ACCU TELL. Prueba Rápida en cassette PCR Semi-Cuantitativa. Sólo para uso diagnóstico in vitro Para muestras de sangre completa/suero/plasma
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- Agustín Rodríguez Pereyra
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1 ACCU TELL Prueba Rápida en Cassette PCR Semi-Cuantitativa Sólo para uso diagnóstico in vitro Para muestras de sangre completa/suero/plasma Este inserto es aplicable para los siguientes productos: Número de Catálogo ABT-CT-B251 en sangre completa Nombre del producto Prueba Rápida en cassette PCR Semi-Cuantitativa Una prueba rápida para la detección semi-cuantitativa de proteína C reactiva en sangre completa, suero o plasma. Sólo para uso profesional de diagnóstico in vitro. USO PREVISTO completa/suero/plasma) es un inmunoensayo cromatográfico rápido para la detección semi-cuantitativa de Proteína C Reactiva en sangre completa, suero o plasma.
2 RESUMEN La Proteína C Reactiva (PCR) se ha encontrado relacionada en el suero del paciente con infecciones agudas, condiciones necróticas y una variedad de trastornos inflamatorios. Existe una fuerte correlación entre los niveles séricos de PCR y la aparición del proceso inflamatorio. El control de los niveles de PCR en el suero del paciente indica la efectividad del tratamiento y la evaluación de la recuperación del paciente. Se utiliza particularmente para diferenciar las infecciones bacterianas de las infecciones virales. PRINCIPIO completa/suero/plasma) es un inmunoensayo semi-cuantitativo basado en una membrana para la detección de Proteína C Reactiva en sangre completa, suero o plasma. Durante la prueba, la muestra se introduce al pocillo de muestra y reacciona con partículas conjugadas con anticuerpo PCR, la mezcla migra hacia la superficie de la membrana cromatograficamente por acción de capilaridad para reaccionar con anticuerpo anti-pcr localizado previamente en la membrana y generar una línea de color púrpura. El número de líneas depende de la concentración de PCR en la muestra. Mientras más PCR esté contenido en la muestra, mas líneas de color se harán visibles. La línea de control sirve como un control de procedimiento e indica que se ha agregado suficiente volumen de muestras y se ha producido una adecuada absorción en la membrana. REACTIVOS completa/suero/plasma) contiene anticuerpo PCR conjugado con oro coloidal, anticuerpo PCR recubierto en la membrana y buffer con Proclin 300 al 0.03%. PRECAUCIONES Sólo para uso diagnóstico profesional in vitro. No usar después de la fecha de vencimiento. No comer, beber ni fumar en el área donde se manipulan las muestras o los kits. Manejar todas las muestras como si contuvieran agentes infecciosos. Observar las precauciones establecidas contra los riesgos microbiológicos en todos los procedimientos y seguir los protocolos estándar para la eliminación adecuada de las muestras. Usar ropa protectora, como batas de laboratorio, guantes desechables y protección ocular cuando se tomen las muestras de las pruebas. La humedad y la temperatura pueden afectar negativamente los resultados.
3 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Almacenar sellado a temperatura ambiente o refrigerado (2 30 C). La prueba es estable hasta la fecha de vencimiento impresa en el envoltorio sellado. La prueba debe permanecer en el envoltorio sellado hasta su uso. NO CONGELAR. No utilizar después de la fecha de vencimiento. RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA completa/suero/plasma) puede utilizarse usando sangre completa (venopunción o punción capilar), suero o plasma. Para la recolección de muestra de sangre completa por punción capilar: o Lave la mano del paciente con agua tibia y jabón o limpie con algodón con alcohol. Dejar secar. o Masajear la mano sin tocar el sitio de punción frotando la mano hacia la punta del dedo medio o anular. o Puncionar en la piel con una lanceta estéril. Limpiar el primer signo de sangre. o Frotar suavemente la mano desde la muñeca a la palma y el dedo para formar una gota redonda de sangre sobre el sitio de la punción. o Agregue la muestra de sangre completa por punción capilar a la prueba mediante el uso de un tubo capilar: Toque el extremo del tubo capilar con la sangre hasta que se llene aproximadamente 10 µl. Evitar las burbujas de aire. Colocar la pipeta en el extremo superior del tubo capilar, luego apretar la pipeta para dispensar la sangre completa al área de muestra del cassette de prueba. Separar suero o plasma de la sangre lo antes posible para evitar la hemólisis. Usar solo muestras claras no hemolizadas. Las pruebas se deben realizar inmediatamente después de que se hayan recolectado las muestras. No dejar las muestras a temperatura ambiente durante períodos prolongados. Las muestras de suero y plasma pueden ser almacenadas a 2 8 C hasta 3 días. Para almacenar a largo plazo, las muestras deben mantenerse por debajo los -20 C. La sangre completa recolectada mediante venopunción deben almacenarse a 2 8 C si la prueba se realizará dentro de 2 días de la recolección. No congelar las muestras de sangre completa. La sangre completa recolectada por punción capilar debe ser analizada inmediatamente. Poner las muestras a temperatura ambiente antes de realizar la prueba. Las muestras congeladas deben descongelarse completamente y mezclarse bien antes de realizar la prueba. Las muestras no deben congelarse y descongelarse repetidamente.
