CULTIVO DE MICROORGANISMOS MEDIOS DE CULTIVO

Transcripción

1 CULTIVO DE MICROORGANISMOS MEDIOS DE CULTIVO

2 CULTIVO DE MICROORGANISMOS fuente de energía exógena nutrientes esenciales: agua, carbón, nitrógeno, minerales condiciones ambientales apropiadas: ph, temperatura, presión osmótica y oxígeno atmosférico.

3 Fuente de energía exógena Catabolismo: conjunto de reacciones de degradación de sustancias en las que se produce (o libera) energía. Anabolismo: conjunto de reacciones químicas encaminadas a la síntesis de componentes celulares. Son reacciones de biosíntesis, que consecuentemente requieren energía.

4 Dependiendo de la energía que toman del medio para crecer Fotótrofos: luz Quimiótrofos: compuestos químicos Estos a su vez se pueden dividir según sea el compuesto químico que utilizan. * Quimiolitótrofos: inorgánico * Quimioorganótrofos: orgánico

5 Requerimientos para el desarrollo bacteriano Autótrofos: obtienen C y N de la materia orgánica simple Heterótrofos: Requieren compuestos orgánicos más complejos como fuente de C y de N, así como proteínas y derivados y requieren carbohidratos y grasas

6 nutrientes esenciales peptonas : proteínas digeridas parcialmente ( polipéptidos, dipéptidos y aminoácidos) Carbohidratos Minerales: Na, K, Mg, Ca, Cl, Fe, Zn, Mn, Mo, Se, Co, Cu, Ni

7 condiciones ambientales apropiadas ph temperatura presión osmótica oxígeno atmosférico

8 ph Basófilas En la mayoría de las bacterias el crecimiento óptimo es entre 6.5 y 7.5. Acidófilas Muy pocas bacterias crecen a un ph menor de 4.0. Sin embargo, las bacterias clasificadas como son tolerantes a la acidez, un ejemplo es Thiobacillus thiodans que crece a un ph óptimo de entre 2.0 a 3.5.

9 ph

10 GRUPO Temperatura TEMPERATURA MÍNIMA C TEMPERATURA ÓPTIMA C TEMPERATURA MÁXIMA C CRIÓFILAS O PSICRÓFILAS MESÓFILAS TERMÓFILAS

11 Presión osmótica Halófilos : organismos capaces de vivir en medios salinos como el mar (3.5% NaCl) Osmófilos: organismos que pueden vivir en ambientes ricos en azúcar Xerófilos: organismos q sobreviven en ambientes muy secos

12 Oxígeno Aerobios: microorganismos que viven en ambientes con tensiones normales de O₂ (21% de O₂ ) Microaerofílicos: microorganismos que viven en presencia de niveles de O₂ que están bajo la concentración presente en el aire (<21%) Anaerobios facultativos microorganismos que pueden vivir en presencia o en ausencia de O₂ Anaerobios estrictos: microorganismos incapaces de crecer en la presencia de O₂

13 Oxígeno aerobio microaerofílico Anaerobio facultativo Anaerobio estricto

14 Dispositivo para anaerobias

15 Número de microorganismos (log) CRECIMIENTO BACTERIANO FASES 1. Fase de latencia: etapa en la cual un inóculo proveniente de otro medio de cultivo 2. Fase exponencial o logarítmica: las bacterias están dividiéndose. 3. Fase estacionaria: etapa en que los nutrientes se agotan 4. Fase de muerte: las bacterias ya no crecen ni realizan actividades metabólicas. Hay lisis celular tiempo

16 CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO COMPOSICIÓN DE ACUERDO A SU USO EN EL LABORATORIO

17 COMPOSICIÓN SINTÉTICO: Son aquellos medios preparados con alta pureza y en los cuales la composición se conoce en forma precisa. Su uso es muy definido, por ejemplo medios para ensayo de vitaminas o para enriquecimiento. NO SINTÉTICO: Estos se preparan a partir de una gran variedad de productos crudos como son extractos de carne, extractos de levaduras, hidrolizados proteicos (peptonas) etc. y aunque se conoce cuáles son los ingredientes, estos pueden variar ligeramente, por ejemplo el contenido de aminoácidos entre la carne de un animal y otro.

18 DE ACUERDO A SU USO EN EL LABORATORIO ~ Medios de cultivo de uso general. En este grupo se encuentran los medios que contienen los nutrientes básicos y no contienen sustancias inhibitorias por lo que en ellos pueden crecer una gran variedad de heterótrofos. Entre estos medios tenemos : Agar de soya y tripticaseína, agar de Müller Hinton, agar nutritivo, etc. ~ Medios de cultivo diferencial. Este tipo de medios es usado para distinguir entre diferentes tipos de bacterias. Usualmente contienen colorantes o indicadores de ph que darán un color característico a las colonias o viraran el color del medio de cultivo de acuerdo al microorganismo que se trate. Un medio puede ser diferencial y selectivo al mismo tiempo. ~ Medios de cultivo selectivos. Este es un medio nutritivo al que se le añaden productos que actúan como agentes inhibitorios, de tal manera que sólo permiten el crecimiento de cierto grupo de microorganismos. Se usan para aislar organismos particulares e inhibir el crecimiento de los no deseados.

19 Medios selectivos y diferenciales Agar de MacConkey el cual contiene una mezcla de sales biliares que inhiben a los microorganismos Grampositivos, además de lactosa y como indicador rojo de fenol para distinguir las bacterias que fermentan la lactosa de las que no lo hacen. Agar EMB (Eosina azul de metileno) mediante el azul de metileno y la eosina inhibe los organismos Grampositivos. Al mismo tiempo, al igual que el Agar de MacConkey, permite diferenciar bacterias que fermentan la lactosa y/o a la sacarosa de las que no lo hacen. El Agar de sal y manitol, por su alto contenido de NaCl (7.5%) inhibe a las bacterias que no lo toleran, al mismo tiempo con el indicador rojo de fenol sirve para detectar la fermentación del manitol. Se utiliza para el aislamiento y diferenciación del género Staphylococcus.

20 MEDIOS DE CULTIVO A. Medios líquidos B. Medios sólidos: llevan un agente solidificante (Agar) que es un polisacárido acídico producido por ciertas algas rojas que gelifica por debajo de 45 C. Se usa a una concentración del 1.5%. C. Medios semisólidos: agar a una concentración del 0.7%.