I Determinación de la velocidad de sedimentación eritrocitaria (VSE o VSG).

Transcripción

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2 I Determinación de la velocidad de sedimentación eritrocitaria (VSE o VSG). Técnica. 1 Extraiga sangre del tubo o frasco con una pipeta Pasteur. 2 Transfiérala a un tubo de Wintrobe y llénelo hasta la marca de "0. Debe procurar que al vaciar la pipeta la punta de ésta quede al fondo del tubo e ir vaciando la sangre suavemente al mismo tiempo que se va retirando la pipeta del fondo. 3

3 4 Lleve el tubo de Wintrobe a la gradilla e inicie el conteo de tiempo dejando reposar la muestra durante una hora. 5 Transcurrida una hora, mida el espacio que ocupa el sobrenadante desde la superficie hasta el borde superior de los eritrocitos sedimentados, haga la lectura en mm.

4 II Recuento total de eritrocitos. Método indirecto: Se calcula a partir del microhematocrito utilizando la siguiente fórmula: Microhematocrito X 100,00 = No. Total de eritrocitos por mm3 Para calcular los mm3, el total de eritrocitos contados en los 5 cuadros se suman y multiplica por 10,000. El resultado será igual al número de eritrocitos por mm3

5 Método directo: 1 Aspire con la pipeta de Thoma para glóbulos rojos, la sangre contenida en el tubo de ensaye. 2 Procure aspirar suavemente hasta la marca de 0.5 asegurándose de que la columna de sangre no tenga burbujas. Aspirar hasta la marca 0.5.

6 3 Una vez obtenido el volumen requerido limpie la punta de la pipeta con papel NO absorbente. Papel secante. Aspire. 4 Aspire solución salina isotónica hasta la marca superior de 101. En caso de pasarse puede eliminar líquido con una servilleta para tener con exactitud el volumen requerido. Marca superior Retire la boquilla y tape la pipeta con los dedos anular y pulgar colocándolos en los extremos, agite suavemente durante dos minutos aproximadamente. Agite.

7 6 Ponga la pipeta en posición vertical y enseguida deposite dos gotas sobre las regiones biseladas de la cámara de Neubauer a las que previamente les habrá colocado un cubreobjetos, deposite una pequeña gota. Dejar salir 2 gotas Cámara de Neubauer.

8 7 Inmediatamente coloque la cámara de Neubauer sobre la platina del microscopio y déjela reposar durante 3 minutos. Una vez transcurrido este tiempo, proceda a hacer la observación. Primero con el objetivo de 10X (seco débil) se procede a enfocar la preparación y localizar el rayado correspondiente para la cuenta de los eritrocitos; una vez hecho esto se enfoca con el objetivo de 40X (seco fuerte) y se cuenta el número de eritrocitos colocados dentro de los cuadros, Gire a 10x. Gire a 40x.

9 III Determinación del microhematocrito (Hto). Técnica: Recoja sangre por medio de un capilar, ya sea directamente tomada por punción ó bien de un tubo de ensaye que la contenga con anticoagulante El capilar se llena aproximadamente en 3/4 partes de su longitud total, inclinándolo para acelerar su llenado. Enseguida tape uno de los extremos con plastilina y limpie el exceso de sangre.

10 4 Coloque el capilar en la microcentrifuga, con el extremo lleno de plastilina contra el empaque de hule que se encuentra alrededor de la microcentrifuga, cierre la tapa de la centrifuga y hágala funcionar durante 7 minutos a una velocidad de 5000 rpm. Esperar 7 minutos.

11 5 Calcule el microhematocrito como el porcentaje de toda la sangre venosa ocupada por los eritrocitos e interprete este dato utilizando el siguiente procedimiento: Con una regla mida la distancia entre el menisco del plasma y la superficie de separación de plastilina-eritrocitos, dicha medición se toma como el 100%. Después mida la proporción globular y determine el porcentaje que le corresponde a está (el volumen de leucocitos NO se considera parte del paquete).

12 IV Determinación de hemoglobina. Técnica: 1 2 Coloque la boquilla de una pipeta de Shali en la boca y aspire la sangre contenida en el tubo en el tubo de ensayo, hasta la marca de 20 cm. La sangre contenida en la pipeta debe depositarla en un tubo de ensaye que contenga 5 ml. de ferrocianuro de potasio y solución de cianuro de potasio (reactivo de Drabkin), procure que esta mezcla quede homogénea. Marca 20

13 3 Deje reposar por espacio de 10 minutos, obteniéndose así la cianometahemoglobina. 4 La densidad óptica de este pigmento es medida posteriormente en el espectronic 20 a 540 nm y multiplique el valor obtenido por el factor ( 37.7) que se obtiene de la curva estándar correspondiente al reactivo. Parámetros normales en adultos para la ciudad de México. En el hombre es de 15 a 20 g/100 ml. En la mujer 12.5 a 17.5 g/100 ml.