4 Si se deben enviar muestras, deben embalarse de acuerdo con las regulaciones locales que cubren el transporte de agentes etiológicos. MATERIALES Materiales proporcionados Cassette de prueba Pipeta Buffer Inserto Materiales requeridos pero no proporcionados Contenedor de recolección de muestra Centrífuga (sólo para muestras de plasma) Temporizador Para punción capilar de sangre completa Lancetas Tubos capilares heparinizados y pipeta desechable PROCEDIMIENTO DE PRUEBA Permitir que la prueba, la muestra, el buffer y/o los controles alcancen la temperatura ambiente (15 30 C) antes de realizar la prueba. 1. Poner el envoltorio a temperatura ambiente antes de abrir. Retirar el cassette de prueba del envoltorio sellado y usar lo antes posible. Se obtendrán mejores resultados si la prueba se realiza dentro de una hora. 2. Colocar el cassette en una superficie limpia y nivelada. Para muestras de Suero o Plasma o Sangre completa por Venopunción: Usar una pipeta desechable para transferir 5 µl de la muestra de suero o plasma o 1 gota de sangre completa (aproximadamente 10 µl) y agregar al tubo de buffer de dilución. Mover de arriba a abajo el tubo varias veces para mezclar bien la muestra. Agregar 3 gotas de muestra diluída sobre el pocillo de muestra y encienda el temporizador. Esperar a que aparezca la(s) línea(s) de color. El resultado de la prueba debe leerse a los 5 minutos. No interpretar el resultado después de los 8 minutos. Para muestras de Sangre Completa por Punción Capilar:
5 Para usar un tubo capilar: llenar el tubo capilar y transferir aproximadamente 10 µl de muestra de sangre completa por punción capilar al tubo de dilución con buffer. Mover de arriba a abajo el tubo varias veces para mezclar bien la muestra. Agregar 3 gotas de muestra diluída sobre el pocillo de muestra y encienda el temporizador. Esperar a que aparezca la(s) línea(s) de color. El resultado de la prueba debe leerse a los 5 minutos. No interpretar el resultado después de los 8 minutos. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
6 (Por favor consultar la ilustración de arriba) POSITIVO: Aparece una línea coloreada en la región de control (C). Aparece mínimo una línea coloreada en la región de prueba (T). Línea de prueba (T) Sólo aparece T1 Sólo aparecen T1 y T2 Resultado semi cuantitativo Nivel de PCR es de 10 mg/ml como mínimo Nivel de PCR es de 40 mg/ml como mínimo Aparecen T1, T2 y T3 Nivel de PCR está por sobre los 80 mg/ml NEGATIVO: Aparece una línea coloreada en la región de control (C). No aparece línea aparentemente púrpura en la región de prueba (T). Los resultados negativos mostraron: no había PCR en la muestra, o el contenido de PCR estaba bajo el rango detectable. Línea de prueba (T) No hay línea Resultado semi cuantitativo Nivel de PCR está bajo los 10 mg/ml INVALIDO: La línea C no aparece. El volumen de muestra es insuficiente o las técnicas de procedimiento son incorrectas son las razones más probables para la falla en la línea de control. Revisar el procedimiento y repetir la prueba con un cassette de prueba nuevo. Si el problema persiste, suspender el uso del kit de prueba inmediatamente y contactar a su distribuidor local. CONTROL DE CALIDAD Se incluye un control de procedimiento en la prueba. Una línea que aparece en la región de control (C) se considera un control de procedimiento interno. Confirma volumen suficiente de muestra. No se proporciona control estándar con este kit; sin embargo, se recomienda que los controles positivos y negativos se prueben como una buena práctica de laboratorio para confirmar el procedimiento y verificar el rendimiento adecuado de la prueba. LIMITACIONES
7 1. completa/suero/plasma) es solo para uso diagnóstico in vitro. La prueba solo debe usarse para la detección de Proteína C Reactiva en muestras de sangre completa, suero o plasma. 2. completa/suero/plasma) solo indica el nivel semi-cuantitativo de PCR en la muestra y no debe utilizarse como único criterio para evaluar los riesgos de trastornos inflamatorios. 3. Esta prueba solo se usa para detectar Proteína C Reactiva en muestras de sangre completa/suero/plasma, no como único estándar de diagnóstico. Incluso si el resultado es positivo, se debe considerar el análisis exhaustivo de los síntomas clínicos y otros métodos de detección. 4. La presencia de algunas muestras positivas para factores reumatoides clínicos probablemente interferirá el resultado de la prueba. 5. Existe una pequeña posibilidad de que algunas muestras de sangre completa con alta viscosidad o almacenadas durante más de 2 días no funcionen correctamente en el dispositivo de prueba. Repetir con una muestra de suero o plasma del mismo paciente usando un nuevo dispositivo de prueba. 6. Los resultados elevados de PCR en usuarias de anticonceptivos orales (AO) deben informarse con precaución ya que la Sociedad Americana de Fisiología ha recomendado más estudios sobre el impacto del uso de AO en la PCR y los parámetros inflamatorios. 7. Altas concentraciones de PCR pueden producir un efecto de gancho de dosis, dando como resultado la obtención de resultados falsos negativos. No se ha observado un efecto de gancho de alta dosis con esta prueba de hasta 2000 mg/l de PCR. VALORES ESPERADOS PCR es un marcador no específico para infecciones agudas, condiciones necróticas y una variedad de trastornos inflamatorios. Para descartar riesgos de infección bacterianas, su valor esperado es menos de 10 mg/ml según la AHA. CARACTERÍSTICAS DE PRESENTACIÓN
8 Sensibilidad y Especificidad completa/suero/plasma) ha sido evaluado en comparación con una prueba líder comercial EIA PCR utilizando muestras clínicas. EIA Método Negativo Positivo Total ACCU-TELL Resultado mg/l mg/l mg/l mg/l Cassette de 0-10mg/l Prueba Rápida 10-40mg/l para PRC Semi 40-80mg/l Cuantitativa 80mg/l Total % 86.2% 94.0% % Exactitud Relativa 97.1% 98.5% 99.4% Sensibilidad Relativa: 168/169 = 99.4% (95% IC*: 96.7% - 100%) Especificidad Relativa: 99/(99+3) = 97.1% (95% IC*: 93.9% %) Precisión: (99+168)/( ) = 98.5% (95% IC*: 91.6% %) *Intervalo de Confianza PRECISIÓN Intra Ensayo Se llevaron a cabo ensayos para determinar la reproducibilidad del ensayo utilizando réplicas de 10 pruebas en tres ejecuciones diferentes para cada uno de los tres lotes utilizando niveles de muestras de PCR a 0 mg/l, 10 mg/l, 40 mg/l, 80 mg/l y 200 mg/l. Las muestras se identificaron correctamente >99.9% del tiempo. Inter Ensayo La precisión entre corridas se ha determinado utilizando los cinco niveles de muestras de PCR a 0 mg/l, 10 mg/l, 40 mg/l, 80 mg/l y 200 mg/l en 3 ensayos independientes. Se han probado tres lotes diferentes la prueba rápida en cassette PCR Semi-Cuantitativa ACCU-TELL (Sangre completa/suero/plasma) utilizando estas muestras. Las muestras se identificaron correctamente >99.9% del tiempo. Sustancias Interferentes
9 Las siguientes sustancias no interfieren con los resultados de la prueba en las concentraciones indicadas: Albúmina humana a 20 mg/ml, Bilirrubina a 10 mg/ml, Hemacromo a 10 mg/ml, Acetoaminofeno a 20 mg/dl y Creatina a 200 mg/dl. Bibliografía 1. Morley JJ, Kushner (1982) Serum C-reactive protein levels in Disease. In: Kushner I, Volanakis JE, Gewurz H, eds. C-reactive protein and the plasma protein response to tissue injury. Ann. NY Acad. Sci. 389: Peltola HO (1982) C-reactive protein for rapid monitoring of infections of the central nervous System. Lancet: Macy EM, Hayes TE and Tracy RP (1997) Variability in the measurement of C- reactive protein in healthy subjects: implications for reference intervals and epidemiological applications. Clin. Chem. 43,
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