Instrucciones para el uso 10/2009. ORGENTEC Diagnostika GmbH Carl-Zeiss-Straße Mainz Tel.: Fax:
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- Sara Cabrera Carrasco
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1 ORGENTEC Diagnostika GmbH Carl-Zeiss-Straße Mainz Tel.: Fax: Instrucciones para el uso 10/2009 1/8 alegria e
2 ÍNDICE DESCRIPCIÓN BREVE... 3 METODOLOGÍA... 3 INDICACIONES Y MEDIDAS DE PRECAUCIÓN... 3 VOLUMEN DE SUMINISTRO... 4 CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD... 4 EQUIPOS REQUERIDOS DE LABORATORIO... 4 EQUIPO... 5 TOMA Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS... 5 INDICACIONES GENERALES... 5 PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS... 6 REALIZACIÓN DEL ANÁLISIS... 6 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Y CARACTERÍSTICAS DE ENSAYO. 7 LÍMITES DEL PROCEDIMIENTO... 7 INTERFERENCIAS... 7 INSTRUCCIONES ABREVIADAS /8 alegria e
3 DESCRIPCIÓN BREVE En los papeles de ensayo SMC (Sensotronic Memorized Calibration) adjuntos se trata de un sistema de ensayo basado en ELISA para la aplicación extracorpórea con suero o plasma. Conjuntamente con Alegria, un Random Access Analyser de ejecución completamente automática, los papeles de ensayo ofrecen una ayuda diagnóstica para las autoinmunopatías. METODOLOGÍA Los papeles de ensayo SMC se basan en una reacción inmuno-encimática indirecta. Cada papel de ensayo contiene ocho cavidades y está rotulado con un código de barra individual. Un papel de ensayo está previsto para una sola aplicación. El papel de ensayo SMC está equipado con un juego completo de reactivos que se componen de un compuesto conjugado de encima, un sustrato de encima, una solución tope de dilución de muestra y un control específico de ensayo. Los pasos de reacción son los siguientes: Marcadores relevantes para la enfermedad que están contenidos en la muestra a ensayar, tienen un efecto de adhesión en la superficie recubierta de las cavidades. Mediante lavado se eliminan todas las sustancias adheridas y no específicas. El compuesto conjugado de encima reconoce los complejos creados de antígeno-anticuerpo. El conjugado excesivo se retira en un segundo lavado. El compuesto conjugado de encima provoca la conversión del substrato agregado en un producto de color azul. La densidad óptica de la muestra se mide con un módulo óptico con 650 nm. El desarrollo del color está correlaciondo con la cantidad del substrato convertido. INDICACIONES Y MEDIDAS DE PRECAUCIÓN 1. Todos los reactivos en este paquete de ensayo están destinados exclusivamente a la aplicación extracórporea en el equipo Alegria para fines diagnósticos. 2. El juego de ensayo contiene reactivos elaborados en base a componentes humanos de suero o plasma. Los reactivos base han sido ensayados con métodos de inmunoanálisis en cuanto a los parámetros HIV 1, HIV 2, HCV y hepatitis B, con resultado negativo. La BSA (contenida en algunos reactivos ha sido sometida a una prueba de BSE siendo ésta negativa. 3. El substrato TMB (3,3`,5,5`-tetrametilbencidina) tiene efectos tóxicos en caso de ingestión y en el contacto con la piel. En caso de contacto con la piel, debe lavarse ésta inmediatamente con abundante agua y jabón. 4. Evite entrar en contacto con el fluido del sistema que contiene ácido. En caso de entrar en contacto con la piel, lávela minuciosamente con agua y póngase en contacto con un médico. 5. Algunos reactivos contienen sodio azida como agente de conservación para la protección contra el crecimiento bacterial, por lo tanto se debe prevenir el contacto con la piel y/o las mucosas. 6. Durante la realización del ensayo se deben utilizar guantes de protección para prevenir el contacto con los reactivos, las muestras de control y el material de ensayo. 7. Las muestras no se deben pipetear con la boca. 8. Queda prohibido comer, beber o fumar durante el trabajo con los juegos de ensayo. 9. Se debe prevenir todo tipo de contacto de la solución de peróxido con materiales de fácil oxidación. Variaciones extremas en la temperatura pueden provocar una desomposición espontánea del peróxido. 10. Para eliminar desechos de laboratorio, restos de pruebas y componentes de test deben ser observadas las normas vigentes del país correspondiente. 3/8 alegria e
4 VOLUMEN DE SUMINISTRO Cantidad: 12 o bien 24 Papeles de ensayo Fig. 1: Composición de la tira de prueba 2 veces con cavidad recubierta con antígeno o anticuerpo relevante de enfermedad 2 veces con cavidad vacía y no recubierta 4 veces con cavidad llenada con los siguientes reactivos específicos de ensayo ready-to-use : control (amarillo; contiene marcadores relevantes en una matriz de tope de suero: PBS, NaN 3 <0,1% (w/w)), compuesto de conjugado de encima (rosado; compuesto de: anticuerpo antihumano, peroxidasas conjugadas; PBS, PROCLIN 300<0,05%(v/v)), solución tope de ensayo (amarillo; Tris, NaN 3 <0,1% (w/w)), TMB solución de substrato (3,3, 5,5 -tetrametilbencidina) 1 Botella con 20 ml Solución tope de lavado (PBS; NaN 3 < 0,1 % (w/w)), concentrado (50 x) 1 Botella con 2.5 ml El fluido del sistema (System Fluid) contiene ácido Cantidad: 1 Certificado de control de calidad CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD 1. Conservación en el refrigerador con 2-8 C. 2. Los papeles de ensayo se deben conservar en un entorno oscuro. 3. Con conservación adecuada, el juego de ensayo se puede utilizar hasta la fecha de vencimiento. 4. El juego de ensayo se debe proteger del calor y de la radiación solar directa. 5. Una solución tope diluida de lavado tiene una duración mínima de 30 días con 2-8 C. 6. El ácido clorhídrico diluido es conservable hasta la fecha indicada en la etiqueta, si es almacenado a una temperatura de 2-8 C. EQUIPOS REQUERIDOS DE LABORATORIO - Mezclador Vortex - Micropipetas con jeringas de un solo uso para 10 µl (ORG 250 Anti-GBM: 20 µl) - Agua destilada o desionizada - Probeta graduada para 1000 ml, 2500 ml 4/8 alegria e