14 V Determinación de los índices globulares medios. Técnica: CÁLCULO DE VOLUMEN GLOBULAR MEDIO (V.G.M.) El Volumen Globular Medio (V.G.M.) es el promedio del volumen del eritrocito y se obtiene multiplicando el valor del microhematocrito por 10 y dividiendo entre la cantidad resultante de la cuenta de los eritrocitos expresada en millones. Parámetros normales para la ciudad de México: De en ambos sexos. Nota: La referencia utilizada será de la cuenta directa de eritrocitos expresados en millones por mm3. El resultado se expresa en micras cubicas El volumen globular medio (V.G.M.) aumenta hasta 150 en anemia macrocítica y disminuye hasta 50 en anemias ferroprivas.

15 CÁLCULO DE LA HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA (Hb.G.M) Esta cantidad determina el promedio en peso de hemoglobina en el eritrocito, lo cual debe corresponder a 1/3 del volumen total del mismo. Sabiendo que un aumento o disminución de mas ó menos del 5% nos habla de hipo ó hipercromatismo eritrocitario. Esta cantidad es una ayuda diagnóstica más específica y complementaria que la cuenta de eritrocitos, hemoglobina y hematocrito. La Hemoglobina Globular Media (Hb.G.M.)Se obtiene multiplicando el valor de la hemoglobina por 10 y dividiendo entre el numero total de eritrocitos expresados en millones. El valor resultante se da en microgammas. En las anemias macrocíticas la Hb.G.M. es elevada, pero en las anemias microciticas la Hb.G.M. es menor. Parámetros normales para la ciudad de México: Aproximadamente 30 microgammas para ambos sexos.

16 CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA (C.Hb.G.M.) Esta concentración determina el porcentaje promedio de hemoglobina por volumen de células y se expresar en gramos por cada 100 ml. Con este cálculo obtenemos un estudio más detallado de la cantidad de hemoglobina por una cantidad determinada de eritrocitos, dato que es útil para diferenciar el tipo de hipocromia e hipercromia que pueda presentarse en la anemia ya determinada. La concentración de Hemoglobina Globular Media (C.Hb.G.M.) se obtiene multiplicando la cantidad de hemoglobina por 100 entre el valor del hematocrito. El resultado obtenido se puede expresar también en gramos por 100 ml. de eritrocitos En las anemias ferroprivas se encuentran valores por abajo del 20 o 30 %, sin embargo en la anemia macrocititca es normal o ligeramente baja. Parámetros normales para la ciudad de México: 3 % a 33 % para ambos sexos

17 Técnica: VI Estudio morfológico del eritrocito. (Frotis Sanguíneo) En el campo hematológico los frotis pueden ser sanguíneos o medulares, para efectos de la práctica analizaremos únicamente el frotis sanguíneo el cual nos proporciona una descripción estática, morfológica y cromática de los eritrocitos; así como la cantidad de reticulocitos en proporción a los eritrocitos y la cuenta diferencial de leucocitos. 1 Coloque una pequeña gota de sangre (la muestra podría haberse obtenido por punción o extraída del tubo de ensaye que contiene sangre con anticoagulante), en un extremo del portaobjetos, previamente limpio y desengrasado.

18 2 Una vez colocada la gota (1), utilice el borde de un segundo portaobjetos (2), colocado encima del primero con un ángulo aproximado de 45º. 3 Se procede a extender la gota de sangre a todo lo largo del primer portaobjetos, procurando que el movimiento sea uniforme y de una sola intención (3). Posteriormente el frotis se deja secar a temperatura ambiente durante 25 minutos.

19 TINCIÓN DEL FROTIS. 1 Coloque el portaobjetos (en donde se ha hecho el frotis) sobre el puente de tinción. 2 Cubra completamente toda la extensión del frotis con gotas de colorante de Wright, dejándolo actuar por 2 minutos; el alcohol metílico de la solución de este colorante fijará la extensión.

20 3 Agregue una cantidad de buffer aproximadamente igual a la del colorante de Wright, de esta forma se logra una dilución al 50%. Espere 10 minutos. 4 Enjuague con gotas de buffer la preparación, hasta que la zona más delgada del frotis tome una coloración rosa. 5 Deje secar la preparación a temperatura ambiente.

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