UNIVERSIDAD NACIONAL DE ASUNCIÓN FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS CARRERA INGENIERÍA AGRONÓMICA

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE ASUNCIÓN FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS CARRERA INGENIERÍA AGRONÓMICA PROYECTO DE INVESTIGACIÓN SELECCIÓN DE CLONES DE POMELO EN LAS ZONAS DE SAN PEDRO Y CONCEPCIÓN INFORME FINAL Investigador Principal: Luis R González Segnana Co-investigador : Nancy V. Villalba Romero DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA DICIEMBRE 2007

2 SELECCIÓN DE CLONES DE POMELO EN LAS ZONAS DE SAN PEDRO Y CONCEPCIÓN Investigador Principal: Luis R González Segnana.(Departamento de Biología FCA/UNA) Co - investigador : Nancy V. Villalba R.(Departamento de Biología FCA/UNA) I. ANTECEDENTES El Paraguay cuenta con condiciones ambientales, tanto de suelo como clima, muy apropiados para la producción de diversas frutas cítricas, entre las especies que pueden desarrollarse satisfactoriamente se encuentra el pomelo (Citrus paradisi Osbeck). El pomelo tiene un origen incierto, aunque algunos estudios recientes parecen indicar que se trata de un cruzamiento natural de naranja dulce y toronja (pummelo) que tuvo lugar hacia 1700 en Barbados, en las Indias Occidentales (Saunt,1991). La producción de pomelo y su distribución son mucho más limitadas que la naranja dulce o la mandarina. El elevado requerimiento de calor limita la producción de la fruta de la mejor calidad a regiones tropicales cálidas y húmedas subtropicales (Hodson,1967, Loussert, 1992, Timmer & Duncan,1999). Una de las principales variedades encontradas en nuestro país esta representado por el pomelo criollo o Duncan, que es un cultivar con semillas que, produce frutos de mayor tamaño y con un contenido más alto de sólidos solubles totales. Por lo cual se utiliza para procesar como jugo ya que la presencia de semillas limita su demanda como fruta fresca en el mercado internacional. (Agusti, 2000). En la zona norte de Paraguay, Concepción y San Pedro se cultivan desde hace mucho tiempo pomelos de esta variedad, existiendo plantas añejas que presentan muy buena producción a más de las preciadas características organolépticas del jugo que dan un excelente rendimiento industrial. (Armadans,2003).

3 La tristeza de los cítricos causada por el virus de la tristeza de los cítricos (CTV - Closterovirus) esta presente en la mayoría de las áreas de producción de cítricos del mundo, siendo una enfermedad de gran importancia económica (Bar-joseph et al.,1989; Lee y Rochapena, 1995). En el Paraguay el CTV se encuentra diseminado en la mayoría de las regiones productoras de cítricos de la región oriental, afectando sobre todo a especies sensibles como el pomelo (Gonzalez Segnana et al., 1997). En el presente trabajo tiene por objetivo dar continuidad al proceso de selección de clones de pomelo que se destaquen por sus cualidades agronómicas en las regiones de San Pedro y Concepción. Además, de caracterizar la severidad de los aislados locales del virus de la tristeza de los cítricos y establecer un banco de germoplasma de los materiales seleccionados para la multiplicación futura a viveristas y agricultores.

4 II. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Seleccionar clones de pie franco de Pomelo (Citrus paradisi) que se destaquen por sus cualidades agronómicas en las regiones de San Pedro y Concepción. OBJETIVOS ESPECÍFICOS Seleccionar clones de pomelo de más de 20 años de edad que se destaquen por su calidad de fruta, vigor y productividad. Caracterizar las estirpes locales Virus de la tristeza de los Cítricos (CTV- CLOSTEROVIRUS) en los clones seleccionados. Multiplicación de estos clones (saneados) para su distribución futura a viveristas y productores.

5 III. PROBLEMÁTICA A RESOLVER La producción de pomelo en las regiones de San Pedro y Concepción representa hoy un rubro importante de venta para las familias campesinas sobre todo por la excelente calidad de fruta obtenida. Esta calidad es posible alcanzar gracias a la cantidad de horas calor y a las condicionas edáficas y climáticas de estas regiones. Sin embargo, en la región no existe ningún trabajo de selección de clones para determinar cuales son los más productivos y adaptados a estas condiciones. En el presente trabajo de investigación, se pretende dar seguimiento a los clones de pomelo Duncan seleccionados en un trabajo previo del mismo equipo investigador. Los parámetros a ser considerados consistirán, en la evaluación de las cualidades agronómicas, en plantas localizadas en estas regiones del país. Estos materiales constituyen los clones que pueden ser multiplicados por injerto, y posteriormente, servir de material de propagación en toda la región y en otras regiones con la misma capacidad productiva.

6 IV. MÉTODOS UTILIZADOS A. Selección de clones de pomelo que se destaquen por sus características agronómicas. La selección de clones viejos consistía en la observación de clones adultos, plantas con más de 20 años, de plantas comercialmente importantes con buenas características agronómicas (calidad de fruta, vigor, longevidad, época de producción), sanidad, productividad y edad de la planta. Las plantas seleccionadas en trabajos previos se hallan ubicadas en las zonas productoras de cítricos de Concepción y San Pedro, con base a datos proveídos por agricultores y acopiadores de pomelo de la empresa Frutika (mayor acopiador de pomelo del país). De las plantas seleccionadas se procedió a la colecta de 10 a 15 varetas para la obtención de yemas para su multiplicación en los viveros experimentales de cítricos del Departamento de Biología (FCA/UNA). Igualmente se procedió a colectar ramas de mas 18 meses para el análisis de CTV (canales en el Leño), asimismo se colectaron de 10 a 15 frutas por planta para el análisis posterior en los Laboratorios del Departamento de Biología (FCAUNA). Los materiales fueron codificados y numerados con las siglas CN para las plantas correspondientes al Departamento de Concepción y SP para el Departamento de San Pedro. Cada colecta fue enumerada registrándose los datos del productor como localización de la finca, sanidad de las plantas, producción anual pasada y presente de acuerdo a datos del productor y de los acopiadores. El análisis de calidad de fruta se realizó con las siguientes determinaciones: a. Tamaño: se midió el diámetro y altura de las frutas utilizando un escalímetro Vernier. Con estos datos se estableció la relación altura diámetro. Además se midió el grosor de la cáscara y se contaron los gajos contenidos en cada fruta. b. Peso: con la ayuda de una balanza electrónica se pesaron el fruto entero, la cáscara y el jugo, estableciéndose a su vez los porcentajes de cáscara y jugo respectivamente.

7 c. Calidad del jugo: se determinó el índice de acidez utilizando Na OH 0,1 N y fenoftaleína para la titulación ácido base. Así mismo se determinó el grado Brix (sólidos solubles totales) con un Refractómetro. B. Estudio de Severidad del CTV en los clones seleccionados. Para determinar la severidad de los aislados se procedió a la evaluacion de los canales en el leño (stem pitting) y por pruebas biológicas con indicadoras sensibles al virus: B.1) Evaluación de canales en el leño: Para determinar el grado de severidad del virus de la tristeza de los cítricos se utilizó el método propuesto por Corazza-Nunes et al, 2006, donde fueron seleccionadas ramas de mas de 18 meses de edad de diferentes partes de la planta y examinadas para determinar la presencia de canales en la madera (xilema). Se procedió a pelar las ramas obtenidas de todas las plantas y cortarlas en aproximadamente 15 cm de longitud, posteriormente fueron etiquetadas y numeradas. El rango utilizado fue de 0 a 5 donde 0 = sin canales en el leño. 1 = 1 a 15 canales en el leño. 2 = 16 a 30 canales en el leño. 3 = 31 a 50 canales en el leño. 4 = 51 a 80 canales en el leño. 5 = toda la rama esta cubierta por canales en el leño. B:2)Pruebas Biológicas: Para evaluar la severidad de las estirpes presentes en las selecciones de pomelos se utilizó como planta indicadora al Limón Sutil (Citrus aurantifolia Christm. Swing. Obtenidos de la casa de mallas antiáfidos del Departamento de Biología de la FCA/UNA. Se procedió al injerto de 3 yemas de cada clon estudiado sobre portainjertos vigorosos de Naranjo Agrio (Citrus aurantium L.) sembrados en macetas plásticas en invernaderos protegidos, cada clon fue injertado en un numero mínimo de cinco plantas. Una vez que las yemas de pomelo brotaron y alcanzaron una longitud mínima de 10 cm se procedió al injerto lateral de varetas de 10 cm de longitud de limón sutil en la parte apical de los portainjertos, de modo a observar los síntomas del CTV en las nuevas brotaciones durante un periodo de 6 meses posteriores al injerto.para clasificar los síntomas del CTV en la planta indicadora se utilizo la escala propuesta por Carballo et al, 1997, que establece que los síntomas de Clorosis nervial pueden ser clasificados en la siguiente escala: - Suaves: (trazos muy débiles de clorosis nervial) ( + ). - Severas: (clorosis de las venas) (++)

8 - Muy severas: (clorosis nervial inclusive hasta formar suberizacion de las nervaduras) (+++) Cada evaluación de las brotaciones de la indicadora se realizó en forma minuciosa a contra luz para la percepción de los síntomas. C. Conservación y multiplicación de clones seleccionados en el campo experimental de la Facultad de Ciencias Agrarias. En el Campo Experimental de la Facultad de Ciencias Agrarias (San Lorenzo), son mantenidas las plantas seleccionadas injertadas en Limón volkameriano, Citrumelo Swingle y Naranja Agrio, las mismas continúan siendo observadas en cuanto a su comportamiento. Estas plantas permiten contar en forma permanente con material vegetal para su distribución futura a viveristas y productores. V. RESULTADOS Con el objeto de dar seguimiento al proceso de selección de clones de pomelo en las zonas productoras de los Departamentos de Concepción y San Pedro, se realizaron viajes de colecta de material por parte del equipo técnico del proyecto. A. Selección de clones de pomelo que se destaquen por sus características agronómicas. Considerando las características agronómicas de las plantas de pomelo se evaluaron 13 clones en el Departamento de San Pedro (SP) y 12 clones en el Departamento de Concepción (CN). De las plantas seleccionadas se colectaron de 10 a 15 varetas; ramas de más de 18 meses, igualmente se colectaron de 10 a 15 frutas para su análisis. Las yemas fueron injertadas en plantas de Naranjo Agrio, Limón volkameriano y Citrumelo Swingle preparadas a tal efecto en el Campo Experimental de la Facultad de Ciencias en San Lorenzo. Las frutas cosechadas se utilizaron para el análisis de calidad, donde se procedió a cuantificar el tamaño y peso de las frutas, la cantidad de jugo y su calidad (grado Brix y acidez), parámetros importantes para la selección de variedades promisorias. Los resultados de estos análisis son presentados en los cuadros 1 y 2.

9 Cuadro 1: Análisis de Calidad de Frutas de Pomelo seleccionados en el Departamento de Concepción. Mayo Fruto Peso Tamaño Diam Alt. A/D Fruto Cas. % Jugo %jugo Cas. Gajos Brixº Acidez. cas.. Ratio CN , , , ,0 1,62 6,17 CN , , , ,2 1,70 5, ,99 464,5 241,5 51,95 203,5 43,88 4,5 13 9,6 1,66 5,79 CN , , , ,8 1,28 6,88 CN , , , ,32 5, , ,5 56,02 198,5 40, ,9 1,30 6,09 CN , ,31 251,0 35, ,4 1,46 5,75 CN ,88 528, , , ,6 1,26 6, ,91 615,5 358,5 57,74 235,0 38,59 7,5 13,5 8,5 1,36 6,29 CN , , , ,38 5,80 CN , , , ,70 4, , , , ,5 8 1,54 5,25 CN , , , ,4 1,40 5,29 CN , , , ,8 1,34 6, ,91 475,5 276,5 58,98 230,5 49,11 7,5 11,5 8,1 1,37 5,93 CN , , , ,76 5,68 CN , , , ,8 4, ,97 567,5 323,5 56,98 239,5 42,26 7, ,78 5,06 CN , , , ,4 1,58 5,95 CN , , , ,68 4, , , ,57 7,5 10,5 8,7 1,63 5,36 CN ,91 525,3 311,5 59,30 176,5 33, ,2 1,5 6,13 CN 8 10,5 10,3 0,98 531,8 323,8 60,89 186,3 35, ,6 1,38 6,96 10,8 10,2 0,95 528,6 60,09 60,09 181,4 34, ,4 1,44 6,54 CN , , , ,5 6,00 CN , , , ,62 4, ,99 616, ,60 241,5 39,13 7,5 11,5 8,5 1,56 5,47 CN , ,46 236,0 42, ,6 1,26 6,83 CN ,03 572, , , ,46 6, ,99 566,0 310,5 54,85 235,0 41,53 8,5 11 8,8 1,36 6,49 CN , , , ,2 1,34 6,87 CN , , , ,4 1,38 6, , ,95 189,5 35, ,5 8,8 1,36 6,48 CN , , , ,4 1,54 5,45 CN , , , ,4 1,68 6, ,95 466, , , ,5 9,4 1,61 5,82 Las características analizadas mostraron resultados similares en cuanto a la calidad de las frutas, los cuales se deberían al origen mismo de las plantas que son de semillas, además se corresponden a las características propias de la variedad Duncan, pomelo blanco con

10 semillas. Por esta razón las plantas seleccionadas son mantenidas en el campo experimental a fin de seguir evaluando sus características agronómicas. Cuadro 2: Análisis de Calidad de Frutas de Pomelo seleccionados en el Departamento de San Pedro. Junio Fruto Peso Tamaño Diam. Alt. A/D Fruto Cas. % cas. Jugo %jugo Cas. Gajos Brixº Acidez. Ratio SP , , , ,4 1,3 6,46 SP , , , ,12 7, , ,16 303,5 38,69 8,5 12 8,2 1,21 6,80 SP ,91 685, , , ,2 1,3 7,08 SP , , , ,28 7, ,94 668,0 277,5 41, , ,5 9,1 1,29 7,05 SP , , , ,6 1,82 5,27 SP , , , ,2 1,68 5, ,94 640,6 293,9 46,15 319,6 49, ,4 1,75 5,38 SP , ,61 219,0 41, ,6 1,82 5,27 SP ,96 522, , , ,4 1,82 5, ,96 524,0 277,5 52,96 222,0 42,37 7,5 10,5 9,5 1,82 5,22 SP , , , ,0 2 4,50 SP , , , ,6 1,36 6, , ,95 294,5 46, ,5 8,8 1,68 5,41 SP , , , ,8 1,12 7,86 SP , , , ,8 1,28 6, ,95 623,5 314,5 50, , ,5 8,8 1,20 7,37 SP , , , ,6 1,10 7,82 SP , , , ,4 1,03 8, , , , ,5 1,07 7,99 SP , , , ,2 1,34 6,12 SP , , , ,2 1,38 6, , ,85 256,5 44,70 6,5 11,5 8,7 1,36 6,39 SP , , , ,64 4,88 SP , , , ,2 1,24 8, , , , ,5 9,1 1,44 6,55 SP , , , ,8 6,11 SP , , , ,50 98,5 87,5 0, ,5 45,29 221,5 49,97 5, ,9 5,31 SP , , , ,8 1,42 6,20 SP , , , ,8 1,44 6, ,03 604,5 348,5 57,54 233,5 38,72 9,5 11,5 9,3 1,43 6,50

11 B. Estudio de Severidad del CTV en los clones seleccionados. En el Departamento de Concepción: las 12 plantas seleccionadas en la zona de Concepción fueron evaluadas de acuerdo al método propuesto. Los resultados se presentan en el cuadro 3. Cuadro 3: Resultados obtenidos del análisis de Canales en el Leño y Pruebas Biológicas en los Clones seleccionados en el Departamento de Concepción Clones seleccionados Localidad/Distrito CTV/Severidad Canales en el Leño Pruebas biológicas CN-1 Arroyito/Horqueta 0 + CN-2 Arroyito/Horqueta 0 + CN-3 Tacuara/Horqueta 0 + CN-4 Tacuara/Horqueta 0 + CN-5 San Antonio/Horqueta 0 + CN-6 San Antonio/Horqueta 0 + CN-7 Calle 13/Horqueta 1 + CN-8 San Ignacio/Horqueta 0 + CN-9 San Ignacio/Horqueta 1 + CN-10 Calle 12/Horqueta 0 + CN de Abril/Horqueta 0 + CN-12 Calle 11/Horqueta 0 + *Media de cuatro repeticiones Solamente los clones CN 7 y CN 9, seleccionados en el Departamento de Concepción presentaron canales muy leves que corresponden al rango 1 de la escala utilizada. Los demás clones estudiados presentaron canales en el leño. En el Departamento de San Pedro: las 13 plantas o clones seleccionados no presentaron canales en el leño o xilema, según la escala establecida en el método de evaluación, cuyos resultados se muestran en el Cuadro 4.

12 Cuadro 4: Resultados obtenidos del análisis de Canales en el Leño y Pruebas Biológicas en los Clones seleccionados de pomelo criollo en el Departamento de San Pedro. Clones seleccionados Localidad/Distrito CTV Severidad* (Canales en el leño) Pruebas biológicas SP-1 Naranjaty/Santa Rosa 0 + SP-2 Santa Teresa/Barbero 0 + SP-3 Santa Teresa/Barbero 0 + SP-4 Onari Barbero 0 + SP-5.1 Barbero 0 + SP-5.2 Barbero 0 + SP-6.1 Barbero 0 + SP-6.2 Barbero 0 + SP-7 Barbero 0 + SP-8 Barbero 0 + SP-9 Patiño/Barbero 0 + SP-10 Santa Catalina/Barbero 0 + SP-11 Barbero 0 + *Media de cuatro repeticiones C. Conservación y multiplicación de clones seleccionados en el campo experimental de la Facultad de Ciencias Agrarias. Con el objeto de evaluar el comportamiento de las variedades seleccionadas se procedió al injerto de las mismas en Limón volkameriano, Citrumelo Swingle y Naranja Agria, en el Campo Experimental de la Facultad de Ciencias Agrarias. Estas plantas permitirán también contar en forma permanente con material vegetal para su distribución futura a viveristas y productores.

13 VI. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS Se seleccionaron 13 clones de Pomelo en el Departamentos de San Pedro y 12 clones en Concepción respectivamente. Todos los clones seleccionados demostraron ser promisorios tanto en lo que respecta a la calidad de sus frutas (cuadro 1 y 2) como a las características agronómicas de las plantas observadas en el campo. Las estirpes de CTV detectadas en los clones de pomelo criollo en los Departamentos de Concepción y San Pedro resultaron ser suaves o débiles. Estos resultados en suma a las condiciones ecológicas apropiadas para su cultivo, posibilitan obtener plantas con un optimo desarrollo y por ende frutas de excelente calidad. VII. CONCLUSIÓN En las regiones de Concepción y San Pedro se pueden obtener excelente calidad de frutas. Fueron seleccionados 25 clones en total, 13 en San Pedro y 12 en Concepción, todas ellas con muy buena calidad de fruta de acuerdo con los análisis realizados. Estos clones podrían convertirse en las futuras plantas madres para toda la región, atendiendo que las frutas son de excelente calidad y las estirpes presentes de CTV son muy suaves o débiles. Se debe de evitar introducir yemas de pomelo de otras regiones que podrían ser portadoras de estirpes más fuertes que comprometerían el desarrollo de futuros cultivos. Son necesarios estudios complementarios de por lo menos tres años a modo de lograr realizar una mejor caracterización de las estirpes locales de CTV, de la calidad de fruta y de la productividad de las plantas.

