INSTRUCCIÓN TÉCNICA DISTRIBUCIÓN: Jefe de la Unidad de Calidad SUMARIO DE MODIFICACIONES
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- Lucía Lozano Navarro
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1 Investigación de crioaglutininas Página 1 de 5 DISTRIBUCIÓN: DEPARTAMENTO Dirección Hematología Enfermería RESPONSABLE Jefe de la Unidad de Calidad Jefe de la Unidad de Hematología Coordinadora de Enfermería REVISIÓN FECHA DESCRIPCIÓN A 29/01/07 Primera edición SUMARIO DE MODIFICACIONES PREPARADO REVISADO Y APROBADO Nombre: Marga Alcover Cargo: Coordinadora de Enfermería Fecha: 29/01/07 Nombre: Joan Bargay Cargo: Jefe de Unidad de Hematología Fecha: 29/01/07 La documentación del Sistema de Gestión de la Calidad se encuentra en la Intranet de Hospital Son Llàtzer. Existe una única copia papel autorizada y controlada en poder del Coordinador de Calidad, por lo que cualquier otro documento papel se considerará copia no controlada.
2 Investigación de crioaglutininas Página 2 de 5 1 Técnica en gel: MATERIAL: pipeta automática de 50, 25 y 10 lambdas (pipeta DiaMed) Tubos de hemólisis (12 x 75 mm) Pipetas Pasteur Nevera a 4ºC (puede utilizarse la destinada a conservar bolsas de sangre) Centrífuga para tarjetas DiaMed MUESTRA: suero o plasma Hematíes del propio paciente al 0,8% en Diluyente 2 para el autocontrol (10 lambdas de sangre homogenizada + 0,5 ml de Diluyente 2) REACTIVOS:Tarjetas DiaMed neutras ( NaCl/test enzimático/aglutininas frias ) Viales I a III del panel eritrocitario Diacell Diluyente DiaMed 2. Opcional: hematíes de sangre de cordón umbilical compatibles ABO con la muestra al 0,8% en Diluyente 2 (10 µl sangre cordón + 0,5 ml Diluyente 2) TANTO LAS MUESTRAS COMO LOS REACTIVOS DEBEN ESTAR ENFRIADOS PREVIAMENTE A 4 ºC AL IR A SER UTILIZADOS PROCEDIMIENTO: 1.- Rotular una tarjeta DiaMed neutra ( NaCl/test enzimático/aglutininas frías ) con los datos del paciente y : - los 3 primeros pocillos con los los números I, II, III. - el 4º pocillo con ac de autocontrol - el 5º pocillo con hc de hematíes de cordón, si se utilizan Destapar los pocillos.
3 Investigación de crioaglutininas Página 3 de Depositar en cada pocillo 50 lambdas (1 gota) de la suspensión de hematíes correspondiente. 3.- Añadir a cada pocillo 25 lambdas del suero o plasma. 4.- Incubar en nevera a 4 ºC durante 15 minutos. 5.- Centrifugar durante 10 minutos. 6.- Leer los resultados (ver ficha de lectura de resultados en tarjetas DiaMed) INTERPRETACIÓN 1.- En casi todos los sueros existe una pequeña cantidad de aglutininas frias que son inocas. 2.- La gran mayoría de crioaglutininas tienen especificidad anti-i, antígeno presente en prácticamente todos los adultos, pero ausente en los hematíes de cordón. Por ello es aconsejable introducir una prueba con este tipo de hematíes al efectuar la investigación. 3.- Por lo expuesto en el punto anterior casi todas las aglutininas frias actúan como autoanticuerpos. 4.- Para evaluar la importancia clínica de las aglutininas frias es necesario proceder a: - su titulación (ver ficha correspondiente) - determinación de su amplitud térmica (ver mas adelante) 5.- Un título elevado de crioaglutininas puede presentarse tras una infección por Mycoplasma pneumonie (neumonía atípica) o Mononucleosis infecciosa. 50 µl de hematies 50 µl de hematíes del 50 µl d e hematíes de Diacell paciente al 0,8 % cordón al 0,8 % (I a III) (autocontrol) ( especificidad I?) I II III ac hc TARJETA NEUTRA 25 ul de suero incubar 15 min. a 4 ºC centrifugar y leer
4 Investigación de crioaglutininas Página 4 de 5 2 Determinación de la amplitud térmica de las crioalutininas Procedimiento en gel: MATERIAL: pipeta automática de 50, 25 y 10 lambdas (pipeta DiaMed) Tubos de hemólisis (12 x 75 mm) Pipetas Pasteur Baño maría o estufa de temperatura regulable Incubador para tarjetas DiaMed Centrífuga para tarjetas DiaMed MUESTRA: suero del paciente obtenido a 37ºC: Jeringa y tubo de recogida precalentados a 37ºC Dejar coagular e incubar dos o tres horas a 37ºC antes de centrifugar REACTIVOS: tarjetas DiaMed con antiglobulina (Liss/Coombs) Hematíes O al 0,8% (cualquiera de los 3 viales del panel Diacell) PROCEDIMIENTO 1.- Rotular una tarjeta DiaMed Liss/Coombs con los datos del paciente. Destapar un pocillo y señalarlo con la temperatura de incubación. Inic. 37ºC 2.- Añadir al pocillo 50 lambdas (1 gota) de suspensión de hematíes 3.- Incubar la tarjeta, ya con los hematíes en el pocillo, durante 5 a 37ºC 4.- Añadir al pocillo 25 lambdas del suero (obtenido y mantenido a 37ºC) 5.- Dejar incubar 15 minutos a 37ºC 6.- Centrifugar inmediatamente (sin dejar enfriar) durante 10 minutos 7.- Leer el resultado 8.- Si el resultado ha sido negativo repetir el test completo, incubando en el paso 5 a 34ºC, de mantenerse la negatividad ir repetiendo a 32º, 30º, 28º, 26º, etc
5 Investigación de crioaglutininas Página 5 de 5 INTERPRETACIÓN La primera incubación que de resultado positivo indica la temperatura a la que la crioaglutinina comienza a fijar complemento.
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