PRACTICA DE LABORATORIO Nº 2- PARASITOLOGÍA GENERAL

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Inés Gil Aguilar
hace 8 años
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1 Universidad Central De Venezuela Facultad de Ciencias Escuela de Biología Departamento de Zoología Prof. Cristina Sanoja W. (Coordinadora). Semestre II-2012 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 2- PARASITOLOGÍA GENERAL Objetivos: Examen microscópico de la materia fecal. Reconocimiento de protozoarios intestinales parásitos del Orden Amoebida. Estudio morfológico comparativo entre formas vegetativas y quísticas de Entamoeba histolytica y Entamoeba coli. Estudio de Entamoeba gingivalis. Los seres humanos pueden ser colonizados por amibas que se clasifican en cuatro géneros distintos. Estos géneros son: Entamoeba, Endolimax, Iodamoeba y Dientamoeba. La única especie patógena para el hombre es la Entamoeba histolytica. Principalmente, los géneros se diferencian entre sí por la forma y estructura del núcleo, especialmente por la disposición de la cromatina (ADN) en su interior. DESCRIPCIÓN DE Entamoeba histolytica y Entamoeba coli: Entamoeba histolytica: amiba parásita del hombre, patógena. En la fase de trofozoito o forma vegetativa, el carácter más típico es su gran motilidad por la formación en rápida sucesión de pseudópodos alargados (digitiformes) en forma casi explosiva en una dirección. Este es un carácter muy importante para diferenciarla de E. coli. El tamaño de E. histolytica varia entre 10 a 40 µm en su eje mayor. Su ectoplasma (región periférica del citoplasma y más densa) es claro y hialino, en contraste con el endoplasma (región cercana al núcleo, menos densa) de aspecto granuloso. En el endoplasma se encuentran vacuolas digestivas, con frecuencia englobando eritrocitos fagocitados. No se encuentran vacuolas conteniendo bacterias. El núcleo es generalmente excéntrico y mide de 4 a 7 µm. En amibas móviles es por lo general invisible cuando se observa en heces recién emitidas, no obstante se hace visible a medida que el protozoario va perdiendo motilidad. La estructura cromática del núcleo solamente se evidencia en preparaciones coloreadas (hematoxilina férrica). Se observa entonces la membrana nuclear como una línea negra, delicada y fina, mostrando en su superficie interna pequeñas estructuras que corresponden a gránulos de cromatina en una sola hilera y de tamaño uniforme, separados por espacios muy pequeños, casi imperceptibles. El cariosoma o nucleolo (concentración de cromatina) por lo general se encuentra en el centro del núcleo y se observa como un pequeño punto negro. En ocasiones, en preparaciones muy bien coloreadas pueden observarse fibrillas entre el cariosoma y la membrana nuclear en forma de retículos. En la fase pre-quistica la E. histolytica pierde sus movimientos, tomando forma esferoidal u ovalada y su tamaño se reduce luego de expulsar todo el material fagocitado. La demarcación entre el ectoplasma y el endoplasma se hace menos acentuada. En la fase quística, esta amiba se presenta como corpúsculos esféricos y hialinos, encontrándose inclusiones en forma de bastones de extremos redondeados, denominados cuerpos cromatoides. Los núcleos, varían en número de 1 a 4 de acuerdo al grado de 7

Estudio morfológico comparativo entre formas vegetativas y quísticas de Entamoeba histolytica y Entamoeba coli. Estudio de Entamoeba gingivalis.

2 madurez del quiste y poseen las mismas características de los trofozoitos. Estos núcleos son invisibles en fresco pero se ponen de manifiesto cuando se tiñen con lugol o con hematoxilina y miden de 5 a 20 µm. Entamoeba coli: amiba comensal del ser humano, no patógena. En la forma de trofozoito es muy semejante a la E. histolytica, no obstante, presenta características que permiten diferenciar ambas en forma segura. La E. coli mide de 15 a 50 µm y la demarcación entre el endoplasma y el ectoplasma no es tan evidente como en la especie patógena. El endoplasma es mucho más granuloso y posee gran cantidad de vacuolas que engloban bacterias y levaduras, etc., pero jamás eritrocitos. A diferencia de E. histolytica los pseudópodos se forman de manera más lenta y son gruesos, más cortos y granulosos. En el trofozoito vivo, el núcleo es perceptible, a diferencia de E. histolytica, su forma es esférica, de membrana gruesa, estando su superficie revestida de gránulos de cromatina gruesos e irregulares. El cariosoma es mayor que en la especie patógena y se dispone excéntricamente, observándose con frecuencia gránulos de cromatina entre este y la membrana nuclear. La forma pre-quística de E. coli es muy semejante a la de E. histolytica, siendo los caracteres del núcleo los que permiten diferenciarlas. Los quistes miden de 15 a 30 µm, son comúnmente esféricos y según el grado de madurez del quiste contienen de 1 a 8 núcleos, semejantes al del trofozoito. Los cuerpos cromatoides son filamentosos con extremos astillados a diferencia de E. histolytica. Ambas especies habitan el intestino grueso. ACTIVIDADES: 1. Observe las preparaciones microscópicas de E. histolytica y E. coli. Haga un esquema (dibujo) de sus observaciones, identifique el estadío y las estructuras visibles. 2. Realice un examen de heces directo para diagnosticar la presencia de alguna de las especies de amibas estudiadas en la muestra suministrada por el docente. Dibuje, identifique, indique la fase (trofozoito, pre-quiste o quiste), describa el movimiento en caso de encontrar un trofozoito. 3. Coloque sobre un portaobjetos una gota de la preparación de amibas preservadas en formol y añada una gota de lugol. Observe en el microscopio, haga esquemas e intente identificar las especies de amibas observadas. 8

En la forma de trofozoito es muy semejante a la E. histolytica, no obstante, presenta características que permiten diferenciar ambas en forma segura. La E.

3 4. Basado en sus observaciones y en la literatura, complete los siguientes cuadros: Caracteres diferenciales entre E. histolytica y E. coli en su forma vegetativa. CARACTERES Entamoeba histolytica Entamoeba coli tamaño motilidad pseudópodos núcleos inclusiones citoplasmáticas acción patógena Caracteres diferenciales entre E. histolytica y E. coli en su forma quística. CARACTERES Entamoeba histolytica Entamoeba coli tamaño número de núcleos pared quística cuerpos cromatoides 5. Detección de Entamoeba gingivalis en el sarro dental. Siga las siguientes indicaciones: a) Coloque una pequeña cantidad de saliva en una placa de Petri. b) Empleando un palillo de dientes limpio, recolecte una pequeña cantidad del sarro dental ubicado entre sus dientes y las encías. c) Mezcle cuidadosamente el sarro con la saliva de la placa de Petri. d) Tome una pequeña cantidad con una pipeta Pasteur y móntela entre lámina y laminilla para examinarla en el microscopio óptico. e) Dibuje la Entamoeba gingivalis encontrada. Describa su movimiento. 9

coli en su forma quística. CARACTERES Entamoeba histolytica Entamoeba coli tamaño número de núcleos pared quística cuerpos cromatoides 5. Detección de Entamoeba gingivalis en el sarro dental.

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5 REINO: Protista SUBREINO: Protozoa PHYLUM: Sarcomastigophora SUBPHYLUM Sarcodina SUPERCLASE Rhizopoda CLASE Lobosea GENERO Modificado de Atlas of Medical Helminthology and Protozoology. Jeffrey & Leach

Rhizopoda CLASE Lobosea GENERO Modificado de Atlas

6 Trofozoitos y quistes de amibas del cólon humano TROFOZOITOS µm QUISTES Entamoeba histolytica Entamoeba coli Iodamoeba bütschii Endolimax nana 12

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