14 VIII. BIBLIOGRAFÍA 1. Agusti, M Citricultura. Mundi-prensa. 416 p. 2. Armadans, A Cultivo de Cítricos. Facultad de Ciencias Agrarias. UNA. 70 p. 3. Armoa, F Severidad de aislados preseleccionados del virus de la tristeza de los cítricos. Tesis (Ing. Agr.). San Lorenzo, Py: Carrera de Ingeniería Agronómica. FCA.UNA. 27 p. 4. Bar Joseph, M. and R.F. Lee Citrus Tristeza Virus. Association of Applied biologist Nº 353 (Nº 33 revised): Cambra, M.; Gorris, M.T.; Marroquin, C.; Román, M. P., Olmos, A.; Martínez, M. C.; Hermoso de Mendoza A.; López, A.; Navarro, L Indicence and epidemiology of Citrus tristeza virus in the Valencian Community of Spain. 6. Carvalho, S.; Machado, M.; Baptista, C.; Muller, G.; Silvero, J Caracterizacao biológica dos isolados do virus da tristerza do citros. Fitopatología Brasileira (BR). 22: Corazza-Nunes, M.; Machado, M.; Stach-Machado, D.; Carvalho, W.; Carvalho S.; Muller, G Caracterzation of Citrus tristeza virus isolates from grapetruit (Citrus paradisi Macf.) accessions of Ctrus Active Germplasm Bank. Summa Phytopathol, 32 (4), p Costa, A.S. y G.W. Muller Tristeza Control by Cross Protection a US_Brazil Cooperative success. Plant Disease, 64 (6): Fulton, R.W Practices and Precautions in the use of Cross Protection for Plant Virus Disease Control. Ann. Rev. Phytopathology 24: Figueiredo, J. O Avaliacao de ocorrencia de tristeza em variedades de cítricos. Rev. Bras. Frut., Cruz das Almas, v 14, n. 1, p Garnsey, S.M., R.F. Lee, C.O. Youtsey, R.H. Brlansky, H.C. Burne1980. A survey for Citrus Tristeza Virus in registred budwood sources commercially propagated on sour orange rootstock in Florida. Pro. Flo. State Hort Soc. 93: González S., L., Villalba R., N., Armadans R., A., Shohara, K., Timmer, L. Incidence of Tristeza and other Citrus Diseases in Paraguay. Proc.Fla. Sta. Soc. 110: Hodgson, R. W. Horticultural varieties of citrus In: REUTHER, W., WEBBER, H.J., BATCHELOR, L.D. (Eds.). The citrus industry. Berkeley. University of California, v. 1, p

15 14. Karasev, A.V.; Boyko, V.P.; Gowda, S; Nicolaeva, O.V.; Hilf, M.E.; Koonin, E.V.; Niblett, C.L.; Cline, K.; Gumf,D.J.; Lee, R.F.; Garnsey, S.M.; Lewandowsky, D.J. y Dauson, W.O., Complete sequience of the Citrus tristeza virus RNA genome. Virology 208: Loussert, R Los Agrios. Mundi-prensa.320 p. 16. Muller, G.W A Tristeza dos Citros. Summa Phytopathologica 2: Muller G.W Use of Mild Strains of Citrus Tristeza Virus (CTV) to restablish commercial production of Pera Sweet Orange in Sao Paulo, Brasil. Pro. Fla. State Hort Soc. 93: Muller, G.W. and A. S. Costa Search for outstanding plants in Tristeza infected Citrus orchard: the best approach to control the disease by preinmunization. Phytophylactica 19: Navarro, L., J.F. Ballester, J. Juárez, J. A. Pina, J. M. Arregui, R. Bono, L. Fernández de Córdoba and C. Ortega The Citrus Variety Improvement in Spain (CVIPS) after four years. Proc. 8th Conf. IOCV Navarro, L., J. F. Ballester, J. Juárez, J. A. Pina, J. M. Arregui and R. Bono Development of Program for disease free citrus budwood in Spain. Proc. Int. Soc. Citriculture Rocha-peña, M. A. Lee, R Citrus Trizteza Virus. Plant Dis. 79: Saunt, J Variedades de Cítricos del Mundo. Edipublic S L. 127 p. 23. Timmer, L. W. Duncan, L. W Citrus Healt Management. APS press.197 p