Jornada técnica: AGUAS: TENDENCIAS Y NOVEDADES EN EL CONTROL MICROBIOLÓGICO Metodologías rápidas para los análisis microbiológicos de aguas

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1 Jornada técnica: AGUAS: TENDENCIAS Y NOVEDADES EN EL CONTROL MICROBIOLÓGICO Metodologías rápidas para los análisis microbiológicos de aguas Sra. Mar Borreguero. Responsable técnica de 3M-Sterilization & Food Safety Sra. Cristina Muchart. Responsable del Dpto. Marketing, Bioser, S.A. BARCELONA, jueves 20 de febrero de 2014

2 Solución 3M Petrifilm

3 Qué es un Petrifilm TM? - Medio liofilizado - Incluyen los nutrientes necesarios para el microorganismo y un gel soluble en agua fría Film plástico Adhesivo +indicador Gel soluble en agua fría Nutrientes Adhesivo Plástico

4 Beneficios de la Placa 3M Petrifilm Aumento de productividad Un estudio realizado en 292 plantas de alimentación demonstró un aumento de la productividad de los técnicos en un 80% (pruebas por hora), ahorrando una media de 3,7 horas por día. Al reducir el tiempo del técnico puede realizar otras actividades tales como más muestreos u otros controles para programas APPCC Mayor coherencia Fórmula que elimina la variabilidad al comparar con el agar. Reduce la variabilidad: técnico a técnico, turno a turno, planta a planta Requiere menos espacio En la incubadora, en el frigorífico, en el almacén Menos residuos y consumo de energía 50 Placas de 3M Petrifilm Agua vs. 50 plas Petri de agar

5 Cómo se utiliza un Petrifilm TM? 1. Inocular 2. Incubar 3. Interpretar Con filtro o directa

6 Placas 3M Petrifilm Aqua Descripción: Cuatro placas 3M Petrifilm Aqua para el análisis de muestras de agua: Heterotrophic Count Plate (AQHC) Coliform Count Plate (AQCC) Enterobacteriaceae Count Plate (AQEB) Yeast & Mold Plate (AQYM) Se utiliza para las pruebas de agua embotellada, agua para ingredientes y proceso / agua de enjuague en plantas de bebidas o alimentos. Se utiliza con filtros de membrana y técnica de siembra directa Mayor productividad con los mismos recursos humanos Filtro de membrana que se coloca en la placa Petrifilm Imagen del filtro de membrana con unidades formadoras de colonias Segmentos de la industria: Plantas de agua y refrescos embotellados Otras plantas de alimentos y bebidas que hacen pruebas de aguas Beneficios: La eficiencia en la mano de obra aumenta un 80% frente a agar en polvo. Una mayor uniformidad de resultados frente a agar en polvo Menos espacio en el frigorífico, incubadora, y menos residuos Mayor vida útil y el riesgo de contaminación más bajo en comparación con las placas de agar.

7 Métodos de análisis de aguas - Tradicional Embudo reutilizable ~100mL en el embudo del filtro Conduzca el agua a través del filtro via vacío Retire con cuidado el filtro de embudo Coloque el filtro en el disco de agar (o disco con medio cultivo ) Incubar Leer & Registrar Embudo desechable ~100mL en el embudo del filtro Conduzca el agua a través del filtro via vacío Retire embudo y separar taza Añadir medio fluido para filtrar unidad embudo Incubar Leer & Registrar 1mL verter en placa Preparar el Medio 1mL en la placa Petri Verter Agar Colocar Incubar Leer & Registrar

8 Métodos de análisis de aguas - Petrifilm TM Embudo reutilizable ~100mL en el embudo del filtro Conduzca el agua a través del filtro via vacío Retire con cuidado el filtro de embudo Coloque el filtro en el disco de agar (o disco con medio cultivo ) Incubar Leer & Registrar Embudo desechable ~100mL en el embudo del filtro Conduzca el agua a través del filtro via vacío Retire embudo y separar taza Añadir medio fluido para filtrar unidad embudo Incubar Leer & Registrar 1mL verter en placa Preparar el Medio 1mL en la placa Petri Verter Agar Colocar Incubar Leer & Registrar

9 Placas 3M Petrifilm para análisis de agua Placas 3M Petrifilm Aqua para recuento: (AQHC) Heterotrófico (AQCC ) Coliformes (AQEB) Enterobacterias (AQYM) Mohos y Levaduras

