PAPEL DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO EN EL DIAGNÓSTICO DE SMD Y MM

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Margarita Castro Ortíz
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1 PAPEL DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO EN EL DIAGNÓSTICO DE SMD Y MM CITOMETRÍA DE FLUJO PARA HEMATÓLOGOS Mayo 2014 Patricia Rodríguez Domínguez Coordinadora de las Unidades de Citometría Banco Municipal de Sangre Laboratorio Clínico Blau citometria@blau.com.ve

Rodríguez Domínguez Coordinadora de las Unidades de Citometría

Síndromes Mielodisplásicos (SMD): definición Grupo heterogéneo de enfermedades clonales de células progenitoras hematopoyéticas (CPH) Diferenciación y maduración

2 Síndromes Mielodisplásicos (SMD): definición Grupo heterogéneo de enfermedades clonales de células progenitoras hematopoyéticas (CPH) Diferenciación y maduración anormal (DISPLASIA) uni o multilineal HEMATOPOYESIS INEFICAZ (MO normo o hipercelular) Riesgo de transformación a LEUCEMIA AGUDA Citopenias periféricas Adaptado de J.almeida

anormal (DISPLASIA) uni o multilineal HEMATOPOYESIS INEFICAZ (MO normo o

3 CLASIFICACIÓN OMS 2008 Vienna 2008 Workshop of the German Austrian Working Group for Studying Prognostic Factors in Myelodysplastic Syndromes (Annals of Hematology 2009)

Prognostic Factors in Myelodysplastic Syndromes

4 CITOMETRÍA DE FLUJO EN SMD UTILIDAD Diagnóstico Diferencial: - Descarte de LMA -Citopenias inmunes de origen incierto -Monocitosis reactiva de maligna Subclasificación Diagnóstica: -AR vs CRDM -RAEB (% de blastos ) INFORMACIÓN 1.- Enumeración de la cantidad de mieloblastos (%) 2.- Identificaciónn de fenotipos aberrantes en los mieloblastos 3.- Detección de característcas fenotípicas alteradas en la maduración de neutrófilos, monocitos y serie eritroide. 4.- Scoring tanto del número como del grado de la anormalidad fenotípica identificada. Loken et al, Leuk Res, 2007

- Identificaciónn de fenotipos aberrantes en los mieloblastos 3.

5 SMD: CÉLULAS INMADURAS MIELOIDES Cytometry Part B (Clinical Cytometry) 78B: (2010) Clin Lab Med 27 (2007)

6 SMD:FENOTIPOS ALTERADOS - Maduración de la línea granulocítica (neutrófilo): Disminución del SSC (hipogranular) Expresión de CD10(L), CD7, CD19, CD56, CD64, CD34,CD45(L), CD33- Patrones para CD11b/CD13, CD16/CD13, CD15/CD10 Loken et al, Leuk Res, 2007

CD10(L), CD7, CD19, CD56, CD64, CD34,CD45(L), CD33- Patrones

7 SMD:FENOTIPOS ALTERADOS Células de la línea monocítica: Porcentaje de Células Relación CD36/CD14 Expresión decd13 y CD33 Expresión of CD56, Patrón de CD11b/HLADR Precursores Eritroides: Patón alterado de CD71 /CD235a Expresión Disminuída de CD71,CD36, Aumento de % de Precursores CD117+ Precursores Linfoides disminuidos o ausentes

CD11b/HLADR Precursores Eritroides: Patón alterado de CD71 /CD235a Expresión

8 SERIES ERITROIDE Y MONOCÍTICA Precursores Monociticos Monocitos Serie eritroide MON CD45-PerCP CD45-PerCP CD56 PE CD56-PE Adaptado Dr Orfao

10 CONCLUSIONES La CF es una herramienta con utilidad potencial en el diagnóstico y pronóstico de los SMD El grupo consenso de la ELN está haciendo una gran labor para recaudar todos los requerimientos técnicos necesarios para la validación y unificación de criterios por CF para la aplicación diagnóstica de los SMD en la práctica clínica. La meta no solo es la implementación de un sistema de puntos (score) para el diagnóstico, sino pronóstico. La CF superará su papel actual complementario y será parte integral del diagnóstico.

criterios por CF para la aplicación diagnóstica de los SMD en la práctica clínica.

