PLATELET-ORIENTED INHIBITION IN NEW TIA
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- Víctor Manuel Córdoba Ramos
- hace 6 años
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1 PLATELET-ORIENTED INHIBITION IN NEW TIA AND MINOR ISCHEMIC STROKE (INHIBICIÓN PLAQUETARIA EN EL AIT Y EL ACCIDENTE CEREBROVASCULAR ISQUÉMICO MENOR DE RECIENTE APARICIÓN) PROTOCOLO PARA OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE PARA EL ESTUDIO SECUNDARIO DE BIOMARCADORES Centros fuera de EE. UU. ADN y plasma
2 ÍNDICE I. PROTOCOLO PARA OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA REQUISITOS DEL CENTRO PARA OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA KITS PARA OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA CENTRIFUGACIÓN CONSERVACIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA ENVASADO Y ENVÍO DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA: consulte los detalles en su manual de laboratorio de LabCorp II. PROBLEMAS Y ERRORES FRECUENTES... 8 III. DIRECCIÓN DE LABCORP PARA EL ENVÍO DE LAS MUESTRAS... 8 IV. DIRECCIÓN DE LA CLÍNICA MAYO PARA CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS... 8 V. ANEXOS... 9 Anexo A: TUBO PARA MUESTRA DE SANGRE CON EDTA DE 10 ML CON TAPA LILA Anexo B: CRIOVIAL DE 10 ML PARA CÉLULAS SOBRANTES Y CAPA LEUCOCÍTICA Anexo C: DIAGRAMA DEL RECORRIDO DE LA MUESTRA DE SANGRE DESPUÉS DE LA CENTRIFUGACIÓN Anexo D: CRIOVIAL DE 2 ML PARA PLASMA Página 1
3 I. PROTOCOLO PARA OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA 1. REQUISITOS DEL CENTRO PARA OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA Para procesar y conservar correctamente las muestras se necesita contar con los materiales siguientes: Preferente (no imprescindible): una centrífuga que trabaje a 1000 g y 4 C. Imprescindible: una centrífuga que trabaje a 1000 g. Preferente (no imprescindible): congelador a -70 C a -90 C. Las muestras pueden conservarse durante 3 meses antes del envío. Las muestras se enviarán en nieve carbónica. Imprescindible: congelador a -20 C, -30 C o -40 C. Si se usa un congelador a - 20 C, -30 C o -40 C, las muestras se enviarán en nieve carbónica en un plazo de 4 días. Nieve carbónica disponible para el envío de todas las muestras. (Consulte en su manual de laboratorio de LabCorp los proveedores de nieve carbónica). 2. KITS PARA OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA LabCorp Clinical Trials suministrará kits para obtención de muestras que se prepararán en LabCorp y se enviarán directamente a los centros en un recipiente reutilizable para su devolución con las muestras a LabCorp. Cada kit para obtención de muestras de ADN y plasma contiene los materiales necesarios para obtener, preparar y devolver las muestras a LabCorp Clinical Trials. (Se suministrará al centro los materiales adicionales necesarios para completar los kits de obtención de muestras en caso de daños o rotura). Cada kit de obtención de muestras para ADN y plasma contiene los siguientes elementos: ÍTEM FORMAS DE PRESENTACIÓN Formulario de solicitud de análisis de laboratorio con código de barras ] CANTIDAD 1 MATERIALES PARA LAS EXTRACCIONES DE SANGRE Extracción de sangre: 1 a. 1 tubo con tapa lila con EDTA de 10 ml (vacutainer), con código de barras b. 1 criovial de 10 ml para obtención de la capa leucocítica y células sobrantes, con código de barras Página 2
4 c. 6 crioviales de 2 ml para plasma, con código de barras d. 1 gasa humedecida con alcohol e. 1 aguja f. 1 torniquete g. 1 gasa h. 1 apósito i. 1 pipeta no estéril Bolsa para material biopeligroso 1 MATERIALES DE ENVÍO Caja del kit (caja de envío) 1 Hoja de ruta aérea prepagada y preimpresa 1 Recipiente para envío de poliestireno 1 Etiqueta para envío de nieve carbónica Varias NOTA: los centros deben obtener la nieve carbónica para el envío de las muestras: consulte en su manual de LabCorp los proveedores de nieve carbónica. El formulario de solicitud al laboratorio (consulte su manual de laboratorio de LabCorp) y los elementos etiquetados con el código de barras que se incluyen en cada kit para obtención de muestras están preimpresos y contienen el mismo número de código de barras. No cambie el contenido de un kit a otro. SOLICITUD DE MÁS MATERIALES 1. Para solicitar más materiales, consulte las instrucciones para realizar una nueva solicitud de kits y materiales que encontrará en el manual de laboratorio de LabCorp. Cuando realice una nueva solicitud de suministros, deje transcurrir como mínimo 5 o 7 días laborables para preparar y enviar los suministros. 3. OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA Se obtendrán muestras de sangre en el momento de la inscripción en el estudio. Lo mejor es que las muestras se obtengan en el momento de la aleatorización, después de que se administre la dosis de carga al paciente. No obstante, las muestras pueden obtenerse hasta 12 horas después de la aleatorización si es inevitable. Si el coordinador del estudio no puede realizar una extracción mediante venopunción se Página 3
5 puede usar el laboratorio de extracciones del hospital, pero el coordinador será responsable del transporte de la muestra de sangre al laboratorio para su centrifugación y de organizar el envasado y envío de todas las muestras a LabCorp. ANTES DE OBTENER LA MUESTRA 1. Confirme que se obtuvo el consentimiento informado para el estudio de biomarcadores. 2. Asegúrese de haber seleccionado el kit correcto para la obtención de muestras de ADN y plasma. 3. Compruebe la fecha de caducidad del kit de obtención de muestras que haya seleccionado. (Siga las normas locales para destruir los kits de obtención de muestras caducados). 4. Compruebe el calendario de LabCorp en su manual de laboratorio de LabCorp para averiguar si hay cierres previstos por fiestas locales y nacionales. OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS 1. Utilice una técnica estéril estándar para la venopunción. 2. Si un brazo tiene una vía i.v., utilice el otro brazo. Si hay una vía i.v. en ambos brazos, extraiga la sangre de una vena distal a la vía i.v. 3. Llene completamente el tubo con EDTA de tapa lila (Anexo A) que se incluye en el kit de obtención de muestras. 4. Invierta despacio el tubo al menos 6-8 veces inmediatamente después de la extracción para evitar la coagulación. Evite la exposición a temperaturas extremas de calor o frío. Etiquete el tubo con el número de ID y el número de aleatorización del sujeto de POINT (el N.º de aleatorización es el N.º del frasco del medicamento del estudio). NOTA: utilice un bolígrafo o un marcador indeleble cuando rellene las etiquetas de todas las muestras y el formulario de solicitud al laboratorio. 5. Separe el plasma de las células por centrifugación, inmediatamente o entre 30 minutos y 1 hora tras la obtención (consulte la sección de Centrifugación en el manual de laboratorio de LabCorp). Mantenga los tubos en posición vertical antes de la centrifugación. Si necesita ayuda con la centrifugación, consulte el manual de laboratorio de LabCorp para conocer la información de contacto de su monitor de proyecto de LabCorp. 6. Después de la centrifugación, si no ve una capa diferenciada entre las células de la sangre, la capa leucocítica y el plasma, centrifugue la muestra una segunda Página 4
6 vez. Consulte en el Anexo C un diagrama del recorrido de la muestra de sangre después de la centrifugación, mostrando la capa leucocítica. 7. Utilizando la pipeta incluida en el kit para obtención de muestras, transfiera 0,7 ml de plasma del tubo con EDTA de tapa lila a cada uno de los seis crioviales de 2 ml. Llene los crioviales de 2 ml hasta la línea de 0,7 ml. (Anexo D) NOTA: tenga cuidado para no alterar la capa leucocítica entre las células de la sangre y el plasma. Debe ver una capa diferenciada entre el plasma y las células, lo que se conoce como capa leucocítica. 8. Compruebe que NO se pipetea la capa leucocítica con el plasma. Si extrae parte de la capa leucocítica con el plasma, deje constancia de ello en la parte inferior del formulario de solicitud al laboratorio. 9. Ponga las tapas en los crioviales de plasma. 10. Rellene las etiquetas de los seis crioviales de 2 ml con el número de ID y el número de aleatorización del sujeto de POINT (el N.º de aleatorización es el N.º del frasco del medicamento del estudio). NOTA: utilice un bolígrafo o un marcador indeleble cuando rellene las etiquetas de todas las muestras y el formulario de solicitud al laboratorio. 