Estadiaje molecular ganglionar por OSNA en pólipos malignos y carcinoma de colon precoz

Transcripción

1 Estadiaje molecular ganglionar por OSNA en pólipos malignos y carcinoma de colon precoz M. Cuatrecasas, R. Ortiz, JA. Bombí, D. Monblan, A. Martínez, T. Ribalta, M Pellisé, F. Balaguer, A. Castells, A. de Lacy Dra. Míriam Cuatrecasas Hospital Clínic Barcelona

2 Programa detección precoz CCR Primera ronda programa - Noviembre mayo 2011 Participación: personas (tasa de participación 43,8%) Test sangre oculta en heces positivo 6,1% 796 colonoscopias Detección: 47 carcinomas 316 adenomas de alto riesgo 134 adenomas de bajo riesgo

3 Pólipo maligno y CCR precoz Pólipo maligno:lesión polipoide clínicamente benigna, que el estudio histológico revela un adenocarcinoma infiltrante Puede tener invasión vascular metástasis ganglionar, no curable por endoscopia Carcinoma colorectal precoz: Adenocarcinoma que infiltra submucosa (pt1) Independiente de N1 N0 Polipoideo o sesil, no obstructivo, asintomáticos, hallazgo incidental / srceening Japanese Society for cancer of colon and rectum. Japanese classification of colorectal carcinoma. Tokyo 1997

4 Adenoma maligno Factores adversos o predictores independientes de metástasis ganglionar: Tumores de alto grado o pobremente diferenciados Invasión vascular Extensa invasión submucosa; Profundidad de invasión Margen de resección afecto o margen muy pequeño (recidiva) Tumor budding alto Localización Microambiente tumoral

5 Invasión Vascular CD 31

6 Resección curativa = márgenes de resección negativos Laterales Profundo

7 Clasificación Microscópica - Haggitt ptis Low-risk of LN metastases pt1 or submucosal invasión in sessile adenomas Haggitt RC, et al. Gastroenterology 1985; 89:

8 Clasificación Microscópica - Kikuchi without invasion = no LN metastases = Haggitt 1 = Haggitt 4 Risk of lymph node metastases 1-3% pt1 Risk of lymph node metastases 8% Risk of lymph node metastases 23% Kikuchi R, et al. Dis Colon Rectum 1995; 38:

9 Tumor budding en CCR Budding:presencia de células aisladas o en pequeños grupos de <5 células en el estroma del margen infiltrante del tumor Intensidad o gradación de budding: Puntuación o grado 1: <5 focos de budding 2: 5 a 9 3: : 20 Los tumores se dividen en 2 grupos según el número de focos de budding Se asocia a peor pronóstico y predice N1 en CCR precoz Ueno H, et al. Histopathology 2002 Prall F. Histopathology 2007 Betge J, et al. Ann Surg Oncol 2012

10 CK AE1/AE3 CK AE1/AE3

11 Objetivo del estudio Evaluar las presencia de metástasis ganglionares mediante método molecular OSNA en colectomías realizadas post-resección de adenomas de alto riesgo y en carcinomas de colon pt1n0 con HE

12 OSNA = One Step Nucleic Acid Amplification Ganglio Homogenización Centrifugación Amplificación Detección PCR Real-Time 5 min 1 min 16 min; 65 C

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14 OSNA: Nivel de corte Tamaño de metástasis CK19 mrna Macro-Metástasis Micro-Metástasis ITC // fondo copias/ µl 250 copias/ µl*

15 Pacientes 25 Adenocarcinomas de colon precoz (pt1n0) 21 adenomas malignos de alto riesgo 4 adenocarcinomas pt1 Colectomía parcial

16 Metodología Pieza colectomía en fresco Disección ganglios linfáticos en fresco (<50 ) Identificar tubo Ependorff y cassette con el mismo número Según tamaño del ganglio, sección central 1 mm o ½ ganglio para formol (HE) El resto del ganglio en el tubo de Ependorff, se guarda a -80C Análisis diferido con sistema OSNA según protocolo *Store a slice in case needed to IHQ CK19 analysis

17 Metodología Ganglios linfáticos aislados post-fijación en formol Identificar ganglios linfáticos residuales que no se han disecado en fresco Cortar sección central o ½ del ganglio para procesado histológico convencional Lymph nodes Se determinará el estadio ganglionar pn utilizando los cortes teñidos con H&E (fresco y post-fijación en formol) 1 x H&E *Store one slice in case needed to IHQ CK19 analysis 17

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19 Diagrama de flujo Fixation of a central section in formalin Study of a central section by H&E Resection of the surgical segment Identification of lymph nodes in fresh segments 1 mm central section Fixation of remaining segment in formalin Identification of residual lymph nodes Study of residual lymph nodes by H&E Freezing of rest of lymph node Study of the frozen nodes by OSNA

20 1 MM

21 Resultados 25 Adenocarcinomas de colon precoces (pt1n0) 21 adenomas malignos de alto riesgo 4 adenocarcinomas pt1 301 ganglios linfáticos en fresco (entre 4 y 23 ganglios) 91 post-fijación en formol (entre 1 y 10 ganglios) Todos los pacientes estadio pn0 con H&E OSNA: 11 pacientes con ganglios linfáticos positivos (44%) 7 pn1a 4 pn1b El nivel de invasión de la submucosa Haggitt, Kikuchi-no se relacionaba con los resultados de OSNA

22 Conclusiones El estadiaje molecular ganglionar con OSNA es muy sensible y demuestra la presencia de metástasis ganglionares no detectadas por HE en estadios muy precoces del carcinoma de colon El estudio molecular de los ganglios linfáticos permitirádeterminar aquellos pacientes con alto riesgo de recidiva, candidatos a tratamiento con quimioterapia adyuvante

23 positivo Muchas gracias!