BUSQUEDA DE ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA EN EXTRACTOS DE ESPONJA MARINA Aplysina gerardogreeni.

Transcripción

1 UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR ÁREA DE CONOCIMIENTO DE CIENCIAS DEL MAR DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MARINA LAB. FARMACOGNOSIA MARINA BUSQUEDA DE ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA EN EXTRACTOS DE ESPONJA MARINA Aplysina gerardogreeni. García Corona José Luis, García Castañeda Blas y R. Blanca González Chan Tuxpan, Ver.; 28 y 29 de Agosto de 2012

2 Durante las últimas décadas, se ha dado un incremento importante en la investigación de compuestos naturales, la obtención de sustancias orgánicas con actividad biológica a partir de organismos marinos, ha mostrado su enorme potencial en el campo de la biomedicina,. Las esponjas marinas son una fuente prolífica con un arsenal impresionante de compuestos naturales, cubriendo casi todos los tipos estructurales. Por lo que se han convertido en una de las fuentes más prometedoras de sustancias bioactivas para el desarrollo de nuevos fármacos.

3 General: Obtener fracciones que contengan compuestos con actividad antimicrobiana a partir de un extracto etanólico de la esponja marina Aplysina gerardogreeni, por medio de diferentes técnicas cromatográficas y microbiológicas. Específicos: Formar un criterio de selección de los recursos marinos con potencial biológico y adiestrarse en la metodología empleada en el aislamiento y purificación de los compuestos activos provenientes de un organismo marino.

4 Colecta de la esponja Aplysina gerardogreeni mediante buceo SCUBA entre los 5 y 12m de profundidad en el complejo insular Espíritu Santo y traslado de la muestra al laboratorio de farmacognosia. Ubicación taxonómica de la esponja Búsqueda de información bibliográfica en la UABCS, CICIMAR, CIBNOR, etc. Preparación y Obtención de un extracto EtOH (REDO01EtOH) Pruebas de solubilidad del extracto EtOH disolviéndolo en diferentes mezclas a diferentes proporciones de solventes como MeOH, EtOH, EtOAc, Me 2 CO, Éter, etc. (5 mg de extracto por 1 ml de solvente). Búsqueda de un sistema en gradiente de polaridades por CCF con el cual se obtuviese un buen cromatograma, para lo cual se empezó a probar dos sistemas de solventes: CHCl 3 : MeOH 9:1 y EtOAc:EtOH 9:1. Aplicación de la CC pesando 500mg de extracto disuelto en 1mL de solventes seleccionados anteriormente y homogeneizado en 2g de silica gel, se hizo el montaje en húmedo con Hex puro de la columna cromatográfica con 60g de silica gel mesh, la cual se corrió con la muestra en una relación 1:200 (relación muestra: silica) y el sistema de solventes en gradiente de menor a mayor polaridad. Se colectaron en tubos de ensayo fracciones de 1-2 ml. Unión de fracciones por semejanza polar en matraces bola de 200mL Aplicación de CCF Se pesaron 20mg de cada fracción obtenida para la prueba de actividad antimicrobiana. Estandarizando la densidad celular de B. subtilis con el Nefelómetro de Mc Farland a σ= 0.5 (1.5x10 6 células). Se impregnaron discos de papel filtro No.1 con 2mg de cada fracción que se obtuvo de la CC. Cultivos bacterianos hechos en medio Muller-Hinton incubados por 24h a 37 C. Medición de halos de inhibición en mm después de las 24 de incubación.

5 A partir de los 1900g de esponja A. gerardogreeni colectados se logro obtener una cantidad de 170g de extracto EtOH. De los seis tipos de solventes orgánicos usados en la prueba de solubilidad de la muestra pura solo el sistema integrado MeOH: EtOH (6:4) fue en el que el extracto EtOH se solubilizo por completo Para las CCP se emplearon en total 31 sistemas de solventes diferentes, cada uno de ellos conformado por dos solventes orgánicos diferentes en distintas proporciones cada uno, siendo el más eficiente de ellos el sistema Hex:Me 2 CO (5:5), con el cual fue posible obtener el mejor cromatograma y el que sirvió para establecer el sistema en gradiente de polaridad que se empleo en la CC para el fraccionamiento de las mezclas con los compuestos activos.

6 Sistema de solventes en gradiente de polaridades empleado en CCP y CC Sistema Mezcla de Solventes Proporciones A Hex: Me 2 CO 8:2 B Hex: Me 2 CO 6:4 C Hex: Me 2 CO 5:5 D Hex: Me 2 CO 4:6 E Hex: Me 2 CO 2:8 101 fracciones de 2mL obtenidas de la CC que se unieron por similitud polar en 5 nuevas fracciones. Cromatograma resultante de la aplicación de CCP a las 101 fracciones obtenidas de la CC

7 Sistema Series de Tubos Nuevas Fracciones Obtenidos Obtenidas A 1 a 17 PSA1 B 18 a 34 PSA2 C 35 a 50 PSA3 D 51 a 91 PSA4 E 92 a 100 PSA5 CCP aplicada a las nuevas fracciones obtenidas de la unión de la serie de fracciones que se obtuvieron en la CC.

8 Pruebas de Actividad Antimicrobiana De las cinco fracciones que se obtuvieron por CC del extracto etanólico original de A. gerardogreeni, la fracción PSA2 presento una ligera actividad de inhibición del crecimiento de la colonia de Bacillus subtilis, seguido de las fracciones PSA3 y PSA5. Dicha actividad fue mucho menor a la presentada por el control positivo que se empleo en los bioensayos (extracto de Garambullo) y a los reportados estudios similares a esté hechos por Dimayuga (2003); León (2003) y Muñoz (2004). Prueba de actividad antimicrobiana por MDA de las fracciones obtenidas de la CC.

9 Los estudios en el campo de los bioactivos marinos aún son muy escasos en México, porífera es el phylum que mayor atención ha recibido en los últimos años. En cuanto a la necesidad de nuevos y revolucionarios compuestos para su aprovechamiento en la farmacología y acuicultura, los invertebrados sésiles como las esponjas marinas prometen innovadoras estructuras químicas que puede llegar a convertirse en drogas comerciales para uso en estos campos.

10 Los resultados obtenidos en este experimento muestran claramente que los extractos obtenidos de la esponja marina A. gerardogreeni de La Isla Espíritu Santo, B.C.S. poseen compuestos químicos que inhiben el desarrollo de bacterias como B. subtilis, por lo que resulta interesante continuar con su estudio químico, dirigido a identificar los compuestos químicos específicos causantes de estas actividades inhibitorias en microorganismos bacterianos, los cuales podrían tener un importante potencial en la industria farmacológica. Los productos naturales de origen marino, como un área del conocimiento, podrían ser también una referencia para dar conciencia de la importancia y preservación de nuestra inmensa biodiversidad.

11