Trabajo Práctico Nº4: OBTENCIÓN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS CLÍNICAS DESTINADAS AL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO. (Lic en Enfermería y Lic en Obstetricia)

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1 Trabajo Práctico Nº4: OBTENCIÓN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS CLÍNICAS DESTINADAS AL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO. (Lic en Enfermería y Lic en Obstetricia) INTRODUCCIÓN La actividad que desarrolla el laboratorio de microbiología está orientada esencialmente al diagnóstico microbiológico de las enfermedades infecciosas. Una parte importante de esa actividad consiste en el aislamiento, la identificación y la determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos de los microorganismos causales de estas enfermedades. Otra parte importante de la actividad de un laboratorio de microbiología consiste en la detección de anticuerpos, antígenos y ácidos nucleicos en diversas muestras (sangre, líquidos estériles, orina, etc.). El organismo está constituido por áreas colonizables por diferentes tipos de microorganismos que constituyen la flora normal, y por áreas normalmente estériles. Dentro de las primeras encontramos: cavidad oral, piel, mucosas, uretra, vagina e intestino. Los sitios normalmente estériles son: sangre, vejiga, líquido cefalorraquídeo y líquidos de punción (pleural). Toma de muestra La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso que se pretende diagnosticar. Es necesario que la toma se efectúe en el sitio exacto de la lesión y lo más pronto posible. La recogida de la muestra deberá realizarse en condiciones de máxima asepsia, evitando contaminaciones ambientales del personal y del propio enfermo a la muestra y viceversa. Se debe recoger una cantidad de muestra adecuada para un análisis completo. En ocasiones una escasa cantidad de muestra puede ser la causa de falsos negativos. La muestra se debe recoger, siempre que sea posible, antes de iniciar cualquier terapia antimicrobiana. Cuando esto no es posible, se obtendrán justo antes de la administración de la dosis del antimicrobiano, o tras 48 horas de la retirada del mismo. La muestra debe transportarse en envases adecuados, con cierres a prueba de fugas. El envío al laboratorio de microbiología debe ser lo más rápido posible con objeto de asegurar la supervivencia de microorganismos de difícil crecimiento y de evitar el sobrecrecimiento de la flora normal.

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3 MUESTRAS Como reglas generales cabe indicar las siguientes:

4 1. Antes de recoger la muestra, considerar el riesgo/beneficio de la recogida de la muestra para el paciente. 2. La muestra debe transportarse en envases adecuados con cierres a prueba de fugas. La recogida de la muestra deberá realizarse en condiciones de máxima asepsia, evitando contaminaciones ambientales del personal y del propio enfermo a la muestra y viceversa. 3. La muestra debe etiquetarse con el nombre del paciente, el servicio solicitante, el tipo de muestra y la fecha de recogida. En determinados casos será importante precisar la hora de recogida. 4. Se recomienda que cada muestra se introduzca en una bolsa de plástico que a su vez se introducirá en otra donde se incluya el volante. Así se evita que los posibles derrames de la muestra invaliden el volante de petición. 5. Se debe recoger una cantidad de muestra adecuada a la petición. En ocasiones una escasa cantidad de muestra puede ser la causa de falsos negativos. 6. El material destinado a cultivo no debe estar en contacto con sustancias desinfectantes o anestésicas, siempre que sea posible. 7. La muestra se debe recoger, siempre que sea posible, antes de iniciar cualquier terapia antimicrobiana. 8. Se debe evitar, siempre que sea posible, el contacto de la muestra con microbiota normal del paciente, con el objeto de asegurar que la muestra refleje lo mejor posible el lugar de la infección. 9. El envío al laboratorio de microbiología debe ser lo más rápido posible con objeto de asegurar la supervivencia de microorganismos de difícil crecimiento y de evitar el sobrecrecimiento de la microbiota normal, acortar el tiempo de contacto con anestésicos locales o con otras sustancias con acción antimicrobiana utilizadas en la recogida de la muestra.

