UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE QUERÉTARO. Nombre del proyecto: PRESENCIA DE HUEVOS DE HELMINTO EN MUESTRAS DE LODO RESIDUAL. Empresa:

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1 UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE QUERÉTARO Nombre del proyecto: PRESENCIA DE HUEVOS DE HELMINTO EN MUESTRAS DE LODO RESIDUAL Empresa: CENTRO DE SERVICIOS QUIMICOS. Memoria que como parte de los requisitos para obtener el título de: TÉCNICO SUPERIOR UNIVERSITARIO EN QUÍMICA ÁREA TECNOLOGÍA AMBIENTAL Presenta: PAREDES ISLAS SOFÍA Asesor de la UTEQ Asesor de la empresa M. en A. Isela Prado Rebolledo Q. en A. Ma. Guadalupe Flores Montiel Santiago de Querétaro, Qro. Septiembre del 2012.

2 RESUMEN. El uso de aguas residuales para el riego de cosechas es una práctica común en el mundo; esta actividad provee importantes beneficios tanto al suelo como a la productividad agrícola. Sin embargo, representa un importante riesgo para la salud pública como resultado de la potencial dispersión de infecciones parasitarias. Se ha planteado que el agua residual podría ser una potencial fuente de infección. El objetivo de este estudio es identificar los huevos de helminto (H.H.) en una muestra de lodo residual. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud las aguas residuales y los lodos que contengan uno o más huevos de helminto viables por litro/gramo respectivamente representan un riesgo para la salud pública. En resumen todas las muestras evaluadas en este estudio representan un riesgo para la salud pública si son usadas en la agricultura; ya que se observaron y cuantificaron 5 H.H. en cada litro de muestra. En el caso de la muestra de lodo residual utilizada, no era necesaria la aplicación del procedimiento de la norma; ya que se podían observar los huevos de helminto sin el tratamiento de la muestra. Los huevos de helminto observados fueron: Ascaris sp, Himenolepis nana y Trichuris sp. (Palabras clave: QUÍMICA, CALIDAD, HELMINTOS). 2

3 ABSTRACT. The use of waste water for crop irrigation purposes is a common practice throughout the world, providing important benefits to the soil and agriculture productivity. However, this practice represents an important risk to public health as a result of the potential spread of parasitic infections. The waste water could be a potential source of infection. The objective of this study is establish the prevalence of helminthes eggs in sewage and waste water According to the World Health Organization waste water or sewage samples contain one or a more viable helminth egg per L/g respectively is a public health risk. In summary all samples in this study represent a risk for public health. Since observed and quantified helminth eggs in 5 liters of each sample. In the case of the residual sludge sample used, it was necessary to apply the standard procedure, as could be observed helminth ova without treating the sample. Helminth eggs were observed; Ascaris sp, Himenolepis nana y Trichuris sp. 3

4 DEDICATORIAS. Este trabajo está dedicado principalmente al amor de mi vida; mi hijo Emilio, por esa fortaleza que me dio desde el momento en que supe que estaba en mi vientre, por darme esas ganas de luchar día con día y motivarme a esforzarme cada vez más. A mi madre: por ser ese impulso que necesité para demostrar quién soy, contribuyendo incondicionalmente a lograr mis metas y objetivos propuestos. Al brindarme con su ejemplo a ser perseverante y darme la fuerza que me impulsó a conseguirlo. A mis abuelos: porque sólo la superación de mis ideales, me han permitido comprender cada día la más difícil posición; ser madre. Mis valores y mi superación se las debo a ustedes; lo reconozco y lo agradeceré infinitamente. 4

5 AGRADECIMIENTOS. Primero agradezco a Dios: Por darme la oportunidad de vivir, por permitirme llegar a donde estoy y por dejarme seguir luchando por lo que quiero. A toda mi familia; por estar en los momentos difíciles y apoyarme cuando más lo necesité. A mis amigos; que me acompañaron a lo largo del camino, brindándome la fuerza necesaria para continuar y momentos de ánimo; así mismo ayudándome en lo que fuera posible, dándome consejos y orientación. A mi asesora de tesis en la UTEQ, una de las personas que admiro por su inteligencia y conocimientos, la Profesora: Isela Prado Rebolledo a quien le debo el hecho de que esta tesis tenga los menos errores posibles. Gracias por ser tan estricta. A mi asesora de tesis en la Empresa, Química. María Guadalupe Flores Montiel, por la oportunidad que me brindó al realizar mi proyecto en su laboratorio, además de apoyarme en todo lo que necesité. En fin; a todas y cada una de las personas que estuvieron a mi lado en todo el proceso, y que me apoyaron sin condiciones. 5

6 INDICE. RESUMEN ABSTRACT DEDICATORIAS AGRADECIMIENTOS ÍNDICE I. INTRODUCCIÓN II. ANTECEDENTES DEL CENTRO DE SERVICIOS QUIMICOS (CSQ) II.I.HISTORIA II.II. UBICACIÓN DE LA EMPRESA II.III. OBJETIVOS II.IV. POLÍTICA DE CALIDAD III. JUSTIFICACIÓN IV. OBJETIVOS IV.I. OBJETIVO GENERAL IV.II. OBJETIVO ESPECÍFICO V. ALCANCES VI. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA VI.I. HELMINTOS VI.I.I. Características de los helmintos VI.I.II. Clasificación de los helmintos VI.II. IDENTIFICACIÓN DE HELMINTOS VI.II.I. Céstodos VI.II.II. Nemátodos

7 VI.III. HELMINTOS: ENFERMEDADES Y RIESGOS VI.III.I. Mecanismos de afectación VI.III.II. Efectos VI.IV. SITUACIÓN MUNDIAL VI.V. LA SITUACIÓN EN MÉXICO VI.VI. HUEVOS DE HELMINTO EN LODOS RESIDUALES VI.VII. DESCRIPCIÓN DE HELMINTOS POR IMPORTANCIA MÉDICA VI.VII.I. Clase Céstoda VI.VII.II. Clase Nemátoda VI.VIII. TRATAMIENTO VI.IX. MECANISMO DE ACCIÓN DE LOS ANTIHELMÍNTICOS VI.X. ANÁLISIS DE TÉCNICAS VI.X.I Métodos sencillos VI.X.II. MÉTODOS INDIRECTOS O AVANZADOS DE DETECCIÓN VII. PLAN DE ACTIVIDADES VIII. RECURSOS MATERIALES Y HUMANOS VIII.I. REACTIVOS Y MATERIALES VIII.I.I. Reactivos (grado analítico) VIII.I.II. Materiales VIII.II. APARATOS IX. DESARROLLO DEL PROYECTO IX.I. NMX-AA-113-SCFI-1999: TÉCNICA NORMA OFICIAL MEXICANA IX.I.I. Muestreo IX.I.II. Preparación y acondicionamiento de la muestra

8 IX.I.III. Procedimiento X. RESULTADOS XI. ANÁLISIS DE RIESGOS XII. CONCLUSIÓN XIII. RECOMENDACIONES XIV. BIBLIOGRAFÍA XV. ANEXOS ÍNDICE DE TABLAS Tabla No. 1. Frecuencia de helmintiasis en niños de la República Mexicana Tabla No. 2. Distribución de helmintiasis en México

9 I. INTRODUCCIÓN. El reuso de agua residual es probablemente una de las prácticas más antiguas de la humanidad. El uso de aguas negras no tratadas para riego no restringido, constituye una práctica común en las áreas aledañas a las metrópolis de nuestro país. A causa del contacto con alto contenido de patógenos, los agricultores y consumidores están en riesgo de contraer helmintiasis, enfermedades intestinales que representan un serio problema de salud pública. Los síndromes de estas enfermedades son: Diarrea aguda líquida, sin mecanismo inflamatorio, usualmente debida a la acción de enterotoxinas con: Sangre e invasión y proceso inflamatorio, denominada disentería, o bien, Crónica que puede estar acompañada de mala absorción Fiebre entérica por infección invasora. Anemia. Disfagia. Gastritis y atrofia gástrica que pueden estar asociadas a displasias y neoplasias en mucosa gástrica (INDRE, 1993; Kumate et al., 1990). Una cuarta parte de la población mundial ha estado o está infectada con Ascaris lumbricoides u otro tipo de helmintos. En conjunto las helmintiasis intestinales son causa de muerte de alrededor de 100,000 individuos por año y producen cuadros clínicos diversos como anemia, obstrucción intestinal, prolapso rectal y diarrea en el resto de los enfermos (INDRE, 1993). 9

10 Una característica importante de las helmintiasis es que afectan especialmente a las poblaciones con menos de 15 años. En México, del total de la población (97 millones), 10 millones son menores de 5 años y constituyen el grupo de mayor riesgo a los helmintos (Giono et al., 1993). La frecuencia de helmintiasis por Ascaris y Trichuris en niños de la república mexicana se presenta en la siguiente tabla; Tabla No. 1 Frecuencia de helmintiasis en niños de la República Mexicana. HELMINTIASIS LACTANTES PREESCOLARES ESCOLARES (%) (%) (%) Ascariasis Trococefalosis FUENTE: (Tay et al., 1991). El país presenta una amplia diversidad de paisajes, así como niveles socios culturales, mismos que se ven reflejados en las condiciones de salud. Las helmintiasis son enfermedades ligadas a la pobreza, ignorancia e insalubridad. En la actualidad el 20.6 % y el 26.4 % de las viviendas carecen de agua entubada y drenaje respectivamente (Giono et al., 1993). Una estrecha relación entre las infecciones gastrointestinales por helmintos, debido a las condiciones deplorables existentes en los países en desarrollo. 10

11 En cuanto al tipo de helmintiasis la distribución, es como se muestra en la tabla siguiente; Tabla No. 2 Distribución de la helmintiasis en México. HELMINTIASIS PORCENTAJE Ascariasis 33.3% Tricocefalosis 28.4% Enterobiasis 20.94% Uncinariasis 26.2% Hymenolepiasis 15.87% Teniasis 1.52% FUENTE: (Biagi, 1990* y Tay et al., 1991). Las aguas residuales tratadas son una importante alternativa como una fuente adicional del suministro, particularmente para fines agrícolas, siempre que se cumplan las condiciones que garanticen la conservación tanto de las características minerales como las orgánicas. Además de que cumplan con los niveles microbiológicos de calidad establecidos. II. ANTECEDENTES DEL CENTRO DE SERVICIOS QUIMICOS (CSQ). II.I.HISTORIA. CSQ, es un laboratorio de análisis ambiental que fue fundado en 1984 en la Cd. de Querétaro por el Químico: José Merced Esparza García y el Ing. Carlos Gerardo Zavala Porto, obtuvo su primer acreditamiento en el año de 1996 como 11

12 consecuencia a la inquietud de sus socios fundadores de convertir a CSQ en un laboratorio confiable y a la vanguardia en el estado de Querétaro. Se inició realizando únicamente pruebas en agua y posteriormente se fue incrementando el número de pruebas para cubrir otras áreas como análisis de residuos, emisiones a la atmósfera y medio ambiente laboral. Actualmente, da servicio a empresas no sólo del Estado de Querétaro sino también de Guanajuato, Aguascalientes e Hidalgo. El servicio que presta CSQ a las empresas sirve tanto para control interno de las mismas, como para cumplir con los requerimientos de las dependencias competentes a través de las normas aplicables vigentes. El Sistema de Calidad de CSQ, ha sido evaluado con fines de acreditamiento en cinco ocasiones, en los años: 1996, 1998, 2001, 2004 y II.II. UBICACIÓN DE LA EMPRESA. CSQ, está ubicado en la calle plaza Carmelitas No. 103, Col. Plazas del Sol, en la Cd. de Querétaro, Querétaro. II.III. OBJETIVOS. Aumentar el número de métodos acreditados ante la EMA. Tener la acreditación con los métodos adicionales. 12

13 II.IV. POLÍTICA DE CALIDAD. Es compromiso del personal de Centro de Servicios Químicos, trabajar con ética y profesionalismo, superando los estándares de calidad para satisfacer los requerimientos de nuestros clientes, basados en un proceso de mejora continua, evaluando constantemente el sistema de calidad de acuerdo a los lineamientos de la NMX-EC IMNC III. JUSTIFICACIÓN. Hoy en día en nuestro país, la escasez de agua para uso doméstico e industrial es uno de los retos más urgentes por resolver. Considerando que el riego es una de las actividades de mayor demanda del vital líquido, el reuso para este fin es de sumo interés en el 75% de las zonas áridas y semiáridas del país. En efecto la reutilización de las aguas residuales permite la conservación del recurso, pero debe realizarse en forma tal que no dañe la salud de la población, ni altere el medio ambiente. En el caso de la agricultura, el empleo del agua de desecho tiene la ventaja de aportar nutrientes y materia orgánica al suelo incrementando con ello su productividad. Pero constituye un medio de diseminación de enfermedades. IV. IV.I. OBJETIVOS. OBJETIVO GENERAL. Aplicar la NOM-113-SCFI-1999, para identificar huevos de helminto en muestras de lodo residual, que se llevaron a analizar al Centro de Servicios Químicos. 13

14 IV.II. OBJETIVO ESPECÍFICO. Observar a través del microscopio los huevos de helminto presentes en una muestra de lodo. V. ALCANCES. Identificar los huevos de helminto por medio del microscopio, aplicando la NOM- 113-SCFI VI. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA. VI.I. HELMINTOS. Los helmintos son animales pluricelulares que parasitan al hombre y poseen células organizadas en tejidos y órganos especializados para distintas funciones vitales. Todos son heterótrofos, pudiendo ser hermafroditas o unisexuados (especies dioicas), tienen reproducción sexual. La unión de los gametos termina con la formación de un huevo que contiene al cigoto y vitelo (material nutritivo necesario para el desarrollo embrionario hasta el estadío de larva). Las dimensiones varían de cerca de un milímetro a varios metros de longitud. Poseen órganos diferenciados y sus ciclos vitales comprenden la producción de huevos o larvas infecciosas y la alternancia compleja de generaciones que incluye hasta tres huéspedes diferentes (Biagi, 1990). 14

15 VI.I.I. Características de los helmintos. Aunque los parásitos de Helminto no son estudiados generalmente por los microbiólogos, su presencia en aguas residuales es no obstante de gran preocupación con respecto a la salud humana. El huevo constituye la etapa contagiosa de los parásitos de Helminto; son excretados en las heces y se extienden a las aguas residuales, en el suelo o en los alimentos. El huevo es muy resistente a las tensiones ambientales y a la desinfección con cloro en la planta de tratamiento de aguas residuales. Los helmintos o gusanos pertenecen al subreino de los Metazoarios, lo que denota que son animales multicelulares, en los cuales las células se hayan diferenciadas formando órganos con funciones especiales, y además divididos en dos ramas, los Platelmintos (gusanos planos) y los Nematelmintos (gusanos redondos). Los Platelmintos están subdivididos en dos clases, los Tremátodos (duelas) y los Céstodos (tenias). Los Nematelmintos incluyen la clase Nemátodo, de los cuales algunos son parásitos del hombre; mientras que la mayoría son formas de vida libre o parásitos de los animales y de las plantas. La etapa infecciosa de algunos helmintos es el estado adulto o de larva y en otros la etapa infecciosa es el estado de huevo. Los nemátodos son 22 organismos libres y el estado de larva es su etapa infectiva principalmente para los Ancylostoma, Necator y los stronglyloides. Los huevos y larvas, cuyo tamaño oscila entre 10 μm y 100 μm, resisten condiciones ambientales desfavorables y pueden sobrevivir a los tratamientos convencionales de desinfección de aguas residuales, aunque algunos huevos pueden ser removidos mediante procesos convencionales de tratamiento como sedimentación, filtración y laguna de estabilización. Los huevecillos de Helminto se pueden dividir primero en dos grupos, los que tienen opérculo o tapadera y los que no tienen (No operculados). 15

16 En las aguas residuales el tipo de huevecillos que se pueden encontrar son los No operculados como la Áscaris lumbricoides, Taenia saginata, y Taenia solium. VI.I.II. Clasificación de los helmintos. Los más importantes parásitos helmintos que pueden encontrarse en aguas residuales son las lombrices intestinales, como la lombriz estomacal: Ascaris lumbricoides, Taenia solitaria, Taenia saginata y Taenia solium, los gusanos intestinales Trichuris trichuria, la lombriz intestinal Ancylostoma duodenale y el Necator americanus, y la lombriz filiforme Strongyloides stercoralis. VI.II. IDENTIFICACIÓN DE HELMINTOS. A continuación se describe como identificar algunos Helmintos de la clase de los Céstodos y Nemátodos que son los microorganismos que se encuentran presentes en las aguas residuales. VI.II.I. Céstodos. Taenia saginata. También conocida como taenia de la res. Distribución: es mundial entre la población consumidora de carne de res. Hábitat: vive en la parte superior del yeyuno. Sólo en gusano adulto infecta al humano. 16

17 Parásito: llega a medir hasta 10.5m y tener aproximadamente 2,000 segmentos o proglótides. Taenia solium. También conocida como taenia del puerco. Distribución: es mundial. Se halla entre personas comedoras de carne de puerco. Hábitat: infesta al intestino delgado, y los embriones o cisticercos diversos tejidos incluyendo al sistema nervioso. Parásito: alcanza una longitud como de 3 o 4 m y tiene alrededor de 1,000 segmentos. VI.II.II. Nemátodos. Trichuris trichuria El tricocéfalo, llamado así por su semejanza a un látigo. Su distribución es mundial. El diagnóstico de laboratorio se hace por la identificación de sus huevecillos de forma muy característica en las heces. La hembra mide de 40 a 50 mm por 0.5 mm. Tiene un extremo posterior redondo. El macho es similar a la hembra pero la cola está muy encorvada. Se ha estimado que una sola hembra del gusano Áscaris puede producir hasta 200,000 huevecillos al día. Este gusano es redondo común en el humano. Tiene distribución mundial y habita en el intestino delgado; pero pueden emigrar y aparecer en los orificios 17

18 nasales y en la boca, especialmente después de la administración de los antihelmínticos en las infestaciones masivas. Parásito: es grande y redondo afilado hacia los extremos anterior y posterior, terminando en forma de cono. La hembra es más grande, de 30.5 a 38 cm x 4 mm, contra 25cm x 3 mm del macho, pero hay variación de tamaño. También en ocasiones se expulsan gusanos adultos. Ocasionalmente se pueden encontrar larvas en el esputo durante su emigración. Son Rhabditiformes de aproximadamente 200 a 300 x 15 micras, con el esófago como de una cuarta parte de la longitud del cuerpo. Strongyloides stercoralis Su distribución es mundial, pero prevalece especialmente en los países tropicales y subtropicales. Sólo se ha encontrado que la hembra parasita al humano. Vive en la mucosa del intestino delgado y mide 2 x 0.03mm. Es transparente y filiforme. Los huevecillos maduran a larvas, mientras que todavía están en la pared intestinal Ancylostoma duodenale Habitan en el intestino delgado. Es conocido como el gusano ganchudo del viejo continente; ya que se pueden hallar fácilmente en Europa, África del norte, lejano oriente, China e India. El macho tiene un tamaño de 10 x 0.5 mm y la hembra 12 x 0.6 mm. El extremo anterior esta doblado dorsalmente. Necator americanus 18

19 Este es el gusano ganchudo del nuevo continente, se halla en África central, en centro y Suramérica y el lejano oriente. La hembra es de 9 a 11 x 0.4 mm y el macho de 7 a 9 x 0.3mm. Los huevos de Necator americanus no maduran a temperaturas < 13ºC (es una infección de climas tropicales). Las hembras producen más de 7,000 huevos/día excretados por las heces, que contaminan el suelo (Lambert R. 1975). VI.III. HELMINTOS: ENFERMEDADES Y RIESGOS. VI.III.I. Mecanismos de afectación. Los principales mecanismos de afectación a sus huéspedes son: Por el deterioro mecánico. Por ataque a los tejidos. Por la pérdida de sangre Por producir efectos tóxicos. VI.III.II. Efectos. Los daños mecánicos son tan numerosos como las clases de gusanos. Algunos roen la pared intestinal y provocan hemorragias, mismas que se ven intensificadas por una secreción que impide la coagulación de la sangre (Biagi, 1990). Los daños a los tejidos por inflamación, a causa de las galerías que abren, generan la formación de tumores y excrecencias carcinógenas. Además, los helmintos pueden bloquear ciertos conductos (por ejemplo, los biliares) o provocar 19

20 obstrucción intestinal, perforación de las paredes del conducto digestivo y desarrollar una peritonitis. Adicionalmente, pueden provocar intensa irritación de los tejidos y depositar huevos entre los mismos. VI.IV. SITUACIÓN MUNDIAL. En el año de 1947 Stoll calculó que en el mundo había 2,200 millones de infecciones por nemátodos y que para 1991 habría 5,000 millones de infectados. De igual forma calculó que los habitantes de China producían un total de 18,000 toneladas de huevos de Ascaris al año (INDRE, 1993). En zonas rurales de los países en desarrollo aún se observan cuadros muy serios de prolapso rectal, que cursan con diarrea profusa y disentería causados por Trichuris trichuria, así como melenas (emisión de heces de color negro debido a la presencia de sangre transformada por el proceso digestivo) producidas por Uncinarias y Strongyloides. Debido a la pérdida de sangre se producen severas anemias. Las helmintiasis más frecuentes a nivel mundial son las siguientes: a) Por Céstodos: Himenolepiasis: Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta Teniasis: Taenia solium b) Por Nemátodos 20

21 Ascariasis: Ascaris lumbricoides Tricocefalosis: Trichuris trichuria Uncinariasis: Necator americanus y Ancylostoma duodenale Oxiuriasis: Enterobius vermicularis Estrongiloidosis: Strongyloides stercoralis En especial el Oxiuro tricocéfalo y la Hymenolepis nana son parásitos que se limitan únicamente al intestino del hombre. Todos los demás tienen una fase extraintestinal, que eventualmente puede tener mayor trascendencia patológica (Tay et al., 1991). VI.V. LA SITUACIÓN EN MÉXICO. En México, la falta de infraestructura y tratamiento de aguas residuales y de potabilización de agua está acentuada en las zonas rurales e indígenas, lo que ha generado contaminación microbiana de las fuentes de abastecimiento. Los helmintos son parásitos que representan un elevado riesgo a la salud humana debido a que pueden llegar a infestar el intestino y perforarlo causando la muerte. En el ambiente los helmintos se encuentran en forma de huevos, una vez que llegan al huésped y tras un tiempo de incubación, pasan al estadio infeccioso de larva. Debido a que en sus diversos estadíos infecciosos (huevos embrionados o larvas) son persistentes en el agua contaminada, el agua constituye un vehículo 21

22 directo o indirecto de diseminación de helmintos, aún cuando se encuentren en bajas concentraciones, dando lugar a enfermedades del tracto digestivo. Las estadísticas muestran que al menos uno de cada tres seres humanos se encuentra infectado por estos parásitos. Los métodos de desinfección de agua tradicionales, como la cloración, no son capaces de inactivar a los parásitos debido a la resistencia de éstos a este tipo de tratamientos, mientras que otros métodos como hervir el agua o pasteurizarla resultan imprácticos para la población y con riesgo de recontaminación. VI.VI. HUEVOS DE HELMINTO EN LODOS RESIDUALES. Los procesos de tratamiento de aguas residuales que permiten remover los huevos de helmintos por sedimentación harán que se concentren en el lodo, donde permanecen viables hasta por un año. Todos los demás agentes patógenos que contienen las aguas residuales se concentrarán también en el lodo. Para que el lodo que contiene huevos de helmintos sea inocuo para su uso general, se debe guardar por un período prolongado (por ejemplo, secarse al sol por 6 a 12 meses en una zona de clima cálido). Igualmente se puede someter a alguna forma de tratamiento que eleve la temperatura lo suficiente para eliminar los huevos y, en particular, los de la especie Ascaris, que son los más persistentes de todos los patógenos fecales que contiene el lodo. Puesto que el lodo contiene típicamente más de 90% de agua y se necesita, como mínimo, una temperatura de 55 "grados centígrados" para inactivar los 22

23 agentes patógenos, el tratamiento con calor proveniente de una fuente de energía externa es costoso. Por fortuna, la actividad exotérmica de las bacterias ya presentes en el lodo, se puede utilizar para producir el calor necesario a un costo relativamente bajo. Eso se puede lograr mediante descomposición aerobia del lodo con desechos sólidos municipales u otro agente orgánico que le agregue volumen. VI.VII. DESCRIPCIÓN DE HELMINTOS POR IMPORTANCIA MÉDICA. VI.VII.I. Clase Céstoda. Los Céstodos habitan en el intestino delgado, donde viven sujetos a la mucosa mediante el escólex, órgano morfológicamente variable en función de la especie. Debido a que no cuentan con un sistema digestivo, absorben los nutrientes del huésped. Casi todos los Céstodos tienen cuatro ventosas en el escólex y pueden tener una estructura elongada y protusible. El rostellum está situado en el centro del escólex. Algunas especies presentan ganchos mediante los cuales se sujetan a las paredes intestinales una vez que parasitan algún organismo. Los Céstodos tienen ciclos complejos de vida que requieren un huésped no humano para desarrollarse hasta su etapa de larvas infecciosas. Las cuales al ser ingeridas anidan en el intestino delgado y comienzan a crecer. La infección debida a céstodos adultos se adquiere en forma oral. El transporte entre un huésped y otro es pasivo, ya que las larvas no son móviles. Los huevos de los céstodos varían considerablemente en la apariencia de su pared externa, así como el número y grosor de las membranas embriónicas. Estas membranas sirven como cubiertas protectoras de la oncosfera (embrión) que tiene seis ganchos elongados. 23

24 VI.VII.I.I. Taenia solium. Morfología. Céstodo conocido como "solitaria". Es uno de los pocos parásitos que tiene al hombre como único hospedero definitivo natural. El adulto está conformado por El escólex es cuadrangular o redondo, con cuatro ventosas redondas u ovales y portan en el ápice una doble corona de ganchos, en número de 22 a 23 que miden entre y mm de largo. El estróbilo es de segmentos, que aumentan su grado de madurez a medida que se alejan del cuello, en los que apenas se distinguen los macizos celulares que originarán los genitales masculinos y femeninos que albergan cada segmento, en el caso de los proglótidos maduros se observan los órganos reproductores completamente desarrollados. Los proglótidos grávidos contienen los huevos embrionados. Los organismos en estado adulto llegan a alcanzar una longitud de dos a seis metros. (Lamothe y García, 1988) Ciclo de vida y patogenicidad. Taenia solium causa dos tipos distintos de enfermedad, dependiendo del estado del parásito en el momento de su ingestión. La primera es la cisticercosis, ocasionada por la ingestión de huevos de Taenia solium por medio de alimentos contaminados con materia fecal de una persona infectada o por autoinfección (vía ano-mano-boca). El huevo desciende hasta el intestino delgado donde la capa exterior se desintegra como resultado de un proceso enzimático, las oncosferas resultantes pasan a la circulación y se instalan en el tejido subcutáneo, musculoesquelético, ojo, corazón, hígado, pulmón y encéfalo ocasionando cuadros clínicos muy variables (Martínez, 1986). 24

25 La Segunda enfermedad ocurre cuando los cisticercos (Cysticercus cellulosae) que no han sido inactivados por un cocimiento adecuado de la carne de cerdo parasitada son ingeridos. Las larvas son pequeñas vesículas ovales de 8 a 10 mm de largo por 5 mm de ancho, en su interior contienen un escólex introvertido e invaginado rodeado por un líquido cristalino. Un cisticerco localizado en un sitio crítico del cerebro causa serios trastornos que van desde desequilibrio y parálisis de uno o varios miembros hasta epilepsia, ceguera, hidrocefalia e incluso la muerte. Al morir el cisticerco e iniciarse el proceso de calcificación la sintomatología del paciente se agudiza por la gran producción de antígenos por parte del parásito en descomposición, así como la severa respuesta inflamatoria a su alrededor. Además puede ocasionar dolor abdominal, pérdida de peso debilidad y una intensa sensación de angustia, asco y vergüenza que experimentan los pacientes al estar expulsando proglótidos móviles que se deslizan a través del ano y reptan por su cuerpo. VI.VII.I.II Taenia saginata. Morfología. El rostelo del escólex carece de ganchos, los proglótidos se desprenden fácilmente de la cadena estrobiliar debido a una mejor disposición muscular y reptan por el intestino como gusanos y salen a través del esfínter anal para caer en la ropa interior del paciente o deslizarse por los muslos. La longitud corporal es mayor a la de T. solium midiendo entre 5 y 10 metros, aunque pueden alcanzar hasta 22.5 metros (Kumate et al., 1990). Ciclo de vida y patogenicidad. 25

26 La infección es generalmente asintomática, aunque en ocasiones produce diarrea, dolor abdominal, disminución de peso, alteraciones en el apetito y presencia de proglótidos en materia fecal. No produce cisticercosis en el humano. Los huevos miden de 30 a 40 mm de diámetro. Son de paredes gruesas y radiadas y encierran en su interior al embrión hexacanton u Oncósfera. Se calcula que liberan 700,000 huevos por día. (INDRE, 1993) Los huevos miden de 30 a 47 mm, contienen oncosfera, la cual presenta una envoltura interna con engrosamientos polares y tres pares de ganchos. VI.VII.I.III Hymenolepis diminuta. Morfología. El escólex carece de un rostelo, tiene como intermediarios a las pulgas de perros y del hombre, sus hospederos definitivos más frecuentes son ratas y el ratón. Sus huevos miden 80 mm de diámetro y son de forma esférica con cubierta externa transparente amarillenta. La membrana interna que rodea la oncosfera presenta salientes polares sin filamentos. Presenta seis ganchitos en su interior. VI.VII.II. Clase Nemátoda. La clase Nematoda incluye gusanos con forma cilíndrica con achatamientos en sus dos extremos y cubiertos por una capa protectora o cutícula no segmentada. Su aparato digestivo es completo y cuenta con aberturas oral y anal. Los sexos son separados, existe dimorfismo sexual, siendo el macho más pequeño que la hembra. Sus órganos reproductores son tubulares y se encuentran en forma de espiral dentro de la cavidad corporal. Se calcula que existen aproximadamente 500,000 especies de nemátodos. Muchos tienen importancia desde el punto de vista económico por ser parásitos de plantas, otros 26

27 como causa de enfermedades de animales y una docena o más son patógenos del hombre (INDRE, 1993; Lamothe y García, 1990). A continuación se describen algunos de ellos. VI.VII.II.I. Trichuris trichuria. Morfología. Este Nemátodo es conocido como tricocéfalo por su forma parecida a la de un látigo. Su cuerpo se encuentra dividido en dos porciones, una anterior muy delgada conteniendo el esófago y que ocupa las tres quintas partes de su longitud. Otra, posterior, más ancha y gruesa, en la que se localizan las gónadas. La hembra es ligeramente más grande que el macho, ya que mide entre 30 y 50 mm de largo mientras que el macho mide entre 25 y 45 mm (Lamothe y García, 1990). Una hembra deposita diariamente entre 5,000 y 7,000 huevos en promedio. Los cuales presentan una forma de "barril" o de "bolillo" muy característica. Poseen una membrana vitelina y una cubierta resistente cuya capa externa se tiñe muy bien con pigmentos biliares. Tienen dos prominencias polares obturadas por tapones mucosos translúcidos. Miden de 50 a 54 mm de largo por 22 a 23 mm de ancho (Beer, 1973). No están embrionados en el momento de su expulsión. Ciclo de vida y patogenicidad. El extremo anterior de estos gusanos se encuentra fuertemente anclado en la mucosa intestinal donde se alimenta de células sanguíneas por lo que produce anemia. La porción posterior queda libre en la luz intestinal. A veces pueden presentarse hemorragias crónicas. La triciriasis o tricocefalosis presenta dos tipos de infecciones, las intensas no complicadas, donde los síntomas más 27

28 frecuentes son: dolor abdominal, hiperestesia (sensibilidad excesiva y dolorosa), dolor de cabeza, náusea, vómito, constipación, distensión y fiebre. Además de las infecciones crónicas intensas donde se presenta anemia, sangre en heces, dolor abdominal, pérdida de peso, prolapso rectal y ocasionalmente caquexia (grave estado de debilidad consecuencia de una desamilación superior a la asimilación, particularmente grave en niños, en los que puede causarles la muerte. Con frecuencia Trichuris trichuria se fija a la mucosa del apéndice donde produce una vía de entrada para bacterias patógenas, lo que resulta en una apendicitis. Son muy frecuentes en las áreas rurales con clima tropical húmedo, donde las condiciones sanitarias son deficientes (Kumate et al., 1990, Martínez, 1986). La infección se adquiere al ingerir huevos completamente embrionados los cuales han madurado después de haber permanecido por lo menos 10 días en el suelo. La cubierta es digerida en el intestino delgado y la larva se aloja ahí temporalmente. Después de un periodo de crecimiento, emigran al intestino grueso. VI.VII.II.II. Enterobius vermicularis. Morfología. El macho mide de 2 a 5 mm de largo y a lo más 0.5 mm de ancho, las hembras alcanzan de 8 a 13 mm de longitud y una anchura de 0.5 mm. Ambos son de color blanco amarillento claro. La hembra se distingue por su cola larga, delgada y que termina en punta afilada. Ciclo de vida y patogenicidad. En general habitan en el ciego y porciones aledañas de los intestinos grueso y delgado. Su principal síntoma es el prurito anal que frecuentemente se 28

29 intensifica durante la noche cuando el gusano migra. En las niñas pequeñas cuando llegan a invadir la vagina después de abandonar el recto produce irritación local. Los huevos son infectantes desde el momento de ser expulsados en la materia fecal. Llegan a medir entre 50 y 60 mm de largo y 20 a 30 m de ancho. Su cubierta es delgada y transparente, a través de la cual se puede ver la larva desarrollada y activa. El número depositado por la hembra oscila entre 5,000 y 16,000. VI.VII.II.III. Ascaris lumbricoides. Morfología. Nemátodo de mayor tamaño con cuerpo fusiforme cilíndrico, el extremo anterior romo y el posterior agudo. Su cutícula, de composición química quitinoide y estructuración reticular, varía de blanco lechoso a rosa pálido. La boca, situada en la región cefálica del cuerpo del parásito, se encuentra rodeada por tres labios, uno dorsal y dos ventrolaterales que desempeñan un papel importante en la alimentación. Los machos más pequeños que las hembras miden de 29 a 49 cm de largo y de 3 a 6 mm de ancho (INDRE, 1993; Kumate et al., 1990; Tay et al., 1991). Ciclo de vida y patogenicidad. La Ascariasis crea dos tipos de síntomas: Los ocasionados por los adultos en el intestino y los causados por larvas durante su migración por el cuerpo. 29

30 La gravedad en ambos casos depende de la cantidad de parásitos involucrados en la infección, Cuando el número de adultos es escaso puede ocasionar: Dolor abdominal Meteorismo Nauseas Vómito Trastornos en la digestión Diarrea La migración de larvas ocasiona pequeñas lesiones alérgicas como: Fiebre Urticaria Asma Los casos de Ascariasis que requieren cirugía se deben principalmente a la localización anormal de los adultos en órganos como el riñón, la vejiga, el apéndice, el páncreas, el corazón y el hígado, entre otros. El arrastre de bacterias ocasionado por la migración desde el intestino delgado hasta los sitios que invaden es causa frecuente de infecciones secundarias que a menudo se complican cuando los parásitos mueren y a su alrededor se forman abscesos. Cuando la migración hacia los pulmones se realiza por un gran número de larvas la gravedad del padecimiento se acentúa ya que éstas, al perforar los vasos capilares que las transportan hacia los pulmones para penetrar los alvéolos, producen pequeñas hemorragias que aumentan su flujo cuando las larvas los abandonan. La sangre al confluir en un punto ocasiona la inflamación de extensas zonas del pulmón, que por lo general, va acompañada de fiebre, tos, expectoraciones y eosinifilia (síndrome conocido como Loeffler), durante 7 a 14 30

31 días, después de los cuales, la sintomatología desaparece espontáneamente, aunque en ocasiones puede ser fatal, dependiendo del área del pulmón afectada o en los casos de infección bacteriana secundaria. Si las larvas invaden las cavidades izquierdas del corazón pasan entonces a la circulación general, la que las distribuye en diferentes órganos, como: Ojos Riñones Cerebro La gravedad de la lesión depende de la localización y del número de parásitos que intervengan. En resumen cuando se ingieren los huevos embrionados, estos se adhieren al duodeno para después emigrar por todo el cuerpo y finalmente instalarse en el intestino donde crecen hasta alcanzar su estado adulto. Para lograr este ciclo, la larva atraviesa la pared del duodeno y entra a la corriente sanguínea, pasa por el corazón llegando a la circulación pulmonar y penetra los bronquios. Los áscaris crecen instalándose por 10 días en los alvéolos, para después emigrar subiendo por la tráquea, para ser tragado nuevamente hacia el esófago y finalmente morar en los intestinos. La abundancia de larvas ocasiona obstrucción intestinal y en los pulmones puede provocar neumonía (Biagi, 1990; INDRE, 1993, Kumate et al., 1991) Para el caso de Ascaris lumbricoides se observan dos tipos de huevos, fértiles e infértiles. Los primeros son ovalados, poseen una cápsula gruesa y transparente formada por tres capas: la interna o membrana vitelina de consistencia lipoide, la media derivada del glucógeno y la externa albuminoidea con mamelones múltiples. En su interior contienen una masa amorfa de citoplasma. Los huevos miden de 40 a 80 m de largo por 25 a 50 m de ancho. (Ayres, 1989). 31

32 Los huevos infértiles son más largos y estrechos, no tienen membrana vitelina, la cubierta es muy delgada y generalmente carecen de mamelones. Miden de 80 a 90 m de longitud y 30 a 40 m de ancho. La hembra en estado adulto puede liberar hasta 27, 000,000 de huevos durante los 10 a 24 meses que tienen de vida. Se calcula que cada ovoposición es de 200,000 huevos diarios (Ayres, 1989). Menores cantidades de Ascaris ssp dan lugar a cólicos y dolor abdominal frecuente. Si se ingieren alimentos irritantes o algunos farmacéuticos, los Ascaris se irritan y emigran hacia el apéndice, a los conductores biliares bloqueando la entrada a la vejiga o al hígado, o a la cavidad peritoneal. También pueden llegar al estómago para ser vomitados, o bien, subir por los conductos nasofaríngeos para salir por las fosas nasales y, en ocasiones, por el ano. VI.VII.II.IV Necator americanus. Este Parásito fue introducido en América con la llegada de esclavos africanos y se le conoce con el nombre de uncinaria americana. Se estima que el número de infectados a nivel mundial oscila entre 580 y 700 millones (Lamothe y García, 1988). En México, la zona endémica se localiza en, las costas del Pacífico y del atlántico, aunada a la periferia de varios estados del Sureste. La prevalencia de Necator americanus es del 66% en lactantes, 86% en preescolares y 94% de los escolares (Biagi, 1990). Morfología. En estado adulto presentan forma cilíndrica, fusiforme. Su extremo anterior es arqueado en sentido opuesto de la curvatura general del cuerpo. Son de color blanquecino o rojizo. La cápsula bucal está provista de dos pares de placas 32

33 cortadoras y de cuatro lancetas triangulares conectadas a dos glándulas secretoras de anticoagulantes. Además presentan una fuerte y musculosa faringe cuyas contracciones permiten succionar la sangre del intestino del hospedero. Existe dimorfismo sexual, los machos son más pequeños y delgados que las hembras, miden entre 9 y 13 mm de largo por 0.35 a 0.40 mm de diámetro. Ciclo de vida y patogenicidad. Los huevos depositados por la hembra y una vez que se encuentre en condiciones ambientales favorables (suelos sombreados y húmedos, ricos en oxígeno y abundante materia orgánica), eclosionan en un lapso de 24 a 48 horas para liberar una larva de primer estadio o rabditiforme, que mide entre 0.25 y 0.30mm de largo y se alimenta activamente de material circundante. Al tercer día la larva muda a un segundo estadio o estrongiliforme cuya longitud oscila entre 0.25 y 0.30mm de largo continúa tomando alimento del material circundante y después de 5 u 8 días nuevamente muda a un tercer estadio o filariforme para dejar de alimentarse. Las larvas filariforme, penetran a través de la piel del hombre y son llevadas por el torrente circulatorio al corazón y pulmones, donde atraviesan la membrana alveolo-capilar. Ascienden hasta llegar a la epiglotis para ser deglutidas y pasar al tracto digestivo. La penetración de larvas puede ocasionar leves alteraciones en la piel (denominada maculopapular pruriginosa), que frecuentemente se encuentra entre los espacios interdigitales o en el dorso de los pies, lugar por donde penetran las larvas filariformes. El paso de las larvas por los pulmones, puede producir un cuadro transitorio de bronconeumonía y eosinofilia. Durante la fase intestinal, Necator, lesiona la mucosa y para alimentarse llega a succionar entre 120 y 200 veces por minuto extrayendo 0.03 ml de sangre por gusano en promedio. Se calcula que en una infección masiva la pérdida de sangre en un paciente asciende a 200 ml al día y durante la cual pueden llegar a originar anemias consecutivas. 33

34 Los huevos tienen forma ovalada, miden entre 60 y 76 u de largo por 30 y 40 u de ancho. Una hembra deposita alrededor de huevos diarios, y puede darse el caso de que esté haciéndolo por lo menos durante cinco años. La descendencia de uno de estos gusanos llegaría a ser superior a los 36 millones. VI.VII.II.V. Ancylostoma duodenale. Nemátodo conocido como uncinaria del viejo mundo debido a la frecuencia de las zonas endémicas mundiales. Sin embargo, en México se registro desde Morfología. En estado adulto muy semejantes a Necator americanus. Presentan dimorfismo sexual, los machos más pequeños que las hembras, miden de 8 a 11 mm de largo por 0.4 a 0.5 mm de diámetro mientras que en las hembras es de 10 a 13 mm de largo por 0.6 mm de diámetro. La cápsula bucal se encuentra provista de dos pares de dientes con forma de gancho y por la curvatura de la región cefálica. Ciclo de vida y patogenicidad. El ciclo de vida muy similar al de Necator, con las diferencias de que Ancylostoma produce en promedio huevos, la vía de infección es por la boca y además de una posible autoinfección interna por parte del parásito. Los daños producidos son muy semejantes pero en mayor grado debido a que el volumen de sangre succionada es de 0.15 por gusano al día, de tal forma que una 34

35 infección leve (100 ó 200 gusanos) ocasiona los mismos daños que en una infección masiva por parte de Necator americanus. VI.VII.II.VI. Strongyloides stercoralis. Morfología. Las hembras son filiformes de 2.2 mm de longitud por 20 a 74 m de diámetro. El esófago se encuentra muy desarrollado y ocupa una tercera parte del cuerpo, el extremo posterior es puntiagudo. Los machos son fusiformes y anchos, miden de 0.7 mm de largo por 40 a 50 m de ancho, la porción caudal termina en punta y es curva en su posición ventral. Ciclo de vida y patogenicidad. Este parásito puede infectar al hombre de la misma manera que las uncinarias (Necator americanus y Ancylostoma duodenale), o bien las larvas rhabditiformes pueden madurar en el intestino y convertirse en larvas filariformes, que penetran por el colon o en la piel perional y pasan a la circulación; al llegar al intestino completan el ciclo de maduración tal como lo hacen las uncinarias. Las parasitosis por Strongyloides se caracterizan por presentar síntomas como: diarrea, náuseas, vómito y con menor frecuencia urticaria, asma y pérdida de peso. En casos de infección crónica la sintomatología puede ser intermitente. La invasión del intestino delgado por gusanos adultos produce dolor localizado generalmente en el epigastrio, semejante al de la úlcera péptica, pero a diferencia de ésta, se agrava con la ingestión de alimentos. 35

36 Los huevos son ovoides, transparentes, con cápsula delgada, miden de 55 a 32 m y con la larva desarrollada en su interior. Es difícil su observación en estudios coproparasitoscópicos, debido a que pueden ser atrapados en los tejidos. VI.VII.II.VII. Toxocara spp. Morfología. En estado adulto, se presenta dimorfismo sexual, los machos más pequeños miden de 4 a 10 cm de largo y de 2 a 2.5 mm de diámetro. Las hembras de mayor tamaño miden de 5 a 18 cm de largo y de 2.5 a 3.5 mm de ancho. La boca se encuentra provista de tres labios, cada uno de los cuales presenta dos papilas sensoriales. Se calcula que el 75% de los perros en México se encuentra parasitado por este nemátodo, lo que hace suponer que la infección en el hombre es alta. Ciclo de vida y patogenicidad. Los gusanos adultos viven en el intestino delgado de sus hospederos definitivos (perros o gatos dependiendo de la especie). Después de la fecundación los huevos embrionados salen con las heces y 5 ó 6 días más tarde las larvas tienen la capacidad infectiva. Cuando el huevo es ingerido, la larva eclosiona y viaja por la vía hepato-cardiopulmonar hasta el intestino donde completa su desarrollo. La infección en el hombre denominada granulomatosis visceral o toxocariasis ocurre cuando se ingieren alimentos contaminados con huevos embrionados que eclosionan en el intestino. Sin embargo, la respuesta inmunológica impide que completen su migración normal por el cuerpo, son encapsuladas para formar un granuloma, la patología dependerá de acuerdo a su localización así como del número de larvas involucradas. Sin embargo, los síntomas que se presentan con mayor frecuencia son: fiebre elevada, inflamación 36

37 del hígado, tos, disnea y neumonía, estos últimos ya que las larvas invaden el hígado o los pulmones. También pueden localizarse en los ojos o en el sistema nervioso central (Lamothe y García, 1988). Los huevos llegan a medir entre 85 a 95 m de diámetro. Presentan forma esférica. VI.VIII. TRATAMIENTO. El tratamiento de la helmintiasis requiere de diversas drogas o productos químicos muy eficaces llamados antihelmínticos. Debido a que entre los helmintos, la susceptibilidad a los medicamentos varía mucho no existe en el mercado aquel antihelmíntico eficaz, Por ejemplo aquel producto con mayor eficacia para un género, mientras que en otros ocasiona leves molestias o simplemente no lo afecta. Lo anterior se explica a causa de los mecanismos de afectación de los patógenos. VI.IX. MECANISMO DE ACCIÓN DE LOS ANTIHELMÍNTICOS. El mecanismo de acción de la mayoría de los antihelmínticos es desconocido. Algunos, como la ficina o la papaína, enzimas proteolíticas en látex fresco de higo y papaya respectivamente, dirigen los tejidos de los nematodos al alternar los sistemas enzimáticos. Otros, con mecanismos de efecto lento, posiblemente ejerzan una acción esterilizante destruyendo gradualmente los órganos reproductores, principalmente el ovario, evitando con ello la reproducción (por ejemplo el arsénico utilizado contra las filarias). Posiblemente otros inhiban el metabolismo de la energía oxidante, que como el caso de la cianina se demostró que neutralizaba la respiración en los nematodos. Es importante indicar que un paciente al iniciar la desparasitación debe hacerlo junto con sus contactos (familiares o personas con las que conviva 37

38 durante éste período) y es conveniente una instrucción médica. Además es de suma importancia una buena higiene personal y de la vivienda, el control sobre posibles mecanismos de transmisión en general. Se muestran diferentes tratamientos para las helmintiasis intestinales. VI.X. ANÁLISIS DE TÉCNICAS. Se distinguen básicamente dos tipos de métodos: Sencillos o directos Avanzados o indirectos VI.X.I Métodos sencillos. Se emplean en cualquier laboratorio pues utilizan materiales e instrumentos comunes. Se procesan volúmenes pequeños de muestra (1 a 5 L) y la identificación de los parásitos se efectúa por observación directa al microscopio. Dentro de estos métodos se encuentran: los físicos y los difásicos. Métodos físicos. Son utilizados para la separación del detritus y los huevos de helminto y otro tipo de parásitos. Este método puede ser ejecutado por sedimentación o por flotación (Gaspard and Schwartzbrod, 1995): Sedimentación: cuando el reactivo de dilución es menos denso que los parásitos, éstos se depositan ya sea por la acción de la centrifugación o en forma espontánea. 38

39 Flotación: cuando la solución presenta una densidad igual o mayor que la de los parásitos. Se utiliza para limpiar las muestras de basura e incrementar la eficiencia en la detección. Las soluciones utilizadas son el cloruro de sodio, el sulfato de zinc y el sulfato de magnesio, entre otras. Se recomienda preferir la flotación a la sedimentación pues el detritus o material extraño presente en las aguas de diversas muestras es eliminado (Satchwell, 1986 en Jiménez et al., 1996). Métodos Difásicos. Es la acción disolvente de dos sustancias no miscibles entre sí, y donde la orientación de cada partícula es función de las dos fases de acuerdo conbalance hidrófilo-lipofílico. VI.X.II. MÉTODOS INDIRECTOS O AVANZADOS DE DETECCIÓN. Dan una mejor información sobre el contenido de parásitos. La separación se logra por medio de la filtración de grandes volúmenes de agua con equipo especializado, lo que incrementa su costo. Algunos de estos métodos son. Filtros de lana o cartuchos de estambre: tiene un poro nominal de 1 u y son de forma de cartucho de 10 pulgadas. Se adapta al sistema micro-wynd y pueden filtrar volúmenes grandes. Los parásitos son atrapados debido a que son más grandes que el poro y pueden ser después removidos de las fibras del filtro y procesados en el laboratorio (APHA, AWWA, WPCF, 1992). 39

40 Filtros de membrana de acetato de celulosa: tiene de 8 a 10 m de poro y 25 mm de diámetro. Requieren un procedimiento de deshidratación de la membrana con alcohol y la transparentación con glicerol. Filtros de arena de mar: tienen poros de 13 a 15 m de diámetro. Los huevos quedan retenidos en la arena. Y son separados por medio de lavados sucesivos (APHA, AWWA, WPCF, 1992). VII. PLAN DE ACTIVIDADES. Las actividades efectuadas en el periodo de estadía, se pueden consultar en el anexo A. VIII. RECURSOS MATERIALES Y HUMANOS. Los recursos materiales y humanos necesarios para la realización de este proyecto fueron los siguientes. VIII.I. REACTIVOS Y MATERIALES. VIII.I.I. Reactivos (grado analítico). - Ácido sulfúrico (H 2 SO 4 ); - Alcohol etílico (C 2 H 5 OH); - Agua destilada; - Cloruro de sodio (NaCl); - Éter etílico; - Formaldehído al 4 %; - Hipoclorito de sodio (NaClO) (no aplica grado analítico), y 40

41 - Sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO 4.7H 2 O). VIII.I.II. Materiales. - Aplicadores de madera; - Barras magnéticas; - Bulbo de goma; - Espátula; - Garrafones de plástico inerte con paredes lisas y transparentes de 8 L de capacidad; - Gradillas para tubos de centrífuga de 50 ml; - Guantes de látex; - Mascarilla contra gases y vapores; - Matraz Kitazato; - Pipetas de 10 ml de plástico; - Probetas graduadas de 50 ml y de 1000 ml; - Recipientes de plástico inerte con paredes lisas y transparentes de 2000 ml y 4000 ml de capacidad; - Tamiz de 160 μm (micras) de poro; - Tubos de centrífuga de 200 ml, 450 ml o de mayor volumen según sea la capacidad máxima de la centrífuga; - Tubos de centrífuga cónicos de 50 ml, y - Vasos de precipitados de 1000 ml. VIII.II. APARATOS. - Agitador de tubos, con control de velocidad y adaptable a diversos tubos; - Balanza granataria; - Balanza analítica; 41

42 - Bomba de vacío con control de velocidad de succión; - Campana de extracción; - Celda de Sedgwich-Rafter o cámara de conteo de Doncaster o cámara de Neubauer; - Centrífuga. Capaz de mantener los intervalos de operación de 1000 r/min a 3000 r/min o su equivalente en g; - Densímetro (Hidrómetro). Capaz de mantener el intervalo de medición de 1,0 g/ml a 1,4 g/ml, y temperatura de operación de 0ºC a 4ºC; - Incubadora; - Microscopio óptico. Equipado para hacer iluminación campo claro (Köheler), con aumento de 10 a 100X y platina móvil (opcional); - Parrilla con agitación magnética, y - Refrigerador. IX. DESARROLLO DEL PROYECTO. IX.I. NMX-AA-113-SCFI-1999: TÉCNICA NORMA OFICIAL MEXICANA. IX.I.I. Muestreo. El muestreo constituye una parte integral y fundamental de cualquier programa de evaluación de la calidad del agua, por lo cual, éste debe efectuarse como se menciona a continuación y de acuerdo a lo establecido en las normas mexicanas NMX-AA-003 y NMX-BB-014: - Preparar garrafones de plástico inerte de 8 L, previamente desinfectados con hipoclorito de sodio al 10 % (NaClO). 42

43 destilada. - Lavarlos con agua potable a chorro y enjuagarlos varias veces con agua - Se toman muestras de 5 L (volumen total), en estos garrafones de plástico inerte, los cuales deben ser cerrados y sellados. IX.I.II. Preparación y acondicionamiento de la muestra. - Las muestras deben mantenerse a una temperatura de 4ºC ± 2ºC hasta su llegada al laboratorio. - La muestra debe procesarse dentro de las 48 h después de su toma, o en caso contrario, debe fijarse con 10 ml de formaldehído al 4 %, o bien, preservarse en refrigeración para realizar su análisis antes de 2 meses. IX.I.III. Procedimiento. Los siguientes puntos describen la secuencia del método de prueba, el cual debe realizarse conforme a lo descrito, con el fin de minimizar sesgos en los datos obtenidos. Preparación de soluciones. - Solución de sulfato de zinc (ZnSO 4 ) con gravedad específica de 1,3. Disolver 800 g de sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO 4.7H 2 O) en 1000 ml de agua destilada; mezclar en la parrilla magnética hasta homogeneizar totalmente. Medir la densidad con el densímetro. Ajustar la densidad a 1,3 agregando sulfato de zinc o agua destilada, según sea el caso. 43

44 - Solución de alcohol-ácido. Homogeneizar 650 ml de ácido sulfúrico (H 2 SO 4 ) 0,1 N, con 350 ml de alcohol etílico. Almacenar la solución en un recipiente hermético. Concentración y separación de los huevos de helminto. La recuperación de los huevos de helminto de la muestra se debe realizar efectuando los siguientes pasos: - Dejar reposar la muestra al menos 3 h o toda la noche o centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min. - Aspirar y desechar el sobrenadante por vacío y sin agitar, si la sedimentación (separación) se realizó por centrifugación, decantar lentamente. - Filtrar el sedimento en el tamiz de 160 μm de poro. Lavar el tamiz con 5 L de agua (potable o destilada), y recuperar el agua de lavado junto con el sedimento filtrado. - Colocar el filtrado y el agua de enjuague en el garrafón de 8 L donde originalmente se encontraba la muestra o en los recipientes utilizados en la centrifugación. - Dejar reposar la muestra al menos 3 h o toda la noche o centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min. 44

45 - Aspirar con cuidado el sobrenadante al máximo y desecharlo. Depositar el sedimento en los recipientes para la centrífuga. Enjuagar 3 veces el garrafón perfectamente con poca agua destilada, y colocar en los recipientes para centrifugación. - Centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min. - Decantar nuevamente el sobrenadante por vacío. Asegurarse que en el fondo del recipiente exista la pastilla; en caso contrario, centrifugar nuevamente. Resuspender la pastilla en 150 ml de la solución de sulfato de zinc (ZnSO 4 ). Homogeneizar la pastilla con el agitador de tubos o con un aplicador de madera. - Una vez más, centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min, y recuperar el sobrenadante vertiéndolo en un recipiente de plástico de 2000 ml. Diluir cuando menos en 1000 ml de agua destilada, y dejar sedimentar al menos 3 h, o toda la noche o centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min. - Aspirar con cuidado y al máximo el sobrenadante por vacío, y resuspender el sedimento por agitación, utilizando poca agua destilada. Verter la suspensión resultante en un tubo de centrífuga de 200 ml, incluyendo el agua de enjuague del recipiente y centrifugar a 480 g durante 3 min. - Decantar nuevamente el sobrenadante y resuspender la pastilla con agua destilada en un tubo de 50 ml y centrifugar a 480 g durante 3 min. - Decantar nuevamente el sobrenadante por vacío y resuspender la pastilla en 15 ml de la solución de alcohol-ácido por medio de un agitador de tubos, y agregar 10 ml de éter. Agitar suavemente y de vez en cuando destapar cuidadosamente los tubos para dejar escapar el gas que se desprenda. Por 45

46 seguridad realizar en sitios ventilados utilizando la mascarilla o en la campana de extracción. - Centrifugar una última vez a 660 g durante 3 min. - Aspirar al máximo el sobrenadante, dejando menos de 1 ml del mismo y evitando la pérdida de la pastilla; homogeneizar la pastilla, y proceder a la cuantificación. Por seguridad realizar en sitios ventilados utilizando la mascarilla o en la campana de extracción. Cuantificación de los huevos de helminto. - Para evitar la sobreposición de las estructuras y el detritus no eliminado, repartir la muestra en volúmenes de 0,5 ml a 1,0 ml, con el fin de facilitar la lectura. - Distribuir cada uno en una celda de Sedgwich-Rafter, o bien, en una cámara de conteo de Doncaster o cámara Neubauer. - Identificar visualmente una a una las estructuras, anotando los géneros identificadas con ayuda de la siguiente figura. Cálculos. - Para determinar las revoluciones por minuto (rev/min) de la centrifuga, se utiliza la fórmula siguiente: Rev/min = Kg/r donde: 46

47 g es la fuerza relativa de la centrifugación; K es la constante cuyo valor es 89,456, y r es el radio de la centrifuga en centímetros (cm). La fórmula para calcular g es la siguiente: g = r (rev/min)/k - Expresar el resultado en número de huevecillos por litro, tomando en consideración la expresión en cálculos, o bien expresar el número de huevos contados y el volumen analizado: HL = H 5 donde: H es el número de huevos leídos en la muestra; HL es el número de huevos por litro, y 5 es el volumen de la muestra. X. RESULTADOS. Se analizaron cuatro muestras de lodo residual, que tenían cuatro meses de almacenamiento en el laboratorio, en condiciones de refrigeración. Se aplicó la fórmula que marca la norma (HL = 25 / 5) y se obtuvo 5 H.H. por litro. 47

48 XI. ANÁLISIS DE RIESGOS. Descripción de los riesgos posibles. Riesgos de costo. Sobrepasar los costos previstos por repetición de pruebas. Mala estimación de los costos durante la fase de inicialización. Riesgos de planeación. Sobrepasar el tiempo previsto; debido a falta de experiencia en la realización de la prueba. Falta de asignación de recursos; debido a mala planeación. Mayor prioridad en las actividades a otra tarea. Riesgos tecnológicos. Usar equipo descalibrado. Riesgos operacionales. Falta de liderazgo en el equipo. Falta de comunicación. Falta de motivación del equipo. Riesgos de monitoreo y de implementación. 48

49 XII. CONCLUSIÓN. Después de haber aplicado la norma en la muestra de lodo residual; se llega a la siguiente conclusión: La sobreposición de estructuras y/o detritus no eliminado en el sedimento dificulta la lectura. La falta de experiencia en la identificación de especies es también un elemento decisivo en el conteo y sobreconteo. Para que un laboratorio optimice tiempos, se lleva a cabo la aplicación de la NOM-113-SCFI-1999, con centrifugación. En el caso de la muestra de lodo residual utilizada, no era necesario la aplicación del procedimiento de la norma; ya que se podían observar los huevos de helminto sin el tratamiento de la muestra. El cliente sólo quería conocer el tipo de helminto presente. Sin ser necesario llevar a cabo el procedimiento, la muestra se analizó con un determinado volumen para poder observar con más claridad el tipo de H.H. que se encontraban presentes y así realizar un conteo más confiable. Los huevos de helminto observados fueron: Himenolepis nana y Trichuris sp. Ascaris sp, 49

50 XIII. RECOMENDACIONES. Durante el procesado de la muestra se deben utilizar guantes de látex y cubreboca para evitar cualquier riesgo de infección. Es importante dividir el volumen en las alícuotas que se consideren necesarias, para que no se dificulte la lectura de los H.H. al microscopio. Se debe lavar y desinfectar el área de trabajo, así como el material utilizado por el analista, antes y después del ensayo. Cuando se efectúe la agitación de las soluciones con éter, ésta se debe realizar en sitios ventilados o dentro de la campana de extracción, y considerar su inflamabilidad. Evitar el contacto del éter con los ojos, piel o ropa; ya que es un reactivo sumamente tóxico. Todos los equipos utilizados deben ser calibrados con patrones certificados o ajustados de acuerdo a las especificaciones del fabricante. Todo material desechado debe ser previamente esterilizado o desinfectado con hipoclorito de sodio al 10%. 50

51 XIV. BIBLIOGRAFÍA. - Biagi F., 1990 Enfermedades Parasitarias. Ed. La Prensa Médica Mexicana p. México. - Chandler C. and Read C Introducción a la Parasitología Ed. Omega p. - Cifuentes E., Blumnethal U., Ruiz-Palacios G. Problemas de Salud Asociados al Riego Agrícola con Agua Residual en México Revista Salud Publica de México : Cifuentes E., Blumnethal U., Ruiz-Palacios G. and Benett S., 1994 Escenario Epidemiológico del Uso del Agua Residual: El Valle del Mezquital, México. Revista Salud Publica de México 1: Gaspard G. and Schwartzbrod J., 1995 Helminth Eggs in Wastewater: Quantification Technique. 5-6: Giono C., Escobar G., Valdespino J.L., Manual de Diagnóstico de Laboratorio de Infecciones Gastrointestinales. Publicación Técnica del INDRE No. 22 SSA. - Instituto Nacional de Referencias Epidemiológicos (INDRE), 1993 Diagnóstico Parasitológico. Cap. IV-6, 1-43 p. - Jiménez B., Maya C. y Pulido M Evaluación de las Diversas Técnicas para Detección de los Huevos de Helminto y Selección de una para Conformar la NMX Correspondiente. Informe final para la CNA. - Jiménez B., Muñoz A. y Barrios, J.A Estudio para Fundamentar la Propuesta de Norma Oficial Mexicana en Materia de Tratamiento y Disposición de Lodos Provenientes de Plantas de Tratamiento de Agua Municipales Reporte final elaborado para la Comisión Nacional del Agua. - Kumate J., Gutiérrez G., Muñoz O. y Santos J.I, Manual de Infectológia Ed. Méndez Cervantes p. 51

52 - Lamothe R., García L., 1988 Helmintos del Hombre en México: Tratamiento y Profilaxis. Ed. AGT p. - Martínez M., 1986 Manual de Parasitología Médica Ed. Prensa Médica Mexicana 316 pp. /México. - Tay J., Castrejón O., Aguilera R y Quiroz M., Parasitología Médica Ed. Méndez Cervantes p. - Norma Oficial Mexicana. NOM-PA-CCA-033/93 Que Establece las Condiciones para el Uso de Aguas Residuales de Origen Urbano y Municipal o de la Mezcla de éstas con la de los Cuerpos de Agua en el Riego Agrícola. Diario Oficial de la Federación. Junio 28 de p - NMX-AA-113-SCFI-1999: TÉCNICA NORMA OFICIAL MEXICANA. 52

53 XV. ANEXOS. Anexo A PLAN DE ACTIVIDADES 53

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