y a la constitución, junto con este, de un nuevo ser; está formado por una cabeza, cuello y una cola móvil que le permite desplazarse hasta el óvulo. Estro.-período de disponibilidad sexual o celo de los animales mamíferos. Folículo.- es una estructura anatómico-funcional que forma parte del ovario. 39

56 Gameto.- célula reproductora, masculina o femenina, cuyo núcleo solamente contiene un cromosoma de cada par, y que puede unirse a otro gameto de sexo opuesto, en la fecundación, pero no multiplicarse por sí sola. La unión de gametos da origen al cigoto. Onda folicular. es el crecimiento sincronizado de un gran número de folículos de 4 a5mm de diámetro, seguido por selección y desarrollo de un folículo dominante y supresión de los subordinados. Ovulación.- es uno de los procesos del ciclo estral de los animales en el cual un folículo ovárico se rompe y libera un óvulo, también conocido como ovocito o gameto femenino. Óvulo.- célula sexual femenina que se forma en el ovario: a partir del óvulo fecundado se forma un embrión. Placenta.- es un órgano efímero presente en los mamíferos placentarios y que relaciona estrechamente a la cría con su madre, satisfaciendo las necesidades de respiración, nutrición y excreción del feto durante su desarrollo. Poliestro.- presencia de varios estros en el período reproductivo del animal. Pubertad.- es el tiempo en el cual las características físicas y sexuales de un animal maduran y se presenta debido a cambios hormonales. 40

57 Fundamentación Legal DEL PROCEDIMIENTO ADMINISTRATIVO Art. 2 Para optar por el grado o título profesional de tercer nivel el estudiante debe cumplir los siguientes requisitos: Elaborar, exponer y sustentar un proyecto de investigación conducente a una propuesta a fin de resolver un problema o situación práctica. Art. 3.- El trabajo de graduación o titulación puede ser estructurado de manera independiente o como consecuencia de un seminario de fin de carrera. Art. 5. Los proyectos de graduación o titulación en tercer nivel, se orientan a la apropiación, profundización y aplicación de los saberes teórico prácticos de la profesión. Art. 7.- El trabajo de titulación es de responsabilidad del graduando y del tutor, como coautor. 41

58 CAPITULO III METODOLOGÍA La presente investigación se consideró como un método experimental puro, analítico, cuantitativo, longitudinal, comparativo, que se apoya en una investigación de campo y bibliográfico. Analítico.- se tomó 90 vaquillas que se encuentran en buenas condiciones reproductivas, las mismas que serán subdivididas en tres grupos experimentales, con diferentes productos hormonales y dosis para cada tratamiento de sincronización de celo a tiempo fijo. Diseño de la investigación Experimental puro.- se formó tres grupos de experimentación cada uno formado por 30 vaquillas aparentemente sanas, con un mismo sistema de manejo zootécnico y que presenten un peso igual o superior a los 300 kg de peso. Tipo de Investigación Según la tendencia Cuantitativa.- se pretende demostrar la aplicación de sistemas de sincronización a tiempo fijo en la amazonia ecuatoriana alcanzando porcentajes de concepción del 50 %, que es la media que se maneja a nivel internacional, evaluando cada tratamiento y verificando con cuál se alcanzo un porcentaje alto de fertilidad; para lo cual se evaluara estadísticamente a cada tratamiento mediante desviación estándar, coeficiente de variación, X 2 y t student combinado, correlación. 42

59 Según la orientación Evolución del fenómeno estudiado Longitudinal.- durante el período que duró la investigación se realizó varias observaciones como: chequeo ginecológico y selección de los animales, colocación del dispositivo intravaginal, retiro del dispositivo, inseminación artificial, diagnóstico de gestación a los 35 días post inseminación. Comparación de poblaciones muestreadas Comparativa.- se trabajó con un total de tres tratamientos mismos que se serán comparados para evaluar el porcentaje de concepción alcanzado con cada uno y la adaptabilidad a la zona de estudio. Características del área de experimento. La provincia de Pastaza se localiza al centro de la Amazonía ecuatoriana. Su sistema orográfico se origina en la cordillera oriental de los Andes. Las principales estribaciones son el Guayusaloma y los Llanganates, desde donde comienza la extensa llanura amazónica. Ubicación: Sus límites provinciales son: Norte: Napo y Orellana. Sur: Morona Santiago. Este: Perú. Oeste: Tungurahua. Provincia: Pastaza. Parroquias: Simón Bolívar, Fátima, Madre Tierra y Veracruz. Superficie: km 2. Longitud sur: 1 00 y