5 HEMOCULTIVO Obtención de la muestra Retirar los tapones externos de las botellas. Desinfectar los tapones de goma con la solución yodada, dejándolos secar al menos un minuto. Localizar por palpación la vena que se va a puncionar. Debe utilizarse una vena distinta para cada extracción. Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 5 cm de diámetro. Se comenzará por el centro y se irán haciendo círculos concéntricos hacia el exterior. Repetir el paso anterior pero con la solución yodada, dejándola secar durante un minuto. Extraer la sangre sin tocar en ningún momento el campo desinfectado. Si fuera necesario palpar nuevamente la vena se utilizarán guantes de goma estériles. Introducir la sangre en las botellas, en primer lugar la anaerobia, evitando que entre aire en la botella, con la jeringa en posición vertical. Mover las botellas para que la sangre y el medio de cultivo se mezclen. Rotular cada botella con el nombre del enfermo, día, hora de la toma y número de muestra enviada (1 ó 2). No tapar el código de barras de la botella. Volumen de la muestra En adultos, introducir en cada botella no menos de 10 ml de sangre ni más de 20 ml. En caso de neonatos y niños pequeños, es suficiente una cantidad de 01 a 5 ml, por cultivo. Relación sangre caldo de cultivo: 1/5 a 1/10. Número de muestras Dos extracciones (dos botellas de hemocultivos por extracción: aerobia y anaerobia) por paciente, previas al tratamiento antimicrobiano, utilizando lugares de venopunción diferentes. Cuando comienzan los escalofríos y está subiendo la fiebre, antes del pico febril. El intervalo entre las extracciones debe ser de 15 minutos, pero si la fiebre es continua, este intervalo puede acortarse hasta 5 minutos. ORINA Muestras aceptadas: Chorro medio Al acecho Punción proximal de sonda Punción suprapúbica Muestras rechazadas: Bolsa colectora Punta de sonda vesical Chorro medio: Adultos ambulatorios hospitalizados sin sonda y niños que controlan esfínteres Instrucciones a seguir: En caso de ser mujer colocarse tampón vaginal Higienizarse con jabón nuevo no antiséptico ni desinfectante Enjuagarse con agua recién hervida y enfriada No secarse Eliminar el primer chorro de orina para arrastrar la flora uretral Recolectar el chorro medio en frasco estéril de boca ancha y tapa a rosca

6 Una vez obtenida la muestra si no se procesa inmediatamente debe ser conservada en la heladera no más de 4 hs El paciente debe tener un tiempo de retención mínima de 3 hs Se deben conocer datos del paciente tales como: Edad Sexo Enfermedad de base Uso previo de antibióticos Instrumentación urológica y/o cirugía previa Antecedentes de infección urinaria Al acecho: población pediátrica que no controla esfínteres. Higienizar al niño como se describió anteriormente y recoger la muestra en frasco estéril de boca ancha y tapa a rosca Punción proximal de sonda: pacientes sondados se debe punzar a 10 cm. de la unión sonda-meato urinario con jeringa estéril y previa limpieza de la sonda con iodo povidona. Recordar el clampeo (compresión) de la misma durante 1 a 3 hs. Punción suprapúbica COPROCULTIVO Obtención de la muestra Niños menores de un año: HISOPADO RECTAL: Se introduce el hisopo estéril en el ano y se rota presionando la ampolla rectal para favorecer la excreción fecal. El mismo se coloca en un medio de transporte para su posterior procesamiento. Muestras rechazadas: pañales. Niños mayores de un año y adultos: Se recolecta la muestra recién emitida en un recipiente estéril de boca ancha. LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO El líquido cefalorraquídeo (LCR) rodea completamente al encéfalo y médula espinal. El mismo se recoge insertando ascépticamente una aguja a nive3l de las vértebras lumbares. La muestra obtenida se coloca en 3 o 4 tubos estériles y se rotula con el nombre del paciente. ESPUTO La muestra se obtiene por expectoración espontánea o inducida con vapores de cloruro de sodio. El paciente debe efectuar un cepillado de dientes y gargarismos con solución de bicarbonato de sodio, para disminuir la contaminación con flora normal de la boca. Son de elección los primeros esputos de la mañana, los cuales deben recogerse en un frasco estéril. LAVADO BRONQUIAL Se realiza con el broncoscopio y su principal utilidad reside en la búsqueda de microbacterias responsables de la tuberculosis.

7 EXUDADO DE FAUCES Se debe ejercer presión con un baja lenguas e hisopar enérgicamente la zona afectada (placas purulentas, ulceraciones, zonas de enrojecimiento) evitando tocar con el hisopo la lengua, paredes de la boca y saliva que contienen flora habitual de la boca. Introducir luego el hisopo en un medio de transporte y remitirlo al laboratorio dentro de las 10 hs. de realizado. EXUDADO URETRAL Uretritis aguda: Debe haber una retención urinaria de aproximadamente 3 hs. Se toma el material con ansa o hisopo estéril que se introduce unos 2 cm dentro de la uretra y se hacer girar suavemente. Uretritis crónica: Si no hay exudación, se recoge la orina de forma estéril sin eliminar el primer chorro de la micción. Si hay exudación, se recolecta el material antes de la primera micción. EXUDADO VAGINAL No practicar higiene vaginal durante 12 hs. o más antes del examen. Siempre que sea posible es conveniente colocar el espéculo. Se toma la muestra a partir del fondo del saco vaginal y cuello de útero con hisopo estéril. OBSERVACIÓN IMPORTANTE Todas las muestras obtenidas para diagnóstico microbiológico deberán remitirse en forma inmediata al laboratorio para su procesamiento.

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