UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA METROPOLITANA INGENIERIA EN QUIMICA LABORATORIO ANALISIS INSTRUMENTAL. INFORME N 1: ESPECTROFOTOMETRÍA UV VISIBLE INTRODUCCION
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- Vicenta Aguirre Correa
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1 UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA METROPOLITANA INGENIERIA EN QUIMICA LABORATORIO ANALISIS INSTRUMENTAL. INFORME N 1: ESPECTROFOTOMETRÍA UV VISIBLE INTRODUCCION En este laboratorio utilizaremos el método de la espectrofotometría con la cual analizaremos la concentración de analito de una muestra mediante una serie de pasos. Esta serie de pasos son muy importantes para el análisis de analito. Una de las técnicas que vamos a conocer para el previo análisis es la colorimetría (se formara el complejo del hierro (III) con el tiociananto); y el barrido espectral del complejo para la determinación de un max para un posterior calculo de tarnsmitancia de las muestras de concentraciones conocidas y el de una muestra problema con quien trabajaremos para encontrar su concentración. El calculo de concentración desconocida lo haremos a través del método de los mínimos cuadrados. PARTE TEORICA La espectrometría de absorción molecular se basa en la medida de la transmitancia T o de la absorbancia A de disoluciones que se encuentran en cubetas transparentes que tiene un camino óptico de b cm. Normalmente, la concentración C de un analito absorbente esta relacionada linealmente con la absorbancia. Un espectrómetro es empleado para medir la cantidad de luz que una muestra absorve. El instrumento opera por el paso de un haz de luz a través de la muestra y mide la atenuación de su intensidad al alcanzar al detector. Este haz de luz se compone de fotones. Cuando el fotón se encuentra con el analito, existe la posibilidad que el fotón sea absorbido por el analito. Esto significa una disminución en el numero de fotones en el haz de luz, así se reduce la intensidad de la radiación Electromagnética inherente. La absorción lumínica depende de la longitud de onda. Es por eso que la espectrofotometría usa luz monocromática. La luz monocromática es la luz en la cual todos los fotones tienen igual longitud de onda. Para analizar una muestra se debe determinar la absorbancia. El espectro de absorbancia muestra como la absorbancia de luz depende de la longitud de onda de la luz. El espectro es un gráfico de transmitancia versus longitud de onda y es caracterizada por la longitud de onda (max) a la cual la transmitancia se minimiza. Es posible también medir una espectro usando absorvancia, donde la (max) corresponde a la maximización de la absorbancia. Espectrofotometría: Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por una muestra, en función de la longitud de onda. Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros métodos analíticos de laboratorio son varias: es rápida, precisa, versátil, fácil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotómetros se han mejorado en precisión y versatilidad en los últimos años con los avances de tecnología, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de química analítica. Transmitancia: es la fracción de radiación incidente transmitida por el medio. Se representa con frecuencia 1
2 como porcentaje. T = P/P0 Donde P, P0 es la potencia radiante. Absorbancia: la absorbancia A de una medio se define por la ecuación A = log T = log (P/P0) = bc La absorbancia de un medio aumenta cuando la atenuación del haz de luz se hace mayor. Ley de Beer: la absorvancia es directamente proporcional al camino óptico b a través del medio y ala concentración c de la especie absorbente. Estas relaciones vienen dadas por: A = abc a: absortividad. Cuando la concentración se expresa en moles por litro y la longitud de la cubeta en centímetros, la absortividad se denomina absortividad molar y se representa por el símbolo. A = bc Curva de calibrado: es la relación grafica entre la señal analítica versus concentración. Barrido espectral: es la variación de la longitud de onda., necesario para la búsqueda de una max donde el analito absorve más luz. Sensibilidad analítica: este parámetro incluye la precisión en la medicion y se define por: = m/ : desviación estándar. Limite de detección: se define como la concentración del analito que da una señal significativamente diferente de la señal del blanco, SAm SAbl = 3bl. Objetivos. Aprender el uso de la técnica colorimétrica. Determinar el espectro de absorbancia de la muestra (max). Aprender la construcción de una curva de calibración. Determinar la concentración de una muestra problema a través de uan curva de calibración. Parte experimental. Materiales Reactivos Tubos de ensayo Solución de tiocianato 1M Gradillas de tubos Solución de hierro(iii) 5,0 *10 4 2
3 Espectrofotómetro UV vis Agua destilada Matraces aforados de 50 ml Ácido clorhídrico concentrado Pipetas volumétricas Cubetas para e espectrofotómetro. Procedimiento experimental. Se preparó 1L de una solución de Fe+3 de 5.0*10 4 M. Se preparó 2L de HCl al 1%. Se preparó 1L de una solución de SCN de 1M Curva de Calibración Se tiene que preparar a partir de la solución Fe+3 de 5.0*10 4 M (solucion stock; ss), las siguientes soluciones todas aforadas con HCl 1%. Solución A: 1 ml de ss, aforar a 50mL Solución B: 2 ml de ss, aforar a 50mL Solución C: 5 ml de ss, aforar a 50mL Solucion D: 10 ml de ss, aforar a 50mL Solución E: 15 ml de ss, aforar a 50mL Solución F: 20 ml de ss, aforar a 50mL Para sacar la concentración de cada solución ocupamos la formula: C1V1 = C2V2 C1 = C2V2 V1 Solución A: C = 5*10 4 M x 1 ml C= 1*10 5 M 50 ml Solución B: C = 5*10 4 M x 2 ml C= 2*10 5 M 50 ml Solución C: 3