60 Latitud Oeste: y Aspectos físicos: Temperatura: máxima 31.0º C y mínima 8.6º C, promedio de 20.3 º C. Altitud: 950 m.s.n.m. Precipitación: Precipitación y Humedad al Occidente y Cordillera Oriental 2000 mm. Y en la llanura Amazónica4700 mm. Promedio anual 4538 mm. La evapotranspiración potencial es menor que la precipitación, por lo cual no existe meses secos teniendo una humedad atmosférica promedio anual del 89%. Clima: cálido-húmedo. Helofonía: El brillo solar fluctúa entre y horas sol al año. (INAHMI) 44

61 Población y muestra Las unidades experimentales son 90 animales divididas en tres métodos A,B,C. Método A: 30 vaconas, sistema IATF con implante intravaginal CIDR, E 2 Grafoleón, PGF 2 α Sincrocio, GnRH Conceptal. Método B: 30 vaconas, sistema IATF con implante intravaginal CIDR, E 2 Grafoleón, PGF 2 α Lutalyse, ecg Folligón. Método C: 30 vaconas, sistema IATF con implante intravaginal DIB, E 2 Benzoato sintex, PGF 2 α Lutalyse, ecg Novormón. Raza: mestiza. Peso: igual o superior a los 300 kg. Grupo A Día cero, se aplicará un implante intravaginal a base de Progesterona (1.9 g de P4) y 5 mg. de Benzoato de Estradiol (cada ml. contiene 5 mg. de Benzoato de Estradiol) intramuscular. Día siete, se procederá a retirar el implante intravaginal y se aplicará 0.75 ug. de PGF 2 α (cada ml. contiene 5 mg de Dinoprost Trometemina). 50 a 56 horas de retirado el implante IATF. Grupo B Día cero, se aplicará un implante intravaginal a base de Progesterona (1.9 g de P4) y 2 mg. de Benzoato de Estradiol (cada ml. contiene 5 mg. de Benzoato de Estradiol) intramuscular. Día siete, se procederá a retirar el implante intravaginal y se aplicará 0.75 ug. de PGF 2 α (cada ml. contiene 5 mg de Dinoprost Trometemina) y 500 UI ecg (presentación: 1000 U.I de ecg) intramuscular. Día ocho se aplicará 1 mg. de Benzoato de Estradiol (cada ml. contiene 5 mg. de Benzoato de Estradiol) intramuscular. 50 a 56 horas de retirado el implante IATF. 45

62 Grupo C Día cero, se aplicará un implante intravaginal a base de Progesterona (1 g de P4) y 2 mg. de Benzoato de Estradiol (cada ml. contiene 1 mg de Benzoato de Estradiol) intramuscular. Día ocho, se procederá a retirar el implante intravaginal y se aplicará 0.75 ug. de PGF 2 α (cada ml. contiene 5 mg de Dinoprost Trometemina) y 500 UI ecg (presentación: 5000 U.I de ecg) intramuscular. Día nueve, se aplicará 1 mg. de Benzoato de Estradiol (cada ml. contiene 5 mg. de Benzoato de Estradiol) intramuscular. 50 a 56 horas de retirado el implante IATF. En todos los grupos experimentales se diagnosticará preñez a los 35 días de realizada la inseminación artificial, con la ayuda de un ecógrafo transrectal, con una sonda lineal de 5.5. Mhz. Prueba de Hipótesis. Medidas de tendencia central Desviación estándar. Coeficiente de variación. X 2 y t student combinado. Correlación. Inferencia estadística Diseño Completamente al Azar (DCA). 46

63 Operacionalización de Variables. Tabla 4. Variable independiente: protocolo de sincronización. Conceptualización Categoría Indicador Descripció n Instrumen to Son procesos IATF Inseminación a Porcentaje registro usados con el fin de los 9 días. manipular hormonalmente a la vaca para que ovule. el día que se programe. Es decir, se puede agrupar animales, sincronizarlos con el fin de inseminarlos el mismo día sin necesidad de detectar celos. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor 47

