VIII. ANEXOS ANEXO I. Protocolo de Extracción de ADN por Buffer G.T. (Guanidil Tiosulfato)

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1 VIII. ANEXOS ANEXO I Protocolo de Extracción de ADN por Buffer G.T. (Guanidil Tiosulfato) 1.- Agrega la muestra del filtro en un tubo con 9000 µl de GT BUFFER, agitar en vortex 2.- Centrifugar a xg por 3 minutos. 3.- Agregar 40 µl de Silica en un nuevo tubo, agitar bien la silica antes de agregarla. 4.- Recuperar 600 µl de la solución sobre nadante en el tubo con silica, se mezcla en vortex. 5.- Centrifugar a xg por 15 segundos (no más de 20 seg.). Luego desechar la solución sobrenadante. 6.- Lavar la silica con 500 µl de GT Buffer. Mezclar en vortex hasta que la silica se resuspenda. 7.- Centrifugar a xg por 15 segundos (no más de 20 seg.). Luego desechar la solución sobrenadante. 8.- Agregar 1 ml de Etanol al 70% para lavar el pellet de Silica. Agitar en vortex hasta que el pellet de silica se re suspenda. 9.- Centrifugar a xg por 15 segundos (no más de 20 seg.). Luego desechar la solución sobrenadante Agregar 50 µl de DEPC H2O, re suspender la silica e incubar la muestra a 55 C por 10 minutos. Agitar en vortex de nuevo y ce ntrifugar a xg por 2 minutos Recuperar 30 µl del sobre nadante y agregar a un tubo pequeño. 42

2 ANEXO II Agua DEPC El agua DEPC es útil en biología molecular, particularmente cuando se va a trabajar con RNA. El término DEPC significa Dietilpirocarbonato, y es una sustancia química que elimina Ribonucleasas, enzimas capaces de degradar el RNA. Se prepara adicionando el compuesto DEPC, 0.01 ml por cada 100 ml de agua. Con el agua DEPC puedes disolver RNA aislado de cualquier tejido, pues esta agua ya no tendrá ribonucleasas que degraden el RNA. FICHA DE SEGURIDAD DEL AGUA DEPC (Dietilpirocarbonato) 43

3 DIETILPIROCARBONATO (DEPC) DESCRIPCIÓN Sinónimos : Dietilo Pirocarbonato - DEPC - Dietilo Oxidiformato - Pirocarbonato de Dietilo - Dietilo Ester, Acido Oxidifórmico - Dietilo Ester, Acido Pirocarbónico. Formula Química : C6H10O5 Concentración : 98.0% Peso molecular : Grupo Químico : Compuesto Orgánico - Ester. Número CAS : Número NU : No regulado. Código Winkler : BM-0650 PROPIEDADES FISICAS Y QUIMICAS Estado Físico : Líquido. Apariencia : Incoloro. Olor : Olor característico a fruta. ph : No reportado. Temperatura de Ebullición : C a 18 mmhg Temperatura de Fusión : No reportado. Densidad (Agua1) : kg/l a 20 C Presión de Vapor : No reportado. Densidad de Vapor (Aire1) : No reportado. Solubilidad : Soluble en Alcohol Etílico, Cetonas y Cloroformo. IDENTIFICACION DE RIESGOS Riesgo Principal : Combustible e Irritante

4 Riesgos Secundarios : Nocivo y Reactivo leves Código Winkler : Rótulo de Transporte: : Norma NFPA EFECTOS DE SOBREEXPOSICION RIESGOS PARA LA SALUD Inhalación : Nocivo. Irritaciones de las membranas mucosas y tracto respiratorio superior. Tos y dificultad respiratoria. Náuseas. Posible edema pulmonar. Altas concentraciones pueden causar depresión del sistema nervioso central y asfixia. Contacto con La Piel : Irritaciones. Enrojecimiento y dolor. Nocivo si llega a absorberse por la piel. Contacto con los Ojos : Irritaciones. Enrojecimiento y dolor. Conjuntivitis y daño a la cornea. Ingestión : Nocivo. Irritación gastrointestinal. Náuseas y dolor abdominal. Vómitos y diarrea. Daños al hígado, riñones y tiroides. DL50 (oral-rata): 850 mg/kg. Otros Efectos Cancerígeno : No hay evidencias. Mutageno : No hay evidencias. Teratogeno : No hay evidencias. Otros Efectos : Dermatitis en la piel expuesta por contacto prolongado. RIESGO DE INCENDIO Condición de Inflamabilidad : Combustible o moderadamente inflamable. Temperatura de Inflamación : 69 C Temperatura de Autoignición : No reportado. Limites de Inflamabilidad : No reportado.