4 C = 5*10 4 M x 5 ml C= 5*10 5 M 50 ml Solución D: C = 5*10 4 M x 10 ml C= 1*10 4 M 50 ml Solución E: C = 5*10 4 M x 15 ml C= 1.5*10 4 M 50 ml Solución F: C = 5*10 4 M x 20 ml C= 2*10 4 M 50 ml (A cada concentración mediremos el % de transmitancia donde sacaremos la transmitancia, absorbancia y luego lo graficaremos, todos estos detalles se encontraran en las próximas hojas) 2) Barrido de espectro. Se tomaron tres tubos de ensayos: Al 1 tubo se le agregó 5 ml de H2O + 5 ml SCN Al 2 tubo se le agregó 5 ml de Fe ml SCN Al 3 tubo se le agregó 5 ml de H2O+ 5 ml SCN Luego se le midió el % de Transmitancia a cada tubo con ditintas longitudes de ondas partiendo de 400 nm hasta 600 nm, de 10 en 10 como se ve a continuación: TUBO Nº1: 5 ml de H2O + 5 ml SCN Transmitancia: T = %Transmitancia 100 Absorbancia. A = Log T Longitud de onda % Transmitancia Transmitancia Absorbancia
5
6 6
7 TUBO Nº2: 5 ml de Fe ml SCN Transmitancia: T = %Transmitancia 100 Absorbancia. A = Log T Longitud de onda % Transmitancia Transmitancia Absorbancia
8
9 9
10 TUBO Nº3: 5 ml de Fe ml H2o Transmitancia: T = %Transmitancia 100 Absorbancia. A = Log T Longitud de onda % Transmitancia Transmitancia Absorbancia
11
12 12
13 Ocupamos la longitud de onda igual a 470 nm para medir el % de Transmitancia, en el espectrofotómetro, a distintas concentraciones ya calculadas en el punto 1), como se observa en la tabla y posteriormente lo graficamos. Concentración % Transmitancia Transmitancia Absorbancia
14 14
15 Medimos la transmitancia de la muestra problema Nº 3, dando un % de Transmitancia igual a 18. Por lo tanto la transmitancia es 0.18 y la absorbancia es TABLA DE MINIMOS CUADRADOS Solución (n) [ ] (Xi) A (Yi) Xi2 Yi2 Xi*Yi * * * * * * * * * * * * * *10 4 N=6 Xi= Yi= Xi2 = 7.55*10 8 Yi2= Xi*Yi= 15
16 3.741*10 4 Sensibilidad: Xi*Yi Xi*Yi = N Xi2 (Xi)2 N 3.741* * = *10 8 ( ) *10 4 = 2.868*10 8 = Y= mx+b b= Y mx b= Yi mxi N N b= * b= 4.45*10 3 Determinar C si A= = *C 4.45*10 3 C= 1.49*10 4 La concentración del muestra problema Nº 3 es 1.49*10 4 M Coeficiente de correlación (r): entrega el nivel de asociación lineal existente entre estas dos variables 16
17 Xi*Yi Xi*Yi r = N Xi2 (Xi)2 * Yi2 (Yi)2 N N 1.43*10 4 r = ( 2.868*10 8 * )1/2 r = r es aproximadamente igual a 1, eso significa que existe una asociación lineal perfecta. INTERPOLANDO 17
18 18
19 Cuestionario 1) Grafique transmitancia vs longitud de onda y absorbancia vs longitud de onda 19
20 20
21 2) Indique la finalidad del barrido de los espectros entre 400 y 600 nm El barrido de espectro entre los 400 y los 600 nm es debido que en ese rango de longitud de onda la luz es visible, su finalidad es encontrar el más adecuado para obtener un margen de error mínimo, es el valor en el cual la transmitancia presenta su punto mas bajo, por ende, en la absorbancia el punto mas alto. Indique y justifique Qué longitud de onda elegiría en determinaciones cuantitativas posteriores de hierro (III) usando este método? Se eligió la longitud de onda para el Fe+3 de 470 nm porque se obtuvo (experimentalmente). Se obtuvo la longitud mínima en el caso de transmitancia y la longitud máxima en el caso de la absorbancia, como se ve en los gráficos anteriores. 4) Grafique absorción vs concentración 21
22 5) Indique y justifique si se cumple la ley de Beer en los rangos de concentración dados en el práctico. La ley de Beer describe de forma correcta el comportamiento de absorción del medio que tiene esta concentraciones de analito, debido a que son concentraciones relativamente bajas, en este sentido, es una ley limite. Cuando nos encontramos con medio que contienen concentraciones de absorbente bajas, pero concentraciones altas de otras especies (electrolitos), ocurre que se altera la absortividad molar del absorbente por interacciones electrostática, este efecto se reduce mediante dilución. 6) Calcule el coeficiente de absortividad molar. El se calcula con el método de los mínimos cuadrados. La absortividad ya fue calculada anteriormente y su valor es: =
23 7) Grafique vs concentración 8. Proponga el procedimiento a seguir para determinar el porcentaje de hierro en una muestra por este método. Primero: debemos encontrar le longitud de onda máxima a través de un barrido de espectro. Segundo: realizar la curva de calibración entre la señal analítica y las concentraciones conocidas de muestras. Tercero: determinar la concentración de la muestra problema (desconocido Fe+3). 9. indique como podria determinar el % de hierro en una muestra por un metodo visual? Una técnica es la colorimetría que colorea al analito para hacerlo visible 23
24 frente a la luz UV visible. Con ella podemos determinar la concentración de hierro con la espectrofotometria. Visualmente, un método práctico es la volumetría, con la cual determinamos, con el cambio de color, un cambio de ph y a la vez de concentración. BIBLIOGRAFÍA Principios de Análisis Instrumental, Skoog Holler Nieman. Quinta edición. Editorial Mc Graw Hill. Página web: 24
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