64 Tabla 5. Variable dependiente: fertilidad Conceptualización Categoría Indicador Descripción Instrumento es la capacidad de un Preñez No retorno Porcentaje Registro animal, de producir o efectiva de celo observación y sustentar una progenie campo numerosa. En este sentido, todos los seres vivos tienen como principal función la de continuar la existencia, por lo cual todos ellos han sido dotados con la capacidad para reproducirse y crear a Preñez no efectiva Retorno de celo a los 21 días post inseminaci ón. porcentaje Registro observación y campo partir de los adecuados procesos de fertilización a seres iguales a sí mismos.. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. Técnicas e Instrumentos de Investigación. La presente investigación se sustentó en fuentes bibliográficas primarias y secundarias como: libros, revistas, artículos científicos, páginas webs e investigaciones similares. Los instrumentos a utilizar son veraces, es decir, la ficha donde se recopilo toda la información se anotó todos los resultados obtenidos en la experimentación. 48

65 Observación directa: se realizó la selección de las vaconas de los tres grupos experimentales mediante un chequeo ginecológico tomando en cuenta condición corporal, peso, para la valoración del aparato reproductivo. El estudio se realizó en Ecuador, región Amazóniza en la provincia de Pastaza en las Parroquias Simón Bolívar, Fátima y Madre Tierra. Selección de 90 vaconas de raza mestiza que estén con un peso promedio igual o superior a los 300 kg.; esta selección se hará en base al examen físico, condición corporal, chequeo ginecológico y conducta de cada animal. Las 90 vaquillonas fueron divididas en tres grupos experimentales. Grupo A. Treinta vaquillonas, la investigación se realizó en tres fases. Fase 1 Reconocimiento y mapeo de la zona. Entrevista con ganaderos. Visita a los ganaderos en sus fincas. Selección del ganado mediante chequeo ginecológico. Fase 2 Identificación del ganado mediante aretes. Levantamiento de registros por animal: condición corporal, peso, valoración del aparato reproductivo esto es cervix (consistencia, forma, anormalidades), útero (forma, tono, simetría, adherencias), ovarios derecho e izquierdo (presencia de estructuras como folículos, cuerpo lúteo, fibrosis). Aplicación de implante intravaginal. Aplicación de Benzoato de Estradiol. Retiro de implante intravaginal. 49

66 Aplicación de Prostaglandina F2 alfa. Aplicación de GnRH. IATF. Fase 3 Diagnóstico de preñez por ecografía. Grupo B. Treinta vaquillonas, la investigación se realizó en tres fases. Fase 1 Reconocimiento y mapeo de la zona. Entrevista con ganaderos. Visita a los ganaderos en sus fincas. Selección del ganado mediante chequeo ginecológico. Fase 2 Identificación del ganado mediante aretes. Levantamiento de registros por animal: condición corporal, peso, valoración del aparato reproductivo esto es cervix (consistencia, forma, anormalidades), útero (forma, tono, simetría, adherencias), ovarios derecho e izquierdo (presencia de estructuras como folículos, cuerpo lúteo, fibrosis). Aplicación de implante intravaginal. Aplicación de Benzoato de Estradiol. Retiro de implante intravaginal. Aplicación de Prostaglandina F2 alfa. Aplicación de Benzoato de Estradiol. Aplicación de Gonadotropina Coriónica Equina. IATF. Fase 3 Diagnóstico de preñez por ecografía. 50

67 Grupo C. Treinta vaquillonas, la investigación se realizó en tres fases. Fase 1 Reconocimiento y mapeo de la zona. Entrevista con ganaderos. Visita a los ganaderos en sus fincas. Selección del ganado mediante chequeo ginecológico Fase 2 Identificación del ganado mediante aretes. Levantamiento de registros por animal: condición corporal, peso, valoración del aparato reproductivo esto es cervix (consistencia, forma, anormalidades), útero (forma, tono, simetría, adherencias), ovarios derecho e izquierdo (presencia de estructuras como folículos, cuerpo lúteo, fibrosis). Aplicación de implante intravaginal. Aplicación de Benzoato de Estradiol. Retiro de implante intravaginal. Aplicación de Prostaglandina F2 alfa. Aplicación de Benzoato de Estradiol. Aplicación de Gonadotropina Coriónica Equina. IATF. Fase 3 Diagnóstico de preñez por ecografía. Validez y Confiabilidad de los Instrumentos. Los instrumentos utilizados son válidos y confiables usados en otras investigaciones; los datos expuestos en esta investigación podrán ser utilizados y medidos por cualquier otro autor que lo requiera, obteniendo 51