11 CITOMETRÍA DE FLUJO EN MIELOMA MÚLTIPLE

Diferenciación con : SLPC (MW) GMSI / MM / LACP : -Enumeración de las células plasmáticas malignas -Fenotipos

12 APLICACIONES DE LA CF EN MM VALOR DIAGNÓSTICO: Discriminación entre plasmocitosis monoclonal y una proliferación policlonal reactiva. Diferenciación con : SLPC (MW) GMSI / MM / LACP : -Enumeración de las células plasmáticas malignas -Fenotipos aberrantes asociados a cada trastrorno VALOR PRONÓSTICO Cuantificación de las CPM en MO y circulantes CP normales en MO Presencia o Ausencia de Ags en la CP MANUAL DE MANEJO EN EL MIELOMA MÚLTIPLE MONITORIZACIÓN: EMR

13 APLICACIONES DE LA CMF EN MM VALOR DIAGNÓSTICO: - ENUMERACIÓN DE LAS CÉLULAS PLAMÁTICAS MALIGNAS - MO de mala calidad (hemodilución) (primera mx) - Microagregados de CP - Fragilidad - Adhesión al hueso,membranas basales y lipídicas de las vesículas. FENOTIPOS ABERRANTE DE LA CPM:

(primera mx) - Microagregados de CP - Fragilidad - Adhesión al

14 FENOTIPO DE CPM: Infra-expresión NORMAL MM CASOS

15 Sobre-expresión: CD56/CD28 NORMAL MM CASOS Asincronismo: CD20/ CD117

16 CP NORMALES VALOR PRONÓSTICO Y DX DIFERENCIAL GMSI / MMS VS Compartimiento de CP Totales Mo % CP Malignas % CP Normales >5% CPN /% CP Totales MM Blood. 2009;114:

17 VALOR PRONÓSTICO: Presencia o Ausencia de Ags AG PRESENCIA AUSENCIA PRONÓSTCO CD19 X MALO CD27 X BUENO CD28 X MALO CD117 X BUENO CD81* X MALO β2micro X BUENO CD45 X MALO Mateo G et al. J Clin Oncol 2008 Raja K; BJH * Paiva B, Gutiérrez NC et al.leukemia 2012

BUENO CD81* X MALO β2micro X BUENO CD45 X MALO Mateo G et al.

18 VALOR PRONÓSTICO Cuantificación de CPM circulantes 1 SG disminuye según incrementa la cifra de CPs en sangre. Está, aún, bajo investigación Contenido de ADN y ciclo celular: La hiperdiploidía de ADN se encuentra asociada a una mejor evolución clínica 2 Análisis del ciclo celular por CMF : >3% de CPs en la fase de síntesis (fase S) se asocian con peor pronóstico y es un parámetro independiente de supervivencia en pacientes con MM 3. (1) Yuan C et al, Hematology /Rev Hematol Mex (2) Rawstron et al, EMN consensus, Haematologica, 2008 (3) Paiva et al, The American Journal of Pathology,2012,

del ciclo celular por CMF : >3% de CPs en la fase de síntesis (fase S) se asocian con peor pronóstico y es un parámetro independiente de supervivencia

19 MONITORIZACIÓN: EMR Varios estudios muestran los resultados de EMR, como un factor predictivo independiente de progresión de enfermedad, de evaluación del tratamiento y con una utilidad potencial en el futuro para establecimiento de una terapia individualizada SOBREVIDA DE ACUERDO A LA EMR POR CMF DESPUÉS DE 3 MESES DE TSCA (n:295) EMR (-) :125 EMR (+): 170

una utilidad potencial en el futuro para establecimiento de una terapia individualizada

20 CONCLUSIÓN El inmunofenotipo por la técnica de CMF se ha consolidado como un herramienta indispensable de valor no solo diagnóstico sino pronóstico y de monitorización del MM.

21 GRACIAS POR SU ATENCIÓN PAPEL DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO EN EL DIAGNÓSTICO DE SMD Y MM Lic. Patricia Rodríguez Domínguez patirod70@yahoo.com citometria@blau.com.ve

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