10 Instrucciones uso del Producto Resultados de Validación Resultados de Verificación 3M

11 Placa 3M Petrifilm Agua Uso Filtración por Membrana 1) Hidratación de la placa con agua estéril Placa AQHC Levante la película superior y vierta 1 ml de hidratante Baje la película superior; presione el aplicador para distribuir el hidratante. Placas AQCC, AQEB Levante la película superior y vierta 1 ml de hidratante. Deslice la pelicula superior; presione el aplicador para distribuir el hidratante. Esperar por lo menos 60 minutos a que solidifique el gel. Protéjalas de la luz y manténgalas refrigeradas por un máximo de 7 días. 2) Filtre la muestra de agua a través de un filtro de membrana 3) Coloque el filtro en la placa hidratada. 4) Incube las placas cara arriba Levante la película superior de la placa hidratada. El gel y nutrientes están en la película superior Coloque la membrana en la pelicula de fondo de la placa. Baje la película superior. Presione suavemente para asegurara contacto uniforme y eliminar burbujas. Nota: las placas AQYM (Mohos y Levaduras) se hidratan con 1 ml después de colocar el filtro, no antes.

12 Placa 3M Petrifilm Agua Uso Filtración por Membrana Placas AQYM (Mohos y Levaduras): 1) Filtre la muestra de agua a través de un filtro de membrana 2) Levante la película superior, coloque el filtro en el centro de la placa 3) Con pipeta, vierta 1 ml de hidratante 4) Deslice la película superior y. distribuya el líquido usando el aplicador para Levaduras y Mohos 5) Incube las placas cara arriba

13 Placa 3M Petrifilm Agua Uso 1 ml Siembra Directa Placa para Recuento de Heterotróficos (AQHC): 1) Inocule la placa Levante la película superior, vierta 1 ml de muestra. Baje la película superior. Presione suavemente con el aplicador para asegurar distribución uniforme en la placa. 2) Incube

14 3M All Rights Reserved. Instrucciones uso del Producto Resultados de Validación Resultados de Verificación 3M

15 Resultados del funcionamiento en Laboratorios de Referencia: Protocolo 4 tipos de agua embotellada de 7 países 5 Géneros de Bacterias, 1 Levadura y 2 Mohos a 2 niveles diferentes de inoculación Después de 2 semanas Comparando con Métodos de Referencia SMEWW e ISO Recuento Heterotrófico - Filtro Recuento Heterotrófico Directo AQHC Recuento Coliformes Filtro AQCC Recuento EB Filtro AQEB Hongos y Lev. Filtro AQYM

16 Descripción del estudio 15 marcas de agua embotellada, dos lotes por marca (total 30 muestras) Tipo de Agua Marca País de Origen Purificada Nestle Pure Life Estados Unidos Purificada Aquafina Estados Unidos Purificada Dasani Estados Unidos Manantial tratada Trauth Dairy Estados Unidos Manantial tratada Ice Mountain Estados Unidos Manantial tratada Kroger Estados Unidos Manantial Natural Evian Francia Manantial Natural Jana Croacia Manantial Natural Fiji Fiji Manantial Natural Ty Nant Gales Manantial Natural Voss Flat Noruega Manantial Natural (Carbonatada) Voss Sparkling Noruega Manantial Natural (Carbonatada) Gerolsteiner Alemania Manantial Natural (Carbonatada) Apollinaris Alemania Manantial Natural (Carbonatada) Perrier Francia