68 datos iguales o parecidos que se encuentren sobre el 50% que es la media internacional, tomando en cuenta condición corporal de las vaconas, peso, estado del aparato genital reproductivo, e historial de enfermedades reproductivas. Técnicas de Procesamiento y Análisis de Datos La recopilación de datos se lo realizó en fichas de campo, las cuáles nos sirvió para levantar registros de cada animal mostrando todas las fases de sincronización de celo a tiempo fijo, así como nombres de los toros utilizados y la raza. Los datos a tomarse, fueron: Selección del animal: fecha de la visita, nombre del propietario, sector, # arete, condición corporal, peso, cruce, tipo de alimentación en base a Gramalote Morado (Axonopus scoparius), características del cérvix (consistencia, forma, anormalidades), útero (forma, tono, simetría, adherencias), ovarios derecho e izquierdo (presencia de estructuras como folículos, cuerpo lúteo, fibrosis). Colocación del implante: fecha, hora, número de arete, peso aproximado, temperatura ambiental, Valoración aparato reproductor, grado de estrés, instalaciones, observaciones. Retiro del implante: fecha, # arete, hora, temperatura ambiental, característica del olor del implante y aspecto de la secreción, observaciones. Al momento de la Inseminación Artificial: fecha, # arete, hora, temperatura ambiental, presencia o ausencia y aspecto de la secreción, nombre del toro, raza, características del cérvix, observaciones. 52

69 Diagnóstico de gestación: fecha, número de arete, diagnóstico y observaciones. Todos estos datos se detallan en los anexos 1, 2, 3, 4 y 5. Se realizó un análisis estadístico mediante medidas de tendencia central que fueron expresados en pasteles, barras estadísticas indicando los porcentajes de concepción de cada tratamiento, así como la correlación existente entre el grado de condición corporal con la preñez alcanzada. 53

70 CAPITULO IV RESULTADOS Y DISCUSIÓN. Cuadro 3. Peso de los 30 experimentales del Tratamiento 1. Peso (kg) 9396 X 313,2 S 12,27 CV 3,92 n 30 Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. DISCUSIÓN Dado el cálculo de los pesos en este tratamiento, se puede concluir estadísticamente que la muestra tomada fue homogénea ya que el CV se sitúa bajo el límite de tolerancia (15%) y tenemos un valor aceptable para la desviación estándar. 54

71 Figura 3. Pesos de los 30 experimentales del tratamiento uno. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. Cuadro 4. Peso de los 30 experimentales del Tratamiento 2. Peso (kg) 9384 X 312,8 S 16,42 CV 5,25 n 30 Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. 55

72 Discusión. El resultado del cálculo de las medidas de tendencia central para este tratamiento, muestra que los pesos de esta muestra fue homogénea puesto que el CV se sitúa bajo el límite de tolerancia (15%), además el resultado de la desviación estándar es aceptable estadísticamente en relación a los datos utilizados. Figura 4. Pesos de los 30 experimentales del tratamiento dos. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. 56

73 Cuadro 5. Peso de los 30 experimentales del Tratamiento 3. Fuente: Peso (kg) 9461 X 315,37 S 15,74 CV 4,99 N 30 Investigación directa. Elaboración: El Autor. DISCUSIÓN El resultado del cálculo de las medidas de tendencia central para este tratamiento, muestra que los pesos de esta muestra fue homogénea puesto que el CV se sitúa bajo el límite de tolerancia (15%), además el resultado de la desviación estándar son aceptables en relación a los datos utilizados. Figura 5. Pesos de los 30 experimentales del tratamiento tres. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. 57

74 Cuadro 6. Porcentaje de gestación alcanzado por tratamiento. Parámetro T1 T2 T3 # animales Gestantes Vacíos % gestación Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. Figura 6. Porcentaje de fertilidad alcanzado en el Tratamiento 1. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. 58

75 Figura 7. Porcentaje de fertilidad alcanzado en el Tratamiento 2. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. Figura 8. Porcentaje de fertilidad alcanzado en el Tratamiento 3. Fuente: Investigación directa. Elaboración: El Autor. 59

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