5 Productos de Combustión : Monóxido de Carbono y Dióxido de Carbono. Medios de Extinción : Uso de extintores de Polvo Químico Seco, Espuma Química y/o Anhídrido Car bónico. Aplicar Agua en forma de neblina para enfriar medios contenedores. RIESGO DE REACTIVIDAD Estabilidad Química : Normalmente estable. Incompatibilidades : Agentes Oxidantes fuertes. Acidos fuertes. Bases fuertes. Agentes Reductores fuertes. Amoníaco. Peligro de Polimerización : No ocurre. Productos Peligrosos en Descomposición : Monóxido de Carbono y Dióxido de Carbono. Condiciones a Evitar : Calor, llamas y otras fuentes de ignición (riesgo de incendio). Aire húmero o Agua (se descompone). CONTROL DE EXPOSICION Medidas de Control : Monóxido de Carbono y Dióxido de Carbono. Límite Permisible Ponderado : No regulado. Límite Permisible Absoluto : No regulado. Limite Permisible temporal : No regulado. Otros limites : No establecidos. EQUIPOS DE PROTECCION PERSONAL Ropa de Trabajo : Uso en general, de indumentaria de trabajo resistente a químicos. Protección Respiratoria : Aplicación de protección respiratoria sólo en caso de altas concentraciones amb ientales. Debe ser específica para vapores orgánicos. Guantes de Protección : Utilización de guantes de características impermeables y que no sean atacados po r el producto químico. Lentes Protectores : Uso de lentes de seguridad resistentes contra salpicaduras y proyecciones de la sustancia química. Calzado de seguridad : En general, utilizar calzado cerrado, no absorbente, con resistencia química y d e planta baja. MEDIDAS DE PRIMEROS AUXILIOS EN CASO DE: Inhalación : Trasladar a la persona donde exista aire fresco. En caso de paro respiratorio, emplear método de reanimación ca rdiopulmonar. Si respira dificultosamente se debe suministrar Oxígeno. Conseguir asistencia médica de inmediato.

6 Contacto con la piel : Lavar con abundante Agua, a lo menos entre 10 y 15 minutos. Utilizar de preferencia una ducha de emergencia. Sacarse la ropa contaminada y luego lavarla. De mantenerse el daño, recurrir a una asistencia médica. Contacto con los Ojos : Lavarse con bastante y rápida Agua en un lavadero de ojos, entre 10 y 15 m inutos como mínimo, separando los párpados. De persistir la lesión, derivar a un centro de atención médica. Ingestión : Lavar la boca con abundante Agua. Dar a beber Agua. Control del shock, manteniendo abrigado. No inducir al vómito. Enviar a un servicio de atención médica rápidamente. Nota: Si la lesión sufrida por una persona tiene relación laboral y está cubierta por la Ley Nº de Accidentes del Trabajo y Enfermedades Prof esionales, podrá ser atendida según proceda, por el Servicio Médico asociado a la Asociación Chilena de Seguridad, Mutual de Seguridad C.CH.C., Instituto de Seguridad del Trabajo, Instituto de Normalización Previsional o por la Administración Delegada correspondiente. ALMACENAMIENTO Area de Almacenamiento : Zona de almacenaje general de reactivos y soluciones químicas. Almacenamiento en bodegas y/o cabinas, diseñadas para contener p roductos químicos con seguridad. Lugar frío (refrigerado a 4 C), seco y con buena ventilación. Contar con alg ún medio de contención de derrames. Señalización del riesgo. Código de almacenaje Winkler : Verde Precauciones Especiales : Almacenar separado de condiciones y sustancias incompatibles. Proteger contra el daño físico. Tener los envases cerrados y debidamente etiquetados. PROCEDIMIENTO Contener el derrame o fuga. Ventilar y aislar el área crítica. Alejar de cualquier fuente de ignición. Utilizar elementos de protección personal. Contar con algún medio de extinción de incendios. Absorber por medio de un material o producto inerte. Recoger el producto a través de una alternativa segura. Disponer el producto recogido como residuo químico. Lavar la zona contaminada con Agua. Solicitar ayuda especializada si es necesaria. MEDIDAS PARA EL CONTROL DE DERRAMES O FUGAS DISPOSICION DE RESIDUOS QUIMICOS

7 En general, los residuos químicos se pueden eliminar a través de una alternativa segura, una vez que se acondicionen de forma tal de ser in ocuos para el medio ambiente. Posibilidades: - Ver la posibilidad de recuperar por medio del proceso de destilación u otra alternativa segura. - También, se pueden evaporar en pequeñas cantidades y con precaución bajo campana de laboratorio o tratar en una planta incineradora aut orizada. - En caso de ser autorizado, disolver en Agua en una proporción de 1:20 u otra que sea necesaria y luego eliminar en las aguas residuales o por d esagüe, evitando concentraciones inflamables por riesgo de incendio. Es importante considerar para la eliminación de residuos, que se realice conforme a lo que disponga la autoridad competente respectiva, s olicitándose previamente la autorización correspondiente. INFORMACION REGLAMENTARIA Decreto Nº594 "Reglamento sobre Condiciones Sanitarias y Ambientales Básicas en los Lugares de Trabajo.Decreto N140 AReglamento sobre Prevención de Riesgos ProfesionaleṣNCh 382.Of98 ASustancias Peligrosas - Terminología y Clasificación General.NCh 1411/IV.Of78 APrevención de Riesgos - Parte 4: Identificación de Riesgos de Materiales. NCh 2245.Of93 "Hoja de Datos de Seguridad de Productos Químicos - Disposición y Contenido de los Temas". NCh 2353.Of96 Sustancias Peligrosas - Transporte por Carretera - Hoja de Datos de Seguridad. Ley Nº19300 "Bases Generales del Medio Ambiente". Reglamentación SESMA: Página web: Vigente desde 22/01/2007 version Nº1 Este documento solo podrá ser impreso, no soportando modificaciones, copia, o edición.