DETERMINACION DE BLEE Muestra 2 / 2015 Bacteriología

Transcripción

1 PEEC DETERMINACION DE BLEE Muestra 2 / 2015 Bacteriología Por: Floridalma Cano - Coordinadora PEEC/Bacteriología

2 betalactamasas de espectro extendido (BLEE) Uno de los mecanismos de resistencias con mayor trascendencia clínica son las enzimas beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE) que por lo general se presenta en bacilos Gram negativos especialmente en Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca. Son el mayor problema actual de resistencia entre las enterobacterias que causan infecciones nosocomiales, pero que también se están aislando en pacientes ambulatorios

3 Que son BLEE? Las BLEE se definen como enzimas capaces de hidrolizar las penicilinas, monobactamicos y cefalosporinas de tercera generación (oxymino-cefalosporinas) como ceftriaxona (CRO), cefotaxima (CTX), ceftazidima (CAZ), y al aztreonam (ATM) Son inhibidas por el ácido clavulánico, sulbactam o tazobactam (inhibidores de beta-lactamasas) Susceptibles frente a las cefamicinas (cefoxitin,cefotetam) y carbapenemicos (imipenem, meropenem,ertapenem)

4 Como se detectan en el laboratorio? Las BLEE de Escherichia coli y Klebsiella spp. se detectan en 2 pasos importantes: 1) Prueba de tamizaje: La resistencia de la cepa al menos a uno de los antibióticos (oxyimino/cefalosporinas ó cefalosporinas 3ª generacion ) que permiten sospechar la presencia de BLEE de acuerdo con las guías de CLSI (ver tabla 1 y 2) 2) Prueba de confirmacion: evalúa la sinergia entre una oxyimino-cefalosporinas y ácido clavulánico. Puesto que la afinidad de las BLEE para distintos sustratos es variable, el uso de más de uno de estos agentes mejora la sensibilidad de detección. Ver los métodos diapositivas CLSI M100-S24 - Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, 2014.

5 PRUEBAS DE DETECCION tamizaje de BLEE) ANTIBIÓTICO DIFUSION POR DISCO MICRODILUCION Cefpodoxima ó 17 mm 8 µg/ml Cefotaxima ó 27 mm 2 µg/ml Ceftriaxona ó 25 mm 2 µg/ml Ceftazidima ó 22 mm 2 µg/ml Aztreonam 27 mm 2 µg/ml Criterios para E. coli y K. pneumoniae Confirmación en todas las cepas en que se observe una reducción de los halos de inhibición o aumento de la CIM Estos criterios son los establecidos antes del 2011 por CLSI

6 PRUEBAS DE CONFIRMACION FENOTIPICAS DE BLEE a) Prueba de sinergia de doble disco (DDST): Es suficiente y adecuado utilizar la pareja cefotaxima ó ceftriaxona y ceftazidima. La distancia entre los discos es crítica y 20 mm a 30mm centro a centro se ha encontrado para ser óptimo para los discos de 30 μg de cefalosporina. (ver diapositiva siguiente)

7 Método del doble disco para la detección de BLEE. Obsérvese el efecto sinérgico (tapón de corcho o distorsión de los halos de inhibición) que se produce entre los discos de ceftriaxona (CRO), cefepime (FEP), ceftazidima (CAZ) y aztreonam (AZM) con el disco central de amoxicilina/ácido clavulánico (AMC). Confirmación de la presencia de BLEE. SINERGIA SINERGIA

8 PRUEBAS DE CONFIRMACION DE BLEE b) Método del Incremento del halo de inhibicion del disco con clavulanato La zona de inhibición alrededor del disco de la cefalosporina combinada con ácido clavulánico se compara con la zona alrededor del disco con la cefalosporina sola. La prueba es positiva si el diámetro de la zona de inhibición es 5 mm más grande con ácido clavulánico.

9 Floridalma Cano Método del incremento del halo de inhibición con clavulanato (resultado positivo) Ceftazidima/ clavulanato Cefotaxima / clavulanato Ceftazidima Cefotaxima Incremento del halo de inhibicion de 5 mm cuando la cefalosporina esta combinada con clavulanato (acido clavulinico)

10 Tabla 1: CRITERIOS ACTUALES PARA LECTURA DE SUSCEPTIBILIDAD PARA LOS ANTIMICROBIANOS A ENSAYAR ANTIMICROBIANO DISCO (mm) MIC (µg/ml) Amoxicilina acido clavulanico S I R S I R /4 16/8 32/16 Amikacina Ceftriaxona ó Cefotaxima Ceftazidima Norfofloxacina Nitrofurantoina Trimetroprim/ Sulfametoxazole / /76

11 Nota: Los criterios de interpretación (tabla1, diapositiva anterior ) informados a partir del 2011 por CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute), para las cefalosporinas (cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima) indican que no se hace necesario los test para BLEE y el de anotar los resultados de cefalosporinas, aztreonam o penicilinas de susceptible a resistente. Sin embargo hasta que los laboratorios implementen estos nuevos criterios deben ser realizados como se indica en la pagina 48, tabla 2A-SI * (ver nota 7, pagina 44)*. VER DOCUMENTOS DE APOYO EN DESCARGA DE DOCUMENTOS *

12 Referencias que se adjuntan M100-S21, : Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty Fifth Informational Supplement CLSI (pagina 43-48) ( panel -changes