INSTRUCCIONES PARA LA RECOLECCION DE GOTAS DE SANGRE TOTAL EN PAPEL FILTRO PARA EL ESTUDIO DE ENZIMAS LISOSOMALES

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1 2010 INSTRUCCIONES PARA LA RECOLECCION DE GOTAS DE SANGRE TOTAL EN PAPEL FILTRO PARA EL ESTUDIO DE ENZIMAS LISOSOMALES EL PRIMER PASO, ES LEER PRIMERO Y LUEGO SEGUIR TODAS LAS INSTRUCCIONES!!!!! ALFREDO URIBE ARDILA M.Sc.

2 MATERIALES Y MUESTRA Papel filtro Schleicher & Schuell No.903. Muestra. Los especimenes utilizados para la impregnación de papel filtro pueden proceder de tres fuentes fundamentalmente: Recolectada en Tubos con EDTA u Heparina (Volumen mínimo: 0,5 a 1ml). Inmediatamente después de la punción, agregada directamente de la jeringa. Recolectada de una punción capilar del Talón, esta ultima, como opción ideal para el estudio Neonatal.

3 PROCEDIMIENTO Muestras recolectadas en EDTA o Heparina: Si las muestras son tomadas en otra unidad diferente a laboratorio que remite y llegan a este, para realizar los goteos sobre el papel, se recomienda: 1. Que quien envía el especímen lo haga manteniendo la muestra refrigerada. 2. Mezclar muy bien la muestra antes de gotear sobre la tarjeta. 3. Agregar una sola gota sobre cada círculo de impregnación. 4. Es la gota y no el instrumento con que se agrega la que toca el papel. 5. Llevar a secado antes de remitir al centro de Investigaciones en UniAndes. (ver mas adelante condiciones de secado)

4 PROCEDIMIENTO Muestras post-punción venosa: Se puede impregnar el papel filtro con muestra directamente de la jeringa de punción, para tal caso: 1. Agregar una sola gota sobre cada círculo de impregnación. 2. Debe quitar la aguja para hacer el procedimiento. 3. Es la gota de sangre que se agrega y no la punta de la jeringa la que toca el papel. 4. No agregue especimenes parcialmente coagulados, estas muestras son inservibles. 5. Llevar a secado antes de remitir al centro de Investigaciones en UniAndes. (ver mas adelante condiciones de secado)

5 PROCEDIMIENTO Muestras por punción Capilar (Recomendado para Neonatos): Se puede impregnar el papel filtro con muestras tomadas por punción capilar de talón, procedimiento recomendado para recién nacidos. 1. Se recomienda calentar el talón con un paño humedecido en agua caliente ( º C ) durante 3 5 minutos. 2. Limpiar el lugar de punción, permita que el alcohol se seque para proceder a puncionar. 3. Agregar una sola gota sobre cada círculo de impregnación. 4. Recordar que es la gota de sangre que se agrega la que toca el papel, evite el contacto directo del talón con el papel. 5. Llevar a secado antes de remitir al centro de Investigaciones en UniAndes. (ver mas adelante condiciones de secado) 6. El procedimiento de toma de muestra es el mismo que se realiza para protocolos de estudio neonatal, como el de Hipotiroidismo congenito.

6 CONDICIONES DE SECADO Aunque una buena toma de muestra e impregnación de las tarjetas, es muy importante para los resultados obtenidos posteriormente en los estudios enzimáticos, el secado posterior es fundamental, para mantener la estabilidad de las muestras durante el envío por correo. Se recomienda dejar secar las tarjetas a temperatura ambiente, sobre una superficie limpia, lisa (no absorbente) y plana, durante 10 a 14 horas, como mínimo. Una vez cumplido este tiempo se pueden enviar por correo, sin refrigeración, en tales condiciones, pueden mantener su viabilidad aproximadamente de 10 a 15 días. Si no son enviadas inmediatamente, una vez cumplen el tiempo de secado, se pueden guardar a 4º C, en cuyo caso son estables hasta seis meses. El papel filtro utilizado para la impregnación es el presentado en materiales y muestra, otro tipo de papeles no pueden ser utilizados.

7 Ejemplos de muestras inservibles Muestra insuficiente: Debe completar El circulo. Mala impregnación y Papel inadecuado. Muestras en contacto con Humedad Mala impregnación y Papel inadecuado.

8 COMENTARIOS GENERALES No sobrecargar el circulo de impregnación con mas de una gota de sangre. Controlar la correcta impregnación del papel observando el reverso que debe mostrar una gota uniforme, igual a la superficie donde se hizo el goteo. No llevar a refrigeración sin haber cumplido mínimo 10 horas de secado, las muestras pueden quedar inservibles. Bajo ninguna circunstancia permita que le entre humedad a las tarjetas, estas deben estar almacenadas en las neveras, dentro de bolsas plásticas de cierre hermético. Es de vital importancia que se sigan las instrucciones de toma de muestra, impregnación, secado y envío, dado que todos estos aspectos influirán en la calidad de la muestra, por lo tanto en los resultados.

9 GRACIAS POR SEGUIR LAS INSTRUCCIONES!!!!! BIBLIOGRAFIA Chamoles N. Manual de Entrenamiento par el estudio de las enfermedades Neurometabolicas: Laboratorio de Neuroquimica. Buenos Aires-Argentina KAMPINE JP, BRADY R. JKAUFER JN. FELD M. SHAPIRA D. Diagnosis of Gaucher's disease and Nieman-Pick's disease with small samples of venous blood. Science SHAPIRA E, Blitzer MG Miller JB, Africk DK. Biochemical Genetics. A laboratory manual. Oxford University Press. New York, Uribe, A., España, M., Murillo, P. Detection Of Lysosomal Disorders Through Enzyme Analysis In Dried Blood Spots: Review Of Three Years Of Investigation In Colombia. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana. Supl. No.1 Sep Pág. 49 Vol 1, 347. ISSN: