Congreso SEAP Cádiz, 24/ Mayo/ 2013
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- José Francisco Méndez Romero
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1 IMPORTANCIA DE LA EVALUACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE CK19 EN BIOPSIAS DE CÁNCER DE MAMA EN PACIENTES SOMETIDAS A ESTUDIO DEL GANGLIO CENTINELA MEDIANTE OSNA Dr. Felip Vilardell Hospital Universitari Arnau de Vilanova, Lleida Congreso SEAP Cádiz, 24/ Mayo/ 2013
2 INTRODUCCIÓN El análisis del ganglio centinela (GC) mediante técnica de One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA) es un procedimiento molecular cada vez más usado para el estadiaje intraoperatorio de la axila en pacientes con cáncer de mama. Se basa en la amplificación y cuantificación de RNAm de citoqueratina 19 (CK19). Casi todos los carcinomas de mama expresan esta proteína, pero se ha reportado pérdida de su expresión en un 6% de casos.
3 EXPRESIÓN N DE CITOQUERATINAS EN CÁNCER C DE MAMA
4 Mayo, año 2000 CLASIFICACIÓN MOLECULAR DEL CÁNCER C DE MAMA (microarrays de c-c DNA): - Luminal A y B - Her-2 - Basal-like
5 FENOTIPO LUMINAL vs BASAL ONCOLOGY. Vol. 22 No. 11 NATIONAL BREAST CANCER AWARENESS MONTH Understanding and Treating Triple-Negative Breast Cancer By CAREY ANDERS, MD Assistant Professor
6 INMUNOFENOTIPOS DEL CÁNCER DE MAMA Luminal A: ER + o PR +, Her-2 Luminal B: ER + o PR +, Her Fenotipo Her-2: ER - y PR -,, Her-2/ 2/neu + Fenotipo Triple-negativo: ER -,, PR -,, Her-2 Basal-like :: Asociado a expresión n de EGFR y p53 No Basal
7 El método OSNA amplifica el RNA mensajero de la citoqueratina 19 mediante un procedimiento isotérmico, específico y sensible denominado RT-LAMP (Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification). El progreso de la amplificación se monitoriza a tiempo real.
8 OSNA EN ESTADIAJE AXILAR DEL CÁNCER DE MAMA Mediante OSNA se determina la carga tumoral total (TTL( TTL) ) (número de copias de mrna de CK19). Los valores de corte son los determinados por Tsujimoto et al.. en 2007, a partir de un estudio sobre 106 ganglios linfáticos.
9 OSNA EN ESTADIAJE AXILAR DEL CÁNCER C DE MAMA < 250 copias mrna CK19 µl: Células aisladas copias mrna CK19 µl: micrometástasis (máx. 2 mm) > 5000 copias mrna CK19 µl: macrometástasis Tsujimoto et al; 2007
10 INTRODUCCIÓN N (2) En nuestro centro, el análisis del GC mediante OSNA se complementa con improntas citológicas. De 450 casos de carcinoma de mama estadiados mediante OSNA e impronta durante un periodo de 2 años, en un caso se objetivó una metástasis en la impronta del GC que no fue detectada mediante OSNA: A partir de ese caso se ha comprobado sistemáticamente el nivel de expresión de CK19 en todas las biopsias diagnósticas de cáncer de mama. Si la CK19 es negativa en la biopsia, el análisis del GC se realiza mediante técnicas patológicas convencionales. En este estudio hemos valorado la frecuencia y el perfil molecular de los carcinomas de mama CK19 negativos en tres series de casos. A la vez hemos buscado una posible correlación entre el nivel de expresión de CK19 en el carcinoma primario y el número de copias de RNAm de CK19 hallado en el GC.
11 OBJETIVOS 1. Determinar la frecuencia de carcinomas CK19 - en cada uno de los cuatro inmunofenotipos del cáncer de mama. 2. Valorar si la evaluación n de CK19 en la biopsia puede ayudar en la decisión n de usar OSNA u otras metodologías patológicas convencionales para el estudio del GC. 3. Determinar si existe correlación n entre el nivel de expresión n de CK19 en el tumor primario y el número n de copias de mrna de CK19 detectadas en el GC mediante OSNA.
