Comparación n entre novillas y vacas como donantes de ovocitos para la producción n in vitro de embriones
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- Juana Martínez Torregrosa
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1 Comparación n entre novillas y vacas como donantes de ovocitos para la producción n in vitro de embriones Dpto. de Reproduccion Animal Y Conservación de Recursos Zoogenéticos INIA - Madrid
2 Índice Introducción Materiales y métodos m Diseño o Experimental Resultados Conclusión
3 Introducción n 1 La calidad del ovocito es el factor que mas afecta al rendimiento de blastocistos. (Rizos et al., 2002, 2003) La calidad del ovocito está afectada por: Estado fisiológico y reproductivo de la donante Tamaño folicular Amplitud e integridad de las células del cúmulo (Lonergan et al., 1994; Fair et al., 1995; Leibfried-Rutledge, 1999; Armstrong, 2001, Boland et al., 2001) Los ovarios de vacas proporcionan menos ovocitos que los de novillas. (Zhang et al., 1991; Moreno et al., 1992; Mermillod et al., 1992).
4 Introducción n 2 Los ovocitos de vacas producen mas embriones que los de las novillas. (Galli et al., 2003) En OPU durante 4 años: novillas (n=2.143 sesiones) vacas (n=2.641 sesiones) El número de embriones congelables y transferibles es el doble: vacas (2.5 embriones por sesión) novillas (1.4 embriones por sesión) (Galli et al., 2003)
5 Material y MétodosM Recuperaci ón ecográfica: Mediante punción folicular usando una sonda ecográfica transvaginal (OPU) en animales vivos (Experimento 1).
6 Experimento 1: Diseño Experimental 8 novillas (19-21 meses) 8 vacas (3-5 años; días post parto) OPU 2 veces/semana (5 semanas) Parámetros medida/animal: El tamaño de distribución de los folículos aspirados Número y calidad de los ovocitos recogidos Producción In vitro de embriones/por grupo experimental de animales: Solo son usados los ovocitos de grado 1y 2 para IVM/IVF/IVC Parámetros medi dos por grupo experi mental de animales: Tasa de división a las 48 h post inseminación Producción blastocistos los días 6, 7 y 8
7 Experimento 1: Resultados Tabla 1. Distribución de tamaños foliculares en las novillas y vacas lactantes post-parto. Tipo de Animal Numero Medio de Folículos Aspirados por Animal 2-4 mm 5-7 mm 8-10mm >10mm Novillas Vacas SCI 1.8± ± ± ±0.3 Significación (P) < 0.05 NS NS NS Nueve replicas; SCI: intervalos simultáneos de confianza (Rizos et al, Theriogenology 63: )
8 Tabla 2. Número de folículos aspirados y morfología de los ovocitos en novillas y vacas Frisonas lactantes post-parto. Tipo de Animal No. de folículos aspirados/ animal No. de ovocitos recuperados/ animal Numero de Ovocitos Grado 1-2 Grado 3-4 recuperados/ recuperados/ animal animal Novillas Vacas SCI 2.6± ± ± ±0.7 Significación (P) < < < 0.05 <0.05 Nueve replicas; SCI: intervalos simultáneos de confianza (Rizos et al, Theriogenology 63: )
9 Tabla 3. Capacidad de desarrollo después de maduración, fecundación y cultivo in vitro en novillas y vacas lactantes post-parto Tipo de Animal No. ovocitos Divididos (%) Blastocistos Obtenidos (%) Día 6 Día 7 Día 8 Novillas Vacas Significación (P) Cinco replicas (Rizos et al, Theriogenology 63: )
10 Experimento 2: Diseño experimental 205 ovarios de novillas (menos de 30 meses) 169 ovarios de vacas (4 años) Aspiración manual Parámetros medidos/ por ovario: Número de folículos aspirados Número y calidad de ovocitos recogidos Producción In vitro de embriones por grupo experi mental de animales: Solo son usados los ovocitos de grado 1y 2 para IVM/IVF/IVC Parámetros medi dos/por grupo experimental de animales: Tasa de división a las 48 h post inseminación Producción de blastocistos a los Días 6, 7 y 8