11. Utilizando la pipeta adicional que se incluye en el kit de obtención de muestras, transfiera todas las células sobrantes y la capa leucocítica desde el tubo con EDTA de 10 ml al criovial de 10 ml. 12. Vuelva a poner la tapa en el criovial de 10 ml. 13. Ponga los seis crioviales de plasma de 2 ml y el criovial de 10 ml con las células sobrantes y la capa leucocítica en el Aqui-Pak (soporte para 6 tubos con material absorbente). 14. Introduzca el Aqui-Pak en el compartimento más grande de la bolsa para muestras biopeligrosas y ciérrela. Introduzca una copia del formulario de solicitud al laboratorio en el bolsillo exterior de la bolsa para muestras (conserve una copia para sus archivos). 15. INTRODUZCA INMEDIATAMENTE LA BOLSA CON LAS MUESTRAS EN UN CONGELADOR EN POSICIÓN VERTICAL. 16. Las muestras deben permanecer en el congelador hasta que se CONGELEN antes de que puedan enviarse. Una vez congeladas, las muestras deben enviarse en nieve carbónica. Siga las instrucciones de envasado y envío del manual de laboratorio de LabCorp y envíe juntos el criovial de 10 ml y los seis crioviales de 2 ml en nieve carbónica. Página 5
7 17. Si congela las células sobrantes y el plasma en un congelador a -20 C, -30 C o - 40 C, debe enviar las muestras en nieve carbónica en un plazo de 4 días. Si conserva las muestras en un congelador a de -70 C a -90 C puede conservarlas durante hasta tres meses antes de enviarlas en nieve carbónica. PROBLEMAS CON LA OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS Si se rompe o estropea un ítem del kit de obtención de muestras, repóngalo con uno de los materiales suministrados a granel. Hay etiquetas con código de barras adicionales en cada kit de obtención de muestras. Adhiera una de las etiquetas con código de barras adicionales de una forma que pueda escanearse con facilidad (p. ej., a lo largo del tubo). Asegúrese de que no tape el código de barras de la Lot Expiration (Caducidad del lote). Rellene la información requerida en la etiqueta. 4. CENTRIFUGACIÓN Para preparar plasma sin células debe centrifugar las muestras de sangre. Utilice el nomograma del manual de laboratorio de LabCorp para calcular la velocidad (en RPM, o revoluciones por minuto) para centrifugar la muestra. Para poder calcular la velocidad, necesitará conocer el radio (la distancia desde el centro de la centrífuga que esté utilizando hasta la mitad del tubo que se vaya a centrifugar), y la FCR (fuerza centrífuga relativa, que se expresa también como g ; en este estudio, g = 1000). Es necesario calcular la velocidad o la FCR una vez para cada centrífuga específica. Una vez determinada la velocidad, centrifugue el tubo con EDTA de 10 ml a 1000 g durante 15 minutos. De esta forma, se separará el plasma de las células. Debe ver una capa diferenciada entre el plasma y las células, que se conoce como capa leucocítica. Tenga cuidado de no tocar la capa leucocítica Es fundamental que la capa leucocítica se mantenga con las células sobrantes que se utilizarán para extraer el ADN en LabCorp. Si no ve una capa diferenciada entre las células, la capa leucocítica y el plasma, centrifugue la muestra una segunda vez. NOTA: si necesita más ayuda, póngase en contacto con su monitor de proyecto de LabCorp (consulte el manual de laboratorio de LabCorp). 5. CONSERVACIÓN DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA Las células sobrantes y las muestras de plasma residuales deben congelarse en el centro antes del envío. Las muestras deben conservarse congeladas a de -70 C a -90 C, O -20 C, -30 C o -40 C hasta el momento del envío. Página 6
8 Si se usa un congelador a -20 C, -30 C o -40 C, las muestras se enviarán en nieve carbónica en un plazo de 4 días. Si usa un congelador a de -70 C a -90 C, las muestras pueden conservarse durante 3 meses antes de su envío en nieve carbónica. Durante la conservación en el congelador, las muestras deben permanecer en bolsas para muestras biopeligrosas en posición vertical. NOTA: tanto las células sobrantes como el plasma extraído se enviarán juntos en nieve carbónica. ANTES DEL ENVÍO 1. Verifique que cada uno de los seis crioviales de 2 ml y el criovial de 10 ml están etiquetados. 2. Verifique que la etiqueta de cada criovial de 2 ml contiene el número de ID del paciente y el número de aleatorización de POINT (el número del frasco con el medicamento del estudio). 