FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS

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1 FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS I. INTRODUCCIÓN En general todas las enzimas, independiente del tipo de reacción que catalizan presentan características comunes en cuanto a los factores que intervienen, retardando o impidiendo su actividad. Estos factores se investigan teniendo en cuenta la velocidad de la reacción enzimática sobre un sustrato adecuado y en determinadas condiciones. