MA'I'ENALES Y METODOS

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2 d MA'I'ENALES Y METODOS l. Seleeción y estudio del comportamiento de las plantas madres. Teniéndose en cuenta las características agronómicas (calidad de Cuta, vigor, longevidad, época de producción), sanidad, productividad y edad & la planta (mínimo 15 años), se seleccionaron plantas candidatas en las zonas productoras de cítricos en nuestro país incluyéndose a: Boquerón (Chaco), Caazapá, Central, Coordillera, Itapúa, Paraguari y San Pedro; de &as plantas se retiraron varetas (yemas) que fueron utilizadas en las etapas de detecciófi de patógenos y Microinjerto de Apices Caulinares in vitro. 2. Establecimiento de un Banco de Gerrnoplasma En al Campo Experimental de la Facultad de Ciencias Agrarias (San Lorenzo) " fue establec un Banoo de Germoplasrna con las plantas seleccionadas injkhdose en Limón oso con que se han podido seguir observando el comportamiento de las plantas, además i ktr e- forma permanente con material vegetal para los estudios complementarios. ' A 3. Microinjerto de Apices Caulinares in vitro (MAC). El, MAC empleado como técnica de saneamiento de hs enfermedades fue realizado en condi iones de Laboratorio de la FCA a través de: a) la siembra in vitro del portaújerio Citra i ge Troyer (Citrus sinensis x Poncirus tsifoliata) que crecieron en condiciones de oscuri por 1$ &as aproximadamente; b) microinjerto & iipices caulinares in vitro & las especies selecc~onadas a través del uso de brotes nuevos obtenidos in vitro o in vivo. El ápice de rhmi fue colocado en un corte de T invertída del portainjerto; c) Las plantas resultantes fuerod injertadas lateralmente en portainjertos de L. Rugosos creciendo en casa de mallas antqdos. 4. Prfuebas biológicas y serológicas de las plantas resultantes. 1 A aoximadarnente cinco meses después de permanecer en casa de mallas las plantas fueran some 'das a pruebas & detección biológica en plantas indicadoras específicas para los patógenos estud ados: Virus de la Tristeza de los Cítricos - CTV (Lima de Mejico), Complejo de la Psorosis (Nar ja do Ceu, Pomelo Duncan y Mandarina Madame Vinous), Cachexia-Xiloporosis (Manwa Parsons Special y Tangelo Orlando), Viroide de la Exocortis (Cidro Etrog Arizona ). En el caso del CTV las plantas también fueron sometidas a Test Serológico de ELISA- DAS. 5. &ltiplicación & las plantas ceriificadas. Lps plantas que resultaron sanas del proceso fiieron mantenidas en un Lote Fundación en la FCA bajo invernadero de malla anti-áfidos. Igualmente se procedió a la multiplicación del mateha1 saneado con la formación de plantas yemeras, injertando en L. Rugoso que crecían en rnacekas plásticas en condiciones de invernadero con cobertura plástica y malla lateral anti&idos. Las demas resultantes de las brotaciones de éstas plantas fueron distribuidas a los viveristas selec~ionados y adiestrados para tal efecto.

3 RESULTADOS 1. SELECCIÓN DE PLANTAS MADRES EN LAS ZONAS PRODUCTIVAS Se han procedido a la selección & plantas madres en las diferentes zonas productivas &l país observando las características agronómicas, sanitarias y productivas en plantas aduitas, siendo retiradas de las mis- una vareta con la que se mjertason en el Banco de Gennoplasma de la FCA (San Lorenzo). A continuación se detallan las plantas seleccionadas por especie y según las zonas del país.(foto 1 y 2) CUADRO 1: VARIEDADES DE NARANJAS SELECCIONADAS POR ZONA. VARIEDAD ZONA ORIGEN EDAD CALDERON Mayor OTAÑO 27 años W. NAVEL Mayor OTAÑO 27 años CALDERON Mayor OTAÑO CRIOLLA 22 &os LIMA 22 años MBUYAPEY 32 años 23 años 32 años NATAL CAACUPE 6 ñios B AHIA CAACUPE 6 aftm VALENCIA CAACUPE 6 años W. NAVEL LA COLMENA 15 años WESTING C.A. LOPEZ 10 años FOLHA MURCHA C.A. LOPEZ 10 años