3. Verifique que la etiqueta del criovial de 10 ml contiene el número de ID del paciente y el número de aleatorización de POINT. 6. ENVASADO Y ENVÍO DE MUESTRAS DE ADN Y PLASMA: consulte los detalles en su manual de laboratorio de LabCorp. 1. Organice los materiales para el envío. 2. Llene la mitad de la caja para envío con nieve carbónica. 3. Ponga la bolsa con las muestras en nieve carbónica en posición vertical y rellene el resto de la caja para envío con nieve carbónica. NOTA: las muestras de varios pacientes pueden enviarse en un solo recipiente y deben mantenerse en sus bolsas de muestras individuales, junto a los formularios de solicitud al laboratorio correspondientes. 4. Cierre y selle la caja para envío. 5. Consulte su manual de laboratorio de LabCorp para conocer el servicio de mensajería seleccionado para su país e información específica para rellenar su hoja de ruta aérea. Rellene las hojas de ruta aérea por completo; la hoja de ruta aérea está preimpresa con el nombre del centro y la información de LabCorp. 6. Conserve una copia para sus archivos. 7. Consulte su manual de laboratorio de LabCorp para determinar si la etiqueta Dry Ice (nieve carbónica) está preadherida a su caja para envío o si necesita adherir una etiqueta Dry Ice para envío en la caja para envío. Página 7
9 9. Envíe la muestra a LabCorp Clinical Trials. Contacte con su persona de contacto en LabCorp Laboratory que se indica en el listado de su manual de laboratorio de LabCorp si necesita hablar con alguien sobre el envío. RECUERDE: las muestras solo pueden enviarse a LabCorp Clinical Trials DE LUNES A JUEVES II. PROBLEMAS Y ERRORES FRECUENTES Extracción de la capa leucocítica cuando se extrae el plasma Si accidentalmente extrae parte de la capa leucocítica con una de las pipetas, deje constancia de ello en el formulario de solicitud al laboratorio. Esto puede afectar a la precisión de las concentraciones de biomarcadores. Separación insuficiente de células, capa leucocítica y capa de plasma Centrifugue la muestra una segunda vez. Nieve carbónica insuficiente Puede hacer que las muestras se descongelen y afectará a la precisión de las concentraciones de biomarcadores. III. IV. DIRECCIÓN DE LABCORP PARA EL ENVÍO DE LAS MUESTRAS Consulte el manual de laboratorio de LabCorp DIRECCIÓN DE LA CLÍNICA MAYO PARA CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS La Clínica Mayo es responsable de la conservación de las muestras de ADN y plasma a largo plazo. NO ENVÍE MUESTRAS DIRECTAMENTE A LA CLÍNICA MAYO. Mayo Clinic A/A: Owen Ross, PhD 4500 San Pablo Road Birdsall Room 225 Jacksonville, FL Teléfono: (904) Página 8
10 V. ANEXOS Página 9
11 Anexo A TUBO PARA MUESTRA DE SANGRE CON EDTA DE 10 ML CON TAPA LILA Página 10
12 Anexo B CRIOVIAL DE 10 ML PARA CÉLULAS SOBRANTES Y CAPA LEUCOCÍTICA Código de barras preimpreso Tenga cuidado para no cubrir el código de barras Rellene la etiqueta preadherida con: ID del paciente de POINT (SubjID) Número de aleatorización (Random#) Etiqueta para extracción de ADN preadherida Código de barras Tenga cuidado para no cubrir el código de barras Rellene la etiqueta preadherida con: ID del paciente de POINT (SubjID) Número de aleatorización (Random#) Etiqueta para extracción de ADN preadherida Página 11
13 Anexo C DIAGRAMA DEL RECORRIDO DE LA MUESTRA DE SANGRE DESPUÉS DE LA CENTRIFUGACIÓN Nota: tenga cuidado para no alterar la capa leucocítica entre las células de la sangre y el plasma. Página 12
14 Anexo D CRIOVIAL DE 2 ML PARA PLASMA Utilizando la pipeta incluida en el kit para obtención de muestras, transfiera 0,7 ml de plasma del tubo con EDTA de tapa lila a cada uno de los seis crioviales de 2 ml para plasma. Llene los crioviales para plasma hasta la línea de 0,7 ml. Nota: Tenga cuidado de no tocar la capa leucocítica entre las células de la sangre y el plasma. Si se extrae parte de la capa leucocítica con el plasma, deje constancia de ello en la parte inferior del formulario de solicitud al laboratorio. Consulte en el Anexo C un diagrama del recorrido de la muestra de sangre después de la centrifugación, mostrando la capa leucocítica. Página 13
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