CASOS PRACTICOS EN MICROBIOLOGIA CLINICA JUAN CARLOS RODRIGUEZ DIAZ S. MICROBIOLOGIA HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE ELCHE

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1 CASOS PRACTICOS EN MICROBIOLOGIA CLINICA JUAN CARLOS RODRIGUEZ DIAZ S. MICROBIOLOGIA HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE ELCHE

2 CASO CLINICO 1: Paciente joven con sospecha de tuberculosis Datos clínicos Hombre 27 años Fumador Tos de 20 días de evolución Febrícula vespertina Pérdida de peso de 8 kg Lesión radiológica en pulmón

3 CASO CLINICO 1: Paciente joven con sospecha de tuberculosis Muestras a procesar Tres muestras de esputo de días diferentes Aspirado bronquial Lavado bronquial Cepillado bronquial Biopsia pulmonar

4 Patogenia de la tuberculosis Entrada del microorganismo Respuesta del sistema inmune Diseminación hematógena Infección tuberculosa o Tuberculosis latente Enfermedad tuberculosa

5 Métodos clásicos de diagnóstico de la infección tuberculosa Prueba del Mantoux o de la tuberculina Basada en: Inoculación de una mezcla de antígenos obtenidos de un cultivo inactivado Lectura de la induración a las 48-72h PRINCIPALES VENTAJAS Existen consensos internacionales para su interpretación Amplia experiencia clínica INCONVENIENTES Reacción cruzada con: BCG Micobacterias no tuberculosas Falta de sensibilidad (anergia)

6 Nuevos métodos de diagnóstico de la infección tuberculosa IGRAs (interferon gamma release assay) Basada en: Detección de la producción de interferon en leucocitos estimulados in vitro con antígenos específicos de M. tuberculosis (ES AT-6 y CFP-10) PRINCIPALES VENTAJAS Evita las reacciones cruzadas con la vacuna y con muchas de las micobacterias no tuberculosas Útil en vacunados e inmunodeprimidos INCONVENIENTES Coste No está evaluado en profundidad su verdadero significado en algunos casos

7 Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa Tinciones Ziehl Neelsen Auramina PRINCIPALES VENTAJAS Rapidez Bajo coste INCONVENIENTES Falta de sensibilidad No diferencia entre M. tuberculosis y micobacterias no tuberculosas

8 Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa Cultivos Sólidos: Lowenstein, Coletsos Líquidos automatizados: MGIT PRINCIPALES VENTAJAS Sensibilidad Aislamiento de la cepa para estudios posteriores: sensibilidad, etc Permite diferenciar entre M. tuberculosis y micobacterias no tuberculosas INCONVENIENTES Lentitud: 2-4 semanas

9 Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa Sistemas de biología molecular PCR a tiempo real Amplificación e hibridación con sondas específicas PRINCIPALES VENTAJAS Sensibilidad, aunque menor que el cultivo Permite diferenciar entre M. tuberculosis y micobacterias no tuberculosas Rapidez Permite conocer la resistencia antibiótica INCONVENIENTES Coste No permite obtener la cepa No sustituye a los métodos clásicos sino que los complementa

10 Métodos moleculares de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa

11 Métodos moleculares de detección de resistencias en Mycobacterium tuberculosis

12 Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria Cistitis (infección de vías bajas) Micción dolorosa: Disuria Micción frecuente: Polaquiuria Sensación continua de necesidad de orinar: Tenesmo Escasa sintomatología Pielonefritis (infección de uréteres y riñones) Fiebre Dolor lumbar Afectación general Síntomas de cistitis

13 Muestras a tomar Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria Cistitis Muestra de orina para cultivo cuantitativo Pielonefritis Muestra de orina para cultivo cuantitativo Hemocultivos para bacterias aerobias y anaerobias

14 Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria Cultivo cuantitativo Para diferenciar infección y colonización uretral: colonias/ml de orina Principales patógenos: Escherichia coli Proteus mirabilis Enterococcus faecalis Se realiza en varios medios: CLED Agar sangre Agar mac Conkey

15 Caso clínico 3: Viajero que regresa de Méjico con diarrea Causas Bacterianas Salmonella Campylobacter Shigella Vibrio Virus Rotavirus Adenovirus Norovirus

16 Parásitos: clasificación Protozoos: Amebas Ciliados Flagelados Apicomplexa Microspora Helmintos Platelmintos P. cestodos P. trematodos Nemátodos

17 Protozoos: Amebas

18 Protozoos ciliados

19 Protozoos: flagelados Trichomona vaginalis

20 Protozoos: flagelados II Leishmania spp Tripanosoma spp

21 Protozoos: Apicomplexa Pasmodium Toxoplasma gondii

22 Protozoos: Apicomplexa II Cryptosporidium spp Isospora belli Cyclospora cayetanenesis

23 Enterocytozoon spp Protozoos: Microspora

24 Platelmintos: cestodos Tenia spp. Ecchinococcus ssp.

25 Platelmintos: tremátodos Fasciola hepatica Schistosoma mansoni

26 Nemátodos I Trichuris trichiura Trichinella spiralis

27 Nemátodos II Enterobius vermicularis Ascaris lumbricoides

28 Nematodos III Toxocara canis Strongyloides stercoralis

29 Nemátodos III Necator americanus Anylostoma duodenale

30 Nemátodos IV Filarias sp

31 Identificación de los microorganismos Se utilizan pruebas bioquímicas, sensibilidad a algunos compuestos, secuenciación y espectrometría de masas Pruebas bioquímicas: Fermentación de azúcares: glucosa, lactosa, etc Hidrólisis de la urea Sensibilidad a: Optoquina Bacitracina

32 Identificación de los microorganismos Secuenciación de algunos genes Bacterias: Gen 16S rrna Hongos: Genes ITS 1 y ITS4 Espectrometría de masas (Malditof)

33 Estudio de la sensibilidad antibiótica Concentración mínima inhibitoria (CMI): Mínima concentración del antibiótico que inhibe el crecimiento bacteriano in vitro Métodos Sistema disco placa: Utiliza discos impregnados que se ponen en un medio sólido Sistema microdilución: Utiliza concentraciones seriadas de antibióticos en cultivos líquidos E-test: Tiras con un gradiente de antibióticos que se ponen sobre un cultivo sólido Detección molecular de genes de resistencia

34 Estudio de la sensibilidad antibiótica

35 Datos clínicos Caso clínico 4: Paciente con sospecha clínica de HIV Varón 25 años Antecedentes de uso de drogas por vía parenteral hace 5 años Asintomático

36 Caso clínico 4: Paciente con sospecha clínica de HIV Detección de anticuerpos Cribado mediante enzimoinmunoensayo (ELISA) Su negatividad descarta la infección salvo en primoinfección (infección muy reciente) Si es positivo siempre hay que confirmar por western Blot y PCR

37 Interpretación de resultados serológicos Exposición al microorganismo Presencia de anticuerpos en el suero del paciente Diagnóstico de infección aguda: Detección de IgM Seroconversión Al cuantificar dos sueros del paciente separados 3-4 semanas se observa un incremento importante de la cantidad total de anticuerpos El suero en fase aguda puede ser negativo

38 Interpretación resultados serológicos