17 Pruebas de Validación y funcionamiento Performance Testing Conducted at Q Laboratories (Cincinnati, OH USA) AOAC Validations AFNOR Validation HC CC EB - Plate Count Agar at 35C, 48hrs (SMEWW) - Yeast Extract Agar at 36C, 48 hrs (ISO) - Yeast Extract Agar at 22C, 72 hrs (ISO) direct plating only - 3M Petrifilm Aqua AQHC at 35C, 48hrs 3M Petrifilm Aqua AQHC at 36C, 48hrs and 22C, 72hrs Direct plating and membrane filtration - endo LES agar at 35C (SMEWW) - Tergitol TTC agar with Tergitol 7 at 36C (ISO) - 3M Petrifilm Aqua AQCC at 35C and 36C - VRBG agar at 36C - 3M Petrifilm Aqua AQEB at 36C - Plate Count Agar at 35C, 48hrs (SMEWW) - 3M Petrifilm Aqua AQHC at 35C, 48hrs - endo LES agar at 35C (SMEWW) - 3M Petrifilm Aqua AQCC at 35C - Yeast Extract Agar at 36C, 48 hrs (ISO) - Yeast Extract Agar at 22C, 72 hrs (ISO) - 3M Petrifilm Aqua AQHC at 36C, 48hrs and 22C, 72hrs - Tergitol TTC agar with Tergitol 7 at 36C (ISO) - 3M Petrifilm Aqua AQCC at 36C No hay regulaciones o métodos de referencia para pruebas de agua de Enterobacteriaceae. YM - Rose Bengal agar at 20C, 72 & 120 hrs - apda agar at 25C, 72 &120 hrs - 3M Petrifilm Aqua AQYM at 20C and 25C, 72 & 3M All Rights 120 hrs Reserved. No hay regulaciones o métodos de referencia para pruebas de agua de Levaduras y Mohos.

18 Método de Estrés y cultivos Validación (Laboratorios Calidad) Bacterias Cultivo en caldo durante la noche, recuperación, lavado e inoculado del agua Agua inoculada de cero a temperatura ambiente por 2 semanas (starvation stress) Hongo y Levadura Se inocularon cepas de Levadura y Hongos en el agua y se dejaron equilibrar a temp. ambiente durante la noche Organismos Inoculados Organismos Pseudomonas aeruginosa ATCC Enterococcus faecium ATCC E. coli ATCC Escherichia coli ATCC Klebsiella pneumonia ATCC 4352 Enterobacter aerogenes ATCC Escherichia coli ATCC Klebsiella pneumonia ATCC 4352 Enterobacter aerogenes ATCC Candida albicans ATCC Penicillium sp. ATCC Paecilomyces sp. ATCC 1114 Método AQHC, SMEWW, ISO AQCC, SMEWW, ISO AQEB, VRBG AQYM, SMEWW, acidified PDA SMEWW: Métodos Standard para el exámen del agua y aguas residuales

19 Comparación del funcionamiento Heterotrófico 3M Petrifilm Aqua AQHC vs. Recuento placa de agar (100 ml filtrado; SMEWW.) Incubar a 35ºC durante 48h. 3M Petrifilm Agua AQHC vs. Agar extracto de levadura (directo; ISO 6222.) Incubar a 36ºC durante 44horas y 22ºC durante 68h. Coliforme 3M Petrifilm Agua AQCC vs. agar endo LES (100 ml filtrado, SMEWW.) Incubar a 35ºC por 24h. Confirmar con métodos SMEWW (LTB & BGLB) 3M Petrifilm Agua AQCC vs. agar Lactosa TTC (250 ml filtrado, ISO ) Incubar a 36ºC durante 24h. Confirmar con métodos ISO (oxidasa, indol) Enterobacterias 3M Petrifilm Aqua AQEB vs. agar VRBG (100 ml filtrado, método cliente.) Incubar a 36ºC por 24h. Levaduras y Hongos 3M Petrifilm Agua AQYM vs. agar Clorotetraciclina Rosa Bengala(100 ml filtrado; SMEWW.) Incubar a 20ºC; recuento a los 3 y 5 días. 3M Petrifilm Agua AQYM vs. agar acidificado Dextrosa de Papa (100 ml filtrado; método cliente.) Incubar a 25ºC; recuento a los 3 y 5 días.

20 Resultados del Funcionamiento - Resumen Recuento No inoculadas Recuentos bajos Recuentos altos Heterotrófico (AQHC) filtro Sin diferencia estasdística vs método standard Sin diferencia estasdística vs método standard Sin deferencia estadística vs. método standard Coliforme (AQCC) - filtro Mohos & levaduras (AQYM) filtro Sin diferencia estasdística vs método standard Sin diferencia estsdística vs método standard AQCC recuento superior que el método standard AQYM recuento superior que el método standard Enterobacterias (AQEB) - filtro Sin diferencia estasdística vs método standard Sin deferencia estadística vs. método standard 3M All Rights Reserved.

21 Resumen del funcionamiento Instrucciones uso del Producto Resultados de Validación Resultados de Verificación 3M

22 3M Petrifilm Agua Placa Estudios de Inclusividad y exclusividad Resultados satisfactorios en todas las placas

23 VIDEO

24 Alguna Pregunta?

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