CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA Y MOLECULAR DE LOS LINFOMAS NO HODGKINIANOS ASOCIADOS AL SIDA A TRAVÉS DE TÉCNICAS DE TISSUE MICROARRAYS

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1 CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA Y MOLECULAR DE LOS LINFOMAS NO HODGKINIANOS ASOCIADOS AL SIDA A TRAVÉS DE TÉCNICAS DE TISSUE MICROARRAYS Investigador principal: José Luis Mate Sanz Centro: Hospital Universitari Germans Trias i Pujol Duración: 3 años MEMORIA FINAL 1. Resumen Objetivos - Caracterizar en 100 LDCBG relacionados con el SIDA, los perfiles de expresión de oncoproteínas, moléculas de diferenciación fenotípica y reguladores del ciclo celular y de la apoptosis. - Caracterizar, en un grupo control de 100 LDCBG no inmunodeprimidos, los perfiles de expresión de oncoproteínas, moléculas de diferenciación fenotípica y reguladores del ciclo celular y de la apoptosis. - Analizar los diferentes patrones de expresión, determinando las homologías y las diferencias entre los LDCBG correspondientes a los enfermos con y sin SIDA. 1

2 - Analizar la significación pronóstica de las oncoproteínas, moléculas de diferenciación fenotípica y reguladores del ciclo celular y de la apoptosis. Diseño, metodología Se trata de seleccionar de las bases de datos de los servicios de Anatomía Patológica y Hematología, todos los casos susceptibles de ser incluidos en el proyecto, empleando protocolos de recogida de datos con criterios predeterminados de inclusión y exclusión. De los casos seleccionados se revisarán las muestras tisulares almacenadas en los archivos de Anatomía Patológica, valorando la disponibilidad de tejido para llevar a cabo las técnicas de laboratorio. A partir de las muestras seleccionadas se construirán matrices tisulares (tissue microarray) con muestras representativas de los linfomas y controles para estudiar con técnicas de inmunohistoquímica la expresión de unas 70 moléculas reguladoras del ciclo celular y la apoptosis, oncoproteínas y marcadores de diferenciación fenotípica. 2. Resultados De todos los casos estudiados se han seleccionado, en primer lugar, todos aquellos de los que se han podido analizar los datos histológicos, inmunofenotipo completo, marcadores de ciclo celular, apoptosis y expresión de los virus de Epstein-Barr y HHV8, para poder clasificar cada tumor en función del patrón fenotípico, la actividad proliferativa y la presencia de virus. En total, se han seleccionado 152 casos (45 VIH positivos, 107 VIH negativos). Los datos más relevantes se comentan a continuación. En la tabla 1 se agrupan los tumores en función de si su repertorio inmunofenotípico (CD10, BCL6, MUM1, CD138, VS38c, etc.) es característico de un origen de centro germinal o no (célula B activada u otras). El test de 2

3 chi-cuadrado de Pearson no ha sido significativo (p=0,882) y, como puede observarse, los porcentajes de linfomas con diferenciación de centro germinal son similares, independientemente de si se trata de enfermos con SIDA o no. Este resultado debe destacarse, ya que ofrece respuesta a uno de los objetivos del presente proyecto, de tal manera que no parecen existir grandes disparidades en cuanto a la diferenciación de centro germinal entre los linfomas difusos de células grandes, independientemente de que se trate de un enfermo con o sin SIDA. Tabla 1. Resultados de los patrones fenotípicos VIH No HIV Total Centro germinal No centro germinal Total Dentro del grupo de linfomas que no son de centro germinal, llama la atención la mayor frecuencia de linfomas con diferenciación de plasma celular entre los enfermos con SIDA, alcanzando la significación estadística con el test exacto de Fisher (p<0,001). Tabla 2. Diferenciación de plasma celular VIH No HIV Total Diferenciación de plasma celular Sin diferenciación de plasma celular Total

4 La presencia del virus de Epstein-Barr por técnica de hibridación in situ e inmunohistoquímica (tabla 3) es más probable estadísticamente entre los linfomas de enfermos con VIH (p=0,001, chi-cuadrado de Pearson). Tabla 3. Presencia del virus de Epstein-Barr VIH No HIV Total EBER+ (VEB) EBER- (VEB) Total casos No se ha hallado relación estadísticamente significativa entre la presencia del virus de Epstein-Barr y la diferenciación de centro germinal (p=0,325). Por lo que respecta al virus HHV8, sólo se ha demostrado su presencia en un único caso que corresponde a un enfermo VIH positivo. Este aspecto se ha investigado no sólo con técnicas de inmunohistoquímica a través de anticuerpos anti-lana-1, sino también con técnicas moleculares a través de PCR y amplificación del gen que codifica la proteína LANA-1. Otros marcadores de ciclo celular y apoptosis no han mostrado ninguna asociación significativa ni a patrones fenotípicos concretos ni a la presencia del virus de Epstein-Barr o VIH. En la tabla 4 se relacionan las diferencias más notables entre los enfermos con o sin SIDA, por lo que respecta a los datos clínicos. 4

5 Tabla 4. Datos clínicos de los enfermos con linfoma Grupo VIH Grupo No HIV Valor de p ECOG p=0, Afectación extraganglionar p=0,002 0, > Estadio p=0,008 I, II 9 33 III, IV IPI p=0,009 0, , 4, Respuesta p=0,083 NO SÍ Como puede observarse en la tabla 4, el conjunto de enfermos con SIDA se diagnostican con mayor frecuencia en condiciones más desfavorables en cuanto a ECOG, afectación extraganglionar, estadio e IPI. Se han realizado los cálculos de las curvas actuariales para la supervivencia global (figura 1), la supervivencia libre de acontecimiento (figura 2) y la supervivencia libre de enfermedad (figura 3), conforme al método de Kaplan-Meier para algunos de los linfomas con y sin diferenciación de centro germinal. Y no se han obtenido diferencias 5

6 significativas en cuanto a los datos de supervivencia entre ambos grupos. Sin embargo, se observa una tendencia más favorable entre los linfomas con diferenciación de centro germinal, aunque, atendiendo a la pequeña dimensión de las muestras analizadas, resulta difícil formular conclusiones contundentes. Desgraciadamente, los problemas con la dimensión de la muestra han sido importantes al valorar variables de supervivencia y diferenciación de centro germinal en los subgrupos con SIDA y sin SIDA. Figura 1. Supervivencia global (método Kaplan-Meier) Figura 2. Supervivencia libre de acontecimiento (método Kaplan-Meier) 6

7 Figura 3. Supervivencia libre de enfermedad (método Kaplan-Meier) 3. Relevancia y posibles implicaciones clínicas de los resultados finales obtenidos En el presente proyecto se ha llevado a cabo una comparación exhaustiva entre los linfomas difusos de células B grandes (LDCBG) que se asocian a SIDA y los que se diagnostican en la población general sin inmunodepresión. Fruto de la caracterización biológica de los LDCBG asociados a SIDA, se extraen algunas conclusiones interesantes que se relacionan a continuación: - No existen diferencias estadísticas significativas en el número de LDCBG con diferenciación de centro germinal que se diagnostican en los grupos de enfermos con y sin SIDA. Los porcentajes de LDCBG con diferenciación de centro germinal para ambos grupos son aproximadamente de un tercio de los casos. Puesto que se ha asociado un mejor pronóstico a la categoría de los linfomas con diferenciación de centro germinal de la población no infectada por VIH, estos resultados sugerirían un comportamiento clínico favorable similar en el grupo de enfermos con SIDA. 7

8 - Es significativo el mayor número de casos de LDCBG con diferenciación de plasma celular que se diagnostican en el grupo de enfermos con VIH, representando aproximadamente el 10% de los casos. Los linfomas con diferenciación de plasma celular no se asocian a ninguna de las otras variables estudiadas, ni fenotípicas, ni virales, ni de oncoproteínas. Este aspecto abriría nuevas áreas de investigación para averiguar cuáles son las causas de las mencionadas diferencias. - Los LDCBG con presencia del virus HHV8 en la población de enfermos con SIDA son muy infrecuentes, de tal manera que las formas sólidas de linfomas de cavidades son anecdóticas. La investigación de HHV8 en linfomas posee una sensibilidad similar con técnicas de biología molecular y con inmunohistoquímica. El interés de este resultado es doble. Por una parte, nos da idea de la baja frecuencia de las formas tumorales de los linfomas de cavidades, íntimamente asociados a la presencia del virus HHV8. Por otra parte, confirma la negatividad para este virus entre los linfomas plasmablásticos de la cavidad oral, aspecto un tanto controvertido en la bibliografía. Desde un punto de vista práctico, no es necesario utilizar técnicas moleculares (más sensibles) para identificar la presencia del virus HHV8, ya que con las técnicas de inmunohistoquímica se obtiene una buena sensibilidad, sin falsos positivos. - Es significativa la mayor frecuencia del virus de Epstein-Barr entre los linfomas de los enfermos con SIDA. Este aspecto probablemente se relaciona con el estado de inmunodeficiencia intrínseca con el SIDA, pero asimismo aporta argumentos a favor del papel linfomagénico de este virus. Resulta necesario, por tanto, emprender trabajos de investigación adicionales para dar respuesta a estos aspectos. 8

9 4. Publicaciones Mate JL, Navarro JT, Ariza A, Ribera JM, Castella E, Junca J, Tural C, Nomdedeu JF, Bellosillo B, Serrano S, Granada I, Milla F, Feliu E. Oral solid form of primary effusion lymphoma mimicking plasmablastic lymphoma. Hum Pathol 2004;35: Ribera JM, Navarro JT. Linfomas en pacientes con infección por el VIH. Las cosas han cambiado para bien. Enferm Infecc Microbiol Clin 2004; 22: Navarro JT, Lloveras N, Ribera JM, Oriol A, Mate JL, Feliu E. The prognosis of HIV-infected patients with chemotherapy and highly active antiretroviral therapy is similar to that of HIV-negative patients receiving chemotherapy. Haematologica 2005; 90: José-Tomás Navarro, Josep-Maria Ribera, Albert Oriol, Blanca Xicoy, José- Luis Mate, Guillem Sirera, Natalia Lloveras, Fuensanta Millá, Evarist Feliu. Advanced stage is the best prognostic factor for survival in patients with systemic AIDS-related non-hodgkin lymphoma treated with CHOP and HAART. International Journal of Hematology (remitido para su publicación). 9

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