y desinfección. Medios de cultivo. Objetivos Métodos de esterilización Definiciones Calor seco Calor seco MECÁNICOS FISICOS: QUIMICOS

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1 Métodos de esterilización y desinfección. n. Medios de cultivo. Curso: Diagnósticos en Fitopatología 17 de setiembre de 2015 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp Objetivos Familiarizarse con los procesos de desinfección y esterilización comúnmente utilizados en un Laboratorio de Fitopatología. Conocer los medios de cultivo más usados. 2 Definiciones Métodos de esterilización Esterilización = proceso mediante el cual se matan o eliminan todas las formas de vida microbiana. estéril o no estéril. Desinfección = eliminar microorganismos patógenos total o parcialmente niveles de desinfección. Asepsia = exclusión continuada de microorganismos contaminantes. 3 FISICOS: Calor seco (llama, horno) húmedo (autoclave) Radiaciones MECÁNICOS Filtración QUIMICOS Gaseosos No gaseosos 4 Esterilización directa en la llama alcohol 96% + mechero 5 6 1

2 alcohol 96% + mechero Horno Horno T ºC Se utiliza para: vidrio seco instrumentos quirúrgicos objetos metálicos aceites, vaselinas y polvos horas Recipientes de metal o envolver en papel (usar temp. menor en este caso) Dejar que vuelva a temp. ambiente antes de abrir Temperaturas: 180 ºC min. 170 ºC min 9 10 Calor húmedo Autoclave Con presión: autoclave, olla presión Para sustancias estables al calor combinaciones reactivos a temp altas? Temperatura presión tiempo Temp Tiempo 20 h 2,5 h 51 min. 15 min. 6,4 min. 2,4 min

3 Autoclave Calor húmedo - Autoclave Presi ón (lb/in.) 5 10 Temperatura interna (ºC) según % aire eliminado 100% 66% 50% 33% 0% cómo optimizar eficacia? eliminar aire, contenidos similares, no apretados, dejar espacios verticales, Precauciones: tapas sueltas, recipientes con hasta 1/3 de volumen, vuelta a presión normal lenta Controles de esterilización Controles de esterilización a. Físicos a. Físicos b. Químicos b. Químicos c. Biológicos 15 c. Biológicos 16 Esterilización química Esterilización por filtrado Ventajas: no requiere altas temperaturas ni aparatos costosos Desventajas: mayor tiempo, sustancias inflamables y muy tóxicos y alto costo Elimina microorganismos >virus Ventaja: no modifica composición Para: cantidades pequeñas Para: vitaminas, hormonas, antibióticos, etc. Requiere bomba de vacío Ejemplo membranas de ésteres de celulosa: 1 uso, poros de 0,22 µm Ejemplos: óxido de etileno, formaldehído

4 CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR Radiaciones UV Desinfección superficial Desinfección superficial 21 Técnicas comunes en Fitopatología: Lavado previo en agua corriente detergente? cepillo? Agua corriente 2 o más horas Alcohol 70% Hipoclorito de sodio: 1% Cloro activo, 2 %, 0,35% etc. minutos enjuague posterior 22 Desinfección superficial Selección de técnica(s) según: tejido: grosor, consistencia hongo a aislar: ej. Oomycetes, Rhizoctonia dónde pensamos que está el patógeno Medios de cultivo 23 4

5 Medios de cultivo Componentes básicos Sólido o líquido? Ajuste de ph Inhibidores de contaminantes : bacterias hongos no deseados Clasificación de medios de cultivo Sintéticos más complicados para elaborar, muchos componentes Naturales raíces y frutos aportan lo necesario para hongos, bacterias necesitan más? Semi-sintéticos Qué aportan los medios? Soporte - Agentes solidificantes: gelatina: fusión a 37ºC, solidifica 25-30ºC, se descompone a ºC agar: fusión a ºC, solidifica a 35-50ºC Carbono orgánico Azúcares inducen crecimiento micelio, pueden inhibir esporulación temporal- o permanentemente. Vitaminas y otros factores de crecimiento Inhibidores Sustancias que permiten diferenciar spp. o biotipos Indicadores 27 Medios comunes para hongos: Agar papa dextrosa (PDA) Agar agua (AA) Agar malta (MA) Agar harina de maíz Agar V8 28 Medios comunes para bacterias: Nutriente agar dextrosa (NAD) Extracto de levadura dextrosa con carbonato de calcio (Yeast Dextrose CaC03 = YDC) B de King Dispensado de medios Temperatura: 45-50ºC mayor: condensa H 2 O menor: solidificación prematura Placas de Petri: aprox. 20 ml c/u Tubos de ensayo: vertical o pico de flauta

6 Página web del Curso /cursos/diagnostico/index.html Material de apoyo: Presentaciones teóricos, material auxiliar, etc. ursos/diagnostico/mat-diagn.html 31 Bibliografía FRENCH, E.R. y HERBERT, T Métodos de investigación fitopatológica. Libros y materiales educativos, nº 43. San José, Costa Rica, IICA. 289p. 632 FREm Vignoli, R. Esterilización, desinfección y antisepsia. cion.pdf Facultad de Medicina, Microbiología Parasitología e Inmunología. ESTERILIZACIÓN, DESINFECCIÓN Y ANTISEPSIA. 20esterilizacion,%20desinfeccion%20y%20antisepsia.pdf 32 6