Detección Marcadores Moleculares por PCR. Dr. Carlos G. Gonzalez Becuar

Transcripción

1 Detección Marcadores Moleculares por PCR Dr. Carlos G. Gonzalez Becuar

2 Virus de Papiloma Humano (VPH) - El CaCu ocupa los primeros lugares por muertes por Cancer en Mexico - Factor principal: VPH tipos de alto riesgo - Cerca de 35 tipos de VPH se identifican en lesiones benignas y malignas del tracto anogenital tanto en hombres como en mujeres

3 Virus de Papiloma Humano (VPH) - INCAN 2009 En conclusión, fue propuesto que además de los tipos 16 y 18, los VPH 31, 33, 35 (80% de CaCu) - 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 y 82 deben de ser considerados oncogénicos (carcinogénicos) o tipos de alto-riesgo ; mientras que los tipos 26, 53 y 56 son probablemente de alto-riesgo - A pesar de la prevalencia de VPH en mujeres con citologia normal, los tipos 16, 18, 31, 52, and 58 son reportados de manera consistente como los 10 mas comunes (Bruni et al. 2010)

4 DETECCION - Hibridacion de DNA por sonda: - Fue el primero en ser utilizado, poco articulos reciente reportan esta metodologia - PCR: - Desarrollado alrededor de 1998, actulamente utilizado para detectar a partir de muestras de suero sanguineo y tejido cervical

5 DETECCION - PCR: - Desarrollado alrededor de 1998, actulamente utilizado para detectar a partir de muestras de suero sanguineo y tejido cervical

6 - Detecta: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 de VPH. - Muestra: Suero sanguíneo - Producto: Kit Comercial - Tiempo de espera de resultado: 24-48hrs - Método: PCR con interpretación mediante Electroforesis en gel de Agarosa 1.5% - Ventajas: - Minima invasividad - Deteccion de menos de 200 VP/mL de plasma/serum PRUEBA VPH13

7 - Prueba de rutina en mujeres con sospecha de embarazo - Opcion a prueba de hibridacion in situ o llamada prueba humeda - Monitoreo y vigilancia de pacientes - Infecto-contagiosos - Evolucion de lesion o aparicion de lesion - Decision terapeutica APLICACIONES

8 DETECCION RNA EN SANGRE

9 - Comportamiento como cualquier celula madre - Capaces de diferenciacion - Proliferacion - Persisten en tumores - Recaidas - Metastasis - Marcadores inicilamente conocidos en - Cerebro - Mama - Colon - Ovarios - Prostata - Pancreas CANCER STEM CELLS

10 ANTECEDENTES DE GENETICA DE CA DE MAMA se descubrio el primer gen que causa Cancer de MAMA BRCA1 - Recientemente - Demanda sobre empresa por patentar genes - Actriz renombrada - El Cáncer de Mama es una enfermedad heterogénea - Diversos tipos histológicos que presentan diferentes características biológicas y clínicas

11 - Se ha destacado la presencia de marcadores: - P21 - Receptor de Factor de Crecimiento Epidérmico (EGFR) - Receptor de Factor de Crecimiento Epidérmico Humano (HER2) - Receptor de Progesterona (PR) - Receptor de Estrógeno (ER) - Gen de Susceptibilidad a Cáncer de Mama 1 (BRCA1)

12 ACTIVIDAD DE GENES - P21: Gen relacionado con presentaciones menos agresivas de CA de Mama - EGFR: Detección de este gen permite tratamientos con respuesta positiva a fármacos EGFR inhibidores de la tirosin quinasa (Gefitinib) - HER2: Se expresa en 20-30% de CA de Mama en EUA, una de sus utilidades radica en instauración de tratamientos como el uso del fármaco Trastuzumab

13 ACTIVIDAD DE GENES - PR: Junto con HER2 y ER se puede tener valor predictivo de comportamiento de CA de Mama - ER: Junto con HER2 y PR se puede tener valor predictivo de comportamiento de CA de Mama - BRCA1: Detección de este gen permite tratamientos con respuesta positiva a fármacos antineoplásicos comunes como Cisplatino

14 PRUEBA MAMAPLEX - Muestra: Suero sanguíneo - Producto: Kit Comercial - Tiempo de espera de resultado: 24-48hrs - Método: PCR Multiplex con interpretación mediante Electroforesis en gel de Agarosa 1.5% - Ventajas: - Minima invasividad - Deteccion de la expresion de 6 genes en una muestra - Pueden ser detectados por individual según el tamaño del amplicon

15 ANTECEDENTES EN CA DE OVARIO - Carcinoma epitelial de ovarioa tiene el peor de los pronosticos - Asintomatico en estadios temprano - Deteccion en > ¾ debido a lesion avanzada y metastasis - Expectativa de vida de 5 años - 90% en etapas tempranas - < 20% avanzado

16 MARCADORES EN CA DE OVARIO - CA125 deteccion en 80% de mujeres con CA de Ovario - The inadequacy of CA-125 alone as a screening test is partially due to the high rate of false-positive values because serum elevations may also be caused by a variety of other conditions including other cancers (pancreatic, breast, bladder, liver, lung); benign conditions such as diverticulitis, liver cirrhosis, endometriosis, uterine fibroids, and benign ovarian lesions; and physiologic conditions such as menstruation and pregnancy. American Journal of Obstetrics & Gynecology Volume 199, Issue 3, Pages , September 2008

17 MARCADORES EN MULTIPLEX DE OVARIO - CD44 - Celulas Generadoras de Cancer de Ovario ( 2008 Cancer Research) - C-MYC - Amplificado en 30-60% de todos los casos - AMACR - Utilidades para estidificacion FIGO, determina un pesimo pronostico, tmbn presente en CA de Prostata y de Colon

18 PRUEBA MULTIPLEX DE OVARIO - Muestra: Suero sanguíneo - Producto: Kit Comercial - Tiempo de espera de resultado: 24-48hrs - Método: PCR Multiplex con interpretación mediante Electroforesis en gel de Agarosa 1.5% - Ventajas: - Minima invasividad - Deteccion de la expresion de 3 genes en una muestra - Pueden ser detectados por individual según el tamaño del amplicon