12 MATERIAL Y MÉTODOSM Tres series de casos: Serie prospectiva de 197 biopsias consecutivas de cáncer de mama, incluyendo 182 carcinomas ductales NOS, 6 carcinomas lobulillares y 9 pertenecientes a otros subtipos histológicos. Serie retrospectiva de 41 carcinomas de mama con fenotipo triple negativo resecados quirúrgicamente. rgicamente. Serie retrospectiva de 68 pacientes, cuyos GCs fueron positivos para metástasis mediante técnicas t convencionales realizadas con anterioridad a la implantación n del OSNA.
13 MATERIAL Y MÉTODOS M (2) Se realizó estudio del GC mediante OSNA e improntas en 111 pacientes de la primera serie. Se determinó el inmunofenotipo y la expresión de CK19 en las tres series de tumores mediante inmunotinción de ER, PR, Ki-67, HER2 y CK19 (Dako( ). Los tumores con fenotipo triple negativo fueron caracterizados como tipo basal o no basal mediante inmunotinción para CK5/6 y EGFR (Dako( ). Para los análisis estadísticos sticos se utilizó un software SPSS. Las correlaciones clínico nico-patológicas fueron analizadas mediante tablas de contingencia y el test de X2.
14 RESULTADOS Serie prospectiva: Se verificó CK19 en 197 de 202 casos: Se halló pérdida de expresión de CK19 en 6 (3,5%) casos: 2 (3,5%) carcinomas de mama con fenotipo luminal A 3 (2,9%) carcinomas con fenotipo luminal B 1 (4,2%) carcinomas triple negativos. No se halló pérdida de expresión de CK19 en ningún carcinoma Her-2. En un caso de carcinoma luminal CK19 - : Se detectó mediante criosección una macrometástasis de 9 mm en el GC, en la que mediante inmunotinción posterior para CK19 se observaron células aisladas CK19 +. Una inmunotinción posterior de CK19 sobre secciones de la pieza quirúrgica del correspondiente tumor primario mostró algunas clonas CK19+ no representadas en la biopsia diagnóstica.
15 a) b) c) d) e) a) CK19 en un carcinoma de mama luminal A en el que se observan escasos grupos celulares con expresión de dicha citoqueratina b) y c) Ganglio centinela correspondiente en el que se observa una macrometástasis de 9 mm de diámetro máximo (H&E y CKAE1/AE3, magnificación original 40 y 100 respectivamente d) y e) Inmunotinción de CK19 del mismo ganglio centinela en la que se observan escasos grupos celulares metastásicos con expresión de CK19 (magnificación original 40 y 100 respectivamente).
16 RESULTADOS (2) Serie retrospectiva de 41 carcinomas triple negativos: ningún tumor CK19 -. Serie retrospectiva de 68 pacientes GC + diagnosticados con anterioridad al OSNA: Un caso con macrometástasis en el GC que fue CK19 -, así como el correspondiente tumor primario.
17 Pruebas de Pearson y de Spearman: La correlación entre la expresión de CK19 en los carcinomas primarios y el número de copias de RNAm de CK19 en los correspondientes ganglios centinelas es cercana a cero, y no resulta estadísticamente significativa en ningún caso.
18 CONCLUSIONES Puede hallarse pérdida de expresión de CK19 en aproximadamente un 3,5% de carcinomas de mama, incluyendo tumores con fenotipo luminal. Se halló un caso con expresión heterogénea de CK19 en el tumor primario, en el que solamente escasas células de la macrometástasis en el GC eran CK19+. El estudio del GC hubiera resultado impreciso, probablemente células aisladas, si se hubiera optado por la técnica OSNA en ese caso. Un caso con macrometástasis en el GC en la serie retrospectiva anterior a la técnica OSNA, en la que tanto la metástasis como el tumor primario fueron CK19 -.
19 CONCLUSIONES La expresión de CK19 debe ser valorada sistemáticamente en todos los carcinomas de mama para decidir el método de estadiaje axilar más adecuado.
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