11 Tabla 4. Número de folículos aspirados y morfología de los ovocitos en novillas y vacas cruzadas. Tipo de Animal No. de ovarios No. de folículos aspirados/ovario Numero de Ovocitos Grado 1-2 Grado 3-4 recuperados/ recuperados/ ovario ovario Novillas Vacas SCI -1.85± ± ±1.83 Significación (P) NS NS NS Ocho replicas; SCI: intervalos simultáneos de confianza (Rizos et al, Theriogenology 63: )
12 Tabla 5. Capacidad de desarrollo de los ovocitos después de la maduración, fecundación y cultivo in vitro en novillas y vacas cruzadas. Tipo Animal No. ovocitos Divididos (%) Blastocistos Obtenidos (%) Día 6 Día 7 Día 8 Novillas Vacas Significación (P) Ocho replicas (Rizos et al, Theriogenology 63: )
13 Experimento 3: Diseño experimental ovarios de novillas meses meses meses ovarios de vacas ( 4 años ) Aspiración manual Producción In vitro de embriones por grupo experi mental de animales: Solo son usados los ovocitos de grado 1y 2 para IVM/IVF/IVC Parámetros medi dos/por grupo experimental de animales: Tasa de división a las 48 h post inseminación Producción de blastocistos a los Días 6, 7 y 8
14 Tabla 6. Efecto de la edad de la novilla sobre la capacidad de desarrollo después de la FIV. Tipo de Animal No. ovocitos Divididos (%) Blastocistos Obtenidos (%) Día 6 Día 7 Día 8 Novillas (12-18 m) ab ab 35.0 a Novillas (19-24 m) a a 35.2 a Novillas (25-30 m) a ab 36.5 a Vacas b b 48.3 b Significación (P) Seis replicas a, b Valores en la misma co lumna con diferente superíndices difieren significativamente (P<0.05). (Rizos et al, Theriogenology 63: )
15 Experimento 4: Diseño experimental Ovarios de novillas (menos de 30 meses) Ovarios de vacas ( 4 años) Aspiración manual Producción In vitro de embriones por grupo experi mental de animales: Solo son usados los ovocitos de grado 1y 2 para IVM/IVF/IVC Parámetros medi dos/por grupo experimental de animales: Tasa de división a las 48 h post inseminación Producción de blastocistos a los Días 6, 7 y 8
16 Transferencia cigotos al oviducto de oveja por la fimbria Ligadura del oviducto para evitar la pérdida de ovocitos Catéter para la transferencia de cigotos Recuperación embriones mediante lavado de la fimbria del oviducto o mediante disección del oviducto y lavado en el laboratorio Catéter para la recolección de embriones o Disección de oviducto
17 Tabla 7. tasa de desarrollo de ovocitos de ovarios de matadero de novillas y vacas, cultivados in vitro o in vivo en oviductos de oveja. Origen de los Ovocitos No. Transferidos No. Obtenidos n (%) Blastocistos Obtenidos (%) Día 7 Día 8 Novillas (60.6) Vacas (53.5) Significación (P) Tres replicas (Rizos et al, Theriogenology 63: )
18 Conclusiones Las vacas lactantes durante el post-parto temprano presentan menos folículos en sus ovarios que las novillas, lo cual origina una menor recuperación de ovocitos de buena calidad por animal sometido a la OPU. Independientemente del origen (vacas o novillas) los ovocitos de calidad similar presentan una capacidad de desarrollo igualmente similar. Hay diferencias en la capacidad de desarrollo de los ovocitos obtenidos de vacas y novillas considerando la edad, el metabolismo, el manejo y otros factores.
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