ACCIÓN DE LOS INHIBIDORES COMPETITIVOS Y NO COMPETITIVOS SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

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1 ACCIÓN DE LOS INHIBIDORES COMPETITIVOS Y NO COMPETITIVOS SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA I. INTRODUCCIÓN Una propiedad característica de las enzimas es su sensibilidad a diversos reactivos químicos que reaccionan con grupos en la superficie de la proteína de lo que resulta la inhibición de la actividad catalítica. Existen sustancias cuya acción sobre una enzima dada se traduce en la disminución de la actividad. Estas sustancias pueden ser ácidos o bases fuertes, sales de metales pesados o la acción del calor, los cuales producen notables alteraciones de la estructura tridimensional de la molécula proteica que conduce a la desnaturalización. Aunque muchos inhibidores pertenecen a la clase de compuestos no fisiológicos y sólo tienen interés por su utilidad farmacológica potencial o como repelentes de insectos, otros inhibidores son compuestos normalmente presentes en la célula y funcionan como reguladores de la actividad enzimática. Los inhibidores enzimáticos se clasifican en 2 grandes grupos: reversibles e irreversibles, que se pueden distinguir en base a un criterio experimental. Si después de hacer actuar al inhibidor sobre la enzima, eliminamos el exceso del inhibidor, la enzima recupera su actividad original, se dice que el inhibidor es reversible. A la inversa si la enzima continúa inhibida después de eliminar el exceso del inhibidor, se dice que el inhibidor es irreversible. La inhibición reversible se clasifica en: inhibición competitiva reversible e inhibición competitiva irreversible. En la inhibición competitiva el inhibidor actúa por competencia si su acción inhibidora se revierte al aumentar la concentración del sustrato. El inhibidor se une reversiblemente con la enzima en el sitio que se debería unir el sustrato impidiendo por lo tanto la formación de complejo activo ES. De allí el nombre de competitivo, porque efectivamente, tanto el inhibidor como el sustrato compiten por el mismo sitio y tratan de desplazarse mutuamente de la enzima. Dentro de este tipo de inhibidores se incluyen sustancias que estructuralmente son muy parecidas al sustrato y que por lo tanto pueden ocupar el lugar que aquel ocuparía sobre la enzima. La inhibición no competitiva se caracteriza porque no puede ser revertida por un aumento de la concentración del sustrato. Ya que este último no puede desplazar al inhibidor unido a la enzima, Aquí el inhibidor se une a la enzima en otro sitio que no necesariamente es el mismo en el cual se une el sustrato. Por esta razón, la unión de este último con la enzima no es afectada por la presencia del inhibidor, pudiéndose formar entonces un complejo ternario ESI, que es catalíticamente inactivo y no pueden escindirse en productos de la reacción y complejo enzima inhibidor. Desde este punto de vista cinético, el Km no varía, pero la Vm disminuye. Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 1

2 Experimentalmente se puede demostrar si un inhibidor es o no competitivo al hacer reaccionar una enzima con su respectivo sustrato y un inhibidor; si el efecto del inhibidor se revierte al incrementar la concentración de sustrato entonces en base a estos resultados podemos deducir: - Que el inhibidor es de tipo competitivo. - Que es en el sitio catalítico de la enzima en donde actúa el inhibidor compitiendo con el sustrato. - Que el inhibidor es de estructura semejante al sustrato. II. OBJEIVOS - Demostrar los efectos inhibitorios del malonato y del HgCl2 valorando el viraje del color del 2,6-diclorofenolindpfenol. - Demostrar el efecto reversible del HgCl2, por adición de mayor concentración de sustrato y valoración final del viraje del color de 2,6-diclorofenolindofenol. III. MATERIALES Y REACTIVOS - Buffer fosfato 0,1 M ph 7,2 - Tubos d ensayo 13x100 mm - Succinato de sodio 0,1 M - Gradilla porta tubos - Succinato de sodio 0,5 M - Pipeta de 2 ml - 2,6-diclorofenolindofenol 30mg% - Pipeta de 1 ml - Malonato de sodio 0,1 M - Pipeta de 0,5 ml - Cloruro de mercurio 0,1 M - Pizeta 500 ml con agua destilada - Homogenizado hepático 10% - Bombilla propipeta. IV. DIAGRAMA EXPERIMENTAL - Armar el siguiente sistema: Componentes Tubos (ml) I II III IV V Buffer fosfato 0,1 M ph 7, ,3 1,3 1 Succinato de sodio 0,1 M - 0,2 0,2 0,2 - Succinato de sodio 0,5 M ,5 Cloruro de mercurio 0,1 M ,3 - Malonato de sodio 0,1 M - - 0,5-0,5 2,6-diclorofenolindofenol 30mg% Homogenizado hepático 10% Dejar en reposo por 30 minutos a temperatura ambiente. - Observar los resultados (cambio de color) en cada una de los tubos. - Anotar los resultados y luego agrega a los tubos II, III y IV lo siguiente: Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 2

3 Tubos (ml) Componentes II III IV Succinato de sodio 0,5 M - 0,5 0,5 Buffer fosfato 0,1 M ph 7,2 0, Dejar en reposo 15 minutos a temperatura ambiente. - Observar y anotar los resultados. V. RESULTADOS VI. DISCUSIÓN Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 3

4 VII. CONCLUSIONES VIII. BIBLIOGRAFÍA Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 4

5 ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 5