Enfermedad autosómica recesiva Primera causa de patología pulmonar crónica en la infancia

Transcripción

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2 Sano FQ Portador Portador Enfermedad autosómica recesiva Primera causa de patología pulmonar crónica en la infancia

3 Mutaciones en el gen CFTR (regulador de la conductancia transmembrana) Defecto en el transporte del ion cloro Deshidratación de las secreciones Manifestaciones clínicas: respiratorias, gastrointestinal y genitourinarias

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5 Paciente estable? Paciente exacerbado? Cambios en los síntomas o signos con respecto al estado basal Incremento de la tos y la secreción mucosa Incremento de la frecuencia respiratoria Disminución de la tolerancia al ejercicio Detección rápida y tratamiento adecuado

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10 Datos completos Diagnóstico confirmado o sospecha Consenso grupo de trabajo B. cepacia Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

11 Exudado de fauces tosido Secreción bronquial Aspirado nasofaríngeo Esputo mini BAL BAL Aspirado traqueal Consenso grupo de trabajo B. cepacia Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

12 Exudado de fauces tosido: es una alternativa para pacientes pediátricos que no expectoran. Esputo inducido: solución hipertónica al 3 % se logra mayor volumen de muestra, menor número de células escamosas y mayor recuperación de patógenos.

13 B.A.L: en pacientes trasplantados y /o ventilados. Invasiva y localizada a una determinada superficie alveolar mini B.A.L: escaso volumen. No descarta primera porción

14 siembra dentro de las 4 horas conservación a 4 C hasta 24 horas Consenso grupo de trabajo B. cepacia Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

15 Muestras Respiratorias Agar chocolate Agar sangre BCSA CLDE Manitol salado atmósfera de CO 2 al 5% aerobiosis hs Consenso grupo de trabajo B. cepacia Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

16 Agar chocolate Agar sangre C.L.D.E - EMB Levine Mc Conkey Agar manitol salado o Chapman B.C.S.A. Agar Saboureaud Agar cetrimide (opcional) Consenso grupo de trabajo B. cepacia Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

17 Agar chocolate: 4 a 5 días en estufa con CO2 Agar sangre: 5 dias en estufa ( 7-10 días en infección crónica ) C.L.D.E: 2 días en estufa de 35 C Manitol salado: 2 días en estufa de 35 C B.C.S.A: 5 días en estufa de 35 C Agar Saboureaud: 7 días a 28 C Consenso grupo de trabajo B. cepacia Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

18 Organismo Crecimiento Hongos siempre Identificar Aspergillus spp y otros hongos a nivel de especie Enterobacterias Predominantes Realizar identificación bioquímica y pruebas de sensibilidad S. aureus Siempre Pruebas de sensibilidad H. influenzae Predominante Realizar β lactamasa S. pneumoniae Predominante Pruebas de sensibilidad a la penicilina P. aeruginosa Complejo BCC Otros no fermentadores de glucosa Micobacterias de rápido crecimiento siempre siempre Identificación y pruebas de sensibilidad Identificación a nivel de especie Consenso grupo de trabajo B. cepacia Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

19 Agar chocolate Haemophilus influenzae

20 Staphylococcus aureus Prueba de la coagulasa Agar manitol salado Prueba de DNA asa

21 Pseudomonas aeruginosa Patógeno predominante al finalizar la primera década de la vida. La prevalencia de infección varia significativamente según la edad. Inicialmente, la infección puede ser intermitente e involucrar a múltiples cepas. Posteriormente, una única cepa predomina y establece la infección crónica.

22 Pseudomonas aeruginosa

23 Colonización infección Se relaciona con una mayor morbilidad y mortalidad : progresivo deterioro de la función pulmonar y disminución de la supervivencia Adquisición en edades tempranas influye negativamente en el pronóstico de la enfermedad

24 Colonización inicial : morfotipos no mucosos Colonización intermitente Colonización - infección crónica Crecimiento formando biofilms. Adaptación genética : * hiperproducción de alginato ( cepas mucosas ) * variantes de lento crecimiento scv

25 Stenotrophomonas maltophilia Burkholderia cepacia complex Achromobacter xylosoxidans Inquilinus limosus Especies del género Pandoraea Especies del género Ralstonia

26 Aspergillus fumigatus Levaduras Mycobacterium avium Mycobacterium abscessus Ocasionales : enterobacterias

27 Grupo BNNF Complejo Burkholderia cepacia Requerimientos especiales de cultivo Patógeno oportunista en pacientes con FQ Infección crónica con alta morbilidad y mortalidad

28 B. cepacia es difícil de aislar Su identificación es una tarea laboriosa y compleja Medios de cultivo, métodos convencionales, sistemas comerciales (API 20NE, VITEK 2C) y pruebas de sensibilidad antimicrobiana Métodos de tipificación molecular

29 Burkholderia cepacia Burkholderia stabilis Burkholderia cenocepacia Burkholderia multivorans Burkholderia vietnamiensis Burkholderia dolosa Burkholderia ambifaria Burkholderia anthina Burkholderia pyrrocinia Burkholderia ubonensis Burkholderia latens Burkholderia diffusa Burkholderia arboris Burkholderia seminalis Burkholderia metallica Burkholderia contaminans Burkholderia lata 2014 B.pseudomultivorans 2015 B. territori B. stagnalis

30 Burkholderia cepacia Burkholderia stabilis Burkholderia cenocepacia Burkholderia multivorans Burkholderia vietnamiensis Burkholderia dolosa Burkholderia ambifaria Burkholderia anthina Burkholderia pyrrocinia Burkholderia ubonensis Burkholderia latens Burkholderia diffusa Burkholderia arboris Burkholderia seminalis Burkholderia metallica Burkholderia contaminans Burkholderia lata 2014 B.pseudomultivorans 2015 B. territori B. stagnalis

31 Medio CLDE Medio BCSA (Britania) Medio BCSA (Garrahan)

32 Métodos fenotípicos Coloración de Gram Medio TSI Oxidasa O.N.P.G LDC Medio O/F

33 Esculina DNAasa PYR * Pruebas bioquímicas complementarias Indol Medio O/F (asimilación de azúcares) β-hemólisis Sensibilidad a colistin * Diagn Microbiol Infect Dis Jan;57(1):101-3

34 Complejo Burkholderia cepacia (CBc) Agar sangre humana Medio CLDE Medio CLDE

35 Prueba Bioquímica (n=54) N de aislamientos positivos % de positividad Movilidad 52 96% Oxidasa % DNasa 1 2% Esculina 48 89% Hemólisis 31 57% LDC 52 96% ONPG % Pigmento 33 61% Resistencia a colistin % Isasmendi, A -Trabajo Final Especialidad Microbiología Clínica UCA -2012

36 Sistemas Automatizados y semi automatizados API 20NE Estos sistemas dependen del desarrollo bacteriano VITEK 2C en sustratos nutritivos escasos y por lo tanto sólo pueden identificarse las especies más activas bioquímicamente con un grado aceptable de precisión

37 % DE PROBABILIDAD Aceptable (mayor al 90%) Dudoso (perfil con 2 posibilidades) Inaceptable (perfil con tres posibilidades)

38 Métodos fenotípicos Resultan insuficientes para el diagnóstico microbiológico certero de miembros del CBc Metodos moleculares diagnóstico certero y eficaz

39 Identificación de miembros del CBc 1043 pb Control + PCR Amplificación rec A Reacción de secuenciación Mahenthiralingam y cols, J Clin Microbiol 2000; 38:

40 196 secuencias correspondientes a 98 aislamientos clínicos de miembros del BCC. CBc está presente en 19 pacientes que se siguen en nuestro hospital. Isasmendi A y cols - Medicina Infantil 2014; XXI 85-89

41 Búsqueda B. cepacia Importancia epidemiológica (especie) + clínica + terapéutica Identificación compleja y laboriosa 20 especies = CBc Métodos fenotípicos convencionales

42 Patógenos emergentes El desarrollo y el uso de nuevas metodologías contribuyeron al aumento en la frecuencia de aislamiento de estas especies en el cultivo de las secreciones respiratorias del paciente fibroquístico.

43 Vitek MS Maldi-Tof

44 Vitek MS Maldi-Tof

45 Staphylococcus aureus es un frecuente colonizador de las narinas anteriores y representa un importante reservorio. Pseudomonas aeruginosa provoca un deterioro de la función pulmonar. Es necesario establecer medidas que eviten la colonización inicial y faciliten su detección lo antes posible tras la primocolonización, momento en el cual la terapia antibiótica puede todavía erradicarla

46 La infección respiratoria por Burkholderia cepacia, demostró ser menos prevalente que la producida por otros gérmenes Debido a su mayor transmisibilidad, virulencia y su marcada resistencia a los antibióticos, se hace necesario su diagnóstico microbiológico rápido y eficaz Si conseguimos que se logre una mejor adherencia a las medidas de control de infecciones, podría disminuir la incidencia de P. aeruginosa y miembros del BCC

47 IMPORTANTE AUMENTO EN LA EDAD DE SOBREVIDA Neumonólogos kinesiólogos nutricionistas bioquímicos/microbiólogos enfermeras - psicoterapeutas