5 EQUIPO Los papeles de ensayo SMC deben utilizarse exclusivamente en combinación con el equipo diagnóstico Alegria y la versión más actual del software. Aparte de la alimentación del equipo con los SysTrays preparados, el procesamiento de ensayo se realiza completamente automático. Un ciclo de ensayo se termina con la impresión de los resultados del ensayo. Mayor información acerca del analizador de Alegria se encuentra disponible en el Manual de Equipo. TOMA Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS 1. Las muestras de sangre se deben obtener en base a las directivas y regulaciones de vigencia actual. 2. Dejar coagular la sangre y obtener el suero mediante centrifugación. 3. Se debe prevenir la utilización de sueros hemolíticos, lipémicos e ictéricos. 4. Las muestras de suero y plasma pueden conservarse durante un período máximo de 5 días con refrigeración y temperaturas entre 2 a 8 C. En caso de requerir una conservación más larga, se deben alicuotar las muestras y congelarse con una temperatura de -20 C. 5. Se ha de prevenir la repetida congelación y descongelación! 6. No se recomienda la utilización de sueros desactivados frente al calor. INDICACIONES GENERALES 1. El juego de ensayo no se debe utilizar después de la fecha de vencimiento. 2. El papel de ensayo y las muestras deben disponerse con temperatura de ambiente aprox. 30 minutos antes de iniciar el ensayo. Excepción: Para el test Anti-GBM (ORG 250) son pipeteados 20 µl de muestra sin diluir! 3. Pipetear la muestra en el fondo de la cavidad. Para prevenir una arrastre, debe pipetearse la muestra siempre con una punta limpia de pipeta. 4. De las láminas que cubren las cavidades 1-4 sólo deben ser retiradas la que cubren las tiras de prueba requeridas (ver fig. 2). 5. No retire las láminas caracterizadas con un código de barras que cubren las cavidades 5-8. Fig. 2: Retire la lámina de la tira de prueba 5/8 alegria e
6 PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Solución de lavado El contenido de cada botella del concentrado de solución tope de agua (20 ml) debe diluirse mediante adición de agua destilada para obtener un volumen final de 1000 ml (1 litro). La solución de lavado se vierte a continuación en un contenedor previsto. La solución diluida de lavado tiene una durabilidad mínima de una semana en condiciones de conservación con temperatura de ambiente. System Fluid (fluido del sistema) Antes de la utilización diluya el contenido de cada botellita de concentrado de fluido del sistema (1000x) con agua destilada hasta alcanzar un volumen total de 2500 ml. El fluido del sistema será conducido seguidamente al contenedor previsto para ello. Almacenado a temperatura ambiente, el concentrado de fluido diluido tiene una caducidad de como mínimo una semana o hasta la fecha indicada en la etiqueta Papel de ensayo Se coloca la cantidad requerida de papeles de ensayo en los SysTrays. Resulta imprescindible observar que los papeles de ensayo envasados ya estuvieron expuestos a la temperatura de ambiente antes de retirar la lámina de las cavidades vacías. Los papeles de ensayo no requeridos se conservan en estado cerrado con 2-8 C en el refrigerador. REALIZACIÓN DEL ANÁLISIS 1. Retirar primero la lámina de protección de las cavidades vacías del papel de ensayo. 2. Pipetear 10 µl de muestra de paciente no diluida en el fondo de la cavidad 1. Excepción: Para el test Anti-GBM (ORG 250) son pipeteados 20 µl de muestra sin diluir! 3. Insertar los papeles de ensayo en los SysTrays. 4. Posicionar correctamente los SysTrays cargados en el Alegria. Fig. 3: Realización del análisis Todos los demás pasos para el servicio del Alegria se encuentran indicados en el Manual de Equipo. 6/8 alegria e
7 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Y CARACTERÍSTICAS DE ENSAYO La evaluación e interpretación de los resultados se realiza completamente automático. Cada juego de ensayo se suministra con un certificado de control de calidad y una hoja de especificaciones del producto que contiene información específica del producto, relacionada al cálculo de resultado, así como las características respectivas del ensayo. En la hoja de especificaciones del producto son utilizados los siguientes símbolos: A Evaluación de resultados M Rango de medición B Datos técnicos - Negativo Límite inferior B.1 Intra-Assay + Positivo Límite superior B.2 Inter-Assay +/- Valor límite B.3 Linearidad LÍMITES DEL PROCEDIMIENTO El resultado de ensayo obtenido con Alegria, debe tratarse en combinación con la anamnesis y el planteamiento resultante en base a esta información. INTERFERENCIAS No se han observado interferencias con sueros hemolíticos (hasta 1000 mg/dl), sueros lipémicos (hasta 3g/dL de triglicerida) o sueros con valores aumentados de bilirrubina (hasta 40 mg/dl). 7/8 alegria e
8 INSTRUCCIONES ABREVIADAS 8/8 alegria e
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