4 CUADRO 2: VARIEDADES DE LIMA ACIDA SELECCIONADAS POR ZONA. VARIEDAD ZONA ORIGEN EDAD SUTIL CHOFE 25 años SUTIL CHOFE 20 años TAHITI SAN LORENZO 22 años SUTIL BOQUERON IN3ERTO 15 años CUADRO 3: VARIEDADES DE MANDARINA SELECCIONADAS POR ZONA. CUADRO 4: VARIEDADES DE POMELO SELECCIONADAS POR ZONA. VARIEDAD ZONA ORIGEN EDAD CRIOLLO CHORE 22 años CRIOLLO CHORE 21 años CRIOLLO CHORE 27 años CRIOLLO PIE F'RANCO 25 años TEXAS RR BOQUERON 13 años R. BLUSH BOQUERoN 13 años MARSH SEED. BOQUERON 32 años GROSE W. S. BoQUERoN 13 años

5 CUADRO 5: VARIEDADES DE LIMON SELECCIONADAS POR ZONA / VARIEDAD ZONA ORIGEN EDAD EUREKA FRUST C. A U)PEZ 10 años 2. MICRO DE APICES CAULINARES IN VmO Empleando la técnica de MAC (foto 5) fuem injertados ápices obtenidos de planta ín vivo o varetas cultivadas ín vitro alcanzándose 23,55 % de prendimiento según se detalla en el Cuadro. CUADRO 6: RESULTADOS DEL MICRO MAC'. VARIEDAD (ORIGEN) N. W. NAVEL (ITAPUA) M. MURCOTT (ITAPUA) P. CRIOLLO (CAZAF'A) P. CRIOLLO (SAN PEDRO) P. GROSE WEISSE (CHACO) P. TEXAS RUBY RED (CHACO) P. MARSH SEEDLESS (CHACO) L. SUTIL (SAN PEDRO) M. Mcal. LOPEZ (FCA) N. LIMA () N. MBUYAPEY () N. CALDERON (ITAPUA) N. CRIOLLA () N. VALENCIA LATE (CAACUPE) N. BAHIA (CAACUPE) N. NATAL (CAACUPE) N. WESTING (C.A. LOPEZ) L. TAHITI (FCA) L.EUREKA FROST (C.A. LOPEZ) N. FOLHA MURCHA (C.A. LOPEZ) - NO MICROINJ. N" PRENDIM.

6 PLANTAS MAC 3. BANCO DE GERMOPLASMA Las variedades microinjertadas fueron colocadas en Casa de Mallas Antí-áfidos libre de vectores, con estrictas medidas fitosanitarias. Todas las variedades seleccionadas fueron injertadas y catalogadas en los viveros de la Chacra Experimental de la FCA 4. 'EST DE DETECCION DE LAS ENFERMEDADES CAUSADAS POR VIRUS Y VIROIDES. Los resultados obtenidos en los test biológicos y serológicos demostraron la existencia de enfermedades virósicas que causan daiíos a las plantaciones cítricas en las diversas zonas del país (foto 3 y 4) l 4.1. VIRUS DE LA TRISTEZA DE LOS CFTRICOS (CTV). El estudio de la enfermedad fue kalizado en las plantas seleccionadas así como en sus proximidades a fin de determinar la inci+cia del vinis. La detección fue realizada por Test Biológico en planta indicadora y Test Sed( jco de ELIS A. En el siguiente cuadro son detalladc los resultados del Test Serológico según las zonas de estudio. Cuadro 7: Resultados del Test de ELISA pa r el Virus de la Tristeza de los Cítricos ZONA ALTO PARANA BoQLERON CAAGUAZU CENTRAL COORDILLERA ITAPUA Pte. HAYES SAN PEDRO NO MUESTRAS PLANTAS CJCTV

7 4.2. VIROIDE DE LA EXOCORTIS A través del uso de la indicadora Cidra Etrog Arizona 861 S -1 se ha podido detectar un alto porcentaje de plantas infectadas. Así en la zona Central se ha encontrado al CEV en las variedades de Lima Tahíti y Naranja W. Nave1 seleccionadas, así como en varias plantas estudiadas en la zona. En la zona de Boqueron (Chaco) fue detectado el viroide en pomelos injertados sobre Citrange Troyer, donde se observó claramente el síntoma que fue confirmado pc el Test en la indicadora. También en las zonas de Caazapá, Paraguarí e Itapúa se detectaron caso de Exocoiltis COMPLEJO DE LA PSOROSIS Los patógenos de este grupo se encuentran ampliamente distribuidos en el país causando graves problemas en las plantaciones, principalmente en las zonas de Caazapá, Chaco y Central. El mayor inconveniente con estos patbgenos es que las plantas infectadas en muchas ocasiones no muestran síntomas visibles con lo que la enfermedad se disemina fácilmente. Este patógeno se halía asociado al CEV, siendo que en muy pocos casos se han encontrado posibles plantas infectadas. Las condiciones ambientales tal vez no resulten las más apropiadas para su expresión. 5. MULTIPLICACION DE LAS PLANTAS CERTIFICADAS Los resultados de los test de detección determinaron la existencia de clones libres de las enfermedades estudiadas las cuales fueron mantenidas en un Lote Fundación en Casa de Mallas anti-áfidos bajo condiciones estrictas de sanidad y nutrición. Paralelamente desde el año 1993 se procedieron a realizar Lotes de Multiplicación a objeta d bi-indar yemas certificadas a grupos de productores organizados y adiestrados para el manejo de las plantas sanas a quienes periódicamente les fueron entregadas yemas de las variedades disponibles, el trabajo de seguimiento a estos viveristas fue continuo a fm de observar el desarrollo del material certificado. La distribución de yemas abarcó las zonas de Mayor Otaño (Itapúa), Central, Coordillera, Itapúa, Caaguazú, Chaco (Boquerón) y Amambay.

8 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES Desde los inicios en 1992 hasta la fecha, el presente trabajo ha permitido la implementación de técnicas y métodos, desarrollados por primera vez en el país en la búsqueda de dar solución al grave problema existente con relación al desconocimiento del estado sanitario y el origen del material que esta siendo plantado. Así fueron seleccionadas especies adaptadas a las condiciones ecológicas de nuestro pais, lo cual es de vital importancia en un programa de mejoramiento, ya que mayor mal haríamos multiplicando masivamente especies de las que no conocemos su comportamiento agronómico, un ejemplo de ello tenemos con la variedad de Naranja Pera que fuera iníroducida al país por el Ministerio de Agricultura, en todos los cultivos observados en zonas productivas de Central, Caaguazu, Cordillera y Paraguar' la variedad presenta fruta de escaso desarrollo, pequeña para la venta y al consumo fresco, lo cual nos enseña que debemos tener alguna información básica local antes de diseminar variedades de htales que finalmente después de largos años de espera resultan un fracaso productivo. Durante los cuatro arios del proyecto y te hemos distribuido yemas de origen y condición sanitaria conocida en siete de la república tratando siempre de realizarla a través asocia~ión de agricult---g a fin de lograr un mayor impacto productivo en los cultivos fbtw ~uamos ampliando nuestro abanico de variedades y especies de cítricos para,a- mayores posibilidades productivas a los productores rurales. En el transcurso de estos años igualmente fueron oíi-ecidos cursos prácticos a productores y viveristas de forma a lograr un cambio en la mentalidad productiva de los mismos. Un caso paríicular representa el Chaco paraguayo donde se detecto una baja incidencia del CTV, esto podría ser aprovechado para muitiplicar especies de cítricos sensibles como las limas ácidas y los pomelos expresm'an todo su potencial genético. En esta región se debm'an introducir solamente cítricos libres de enfermedades para seguir conservándola como una de las de este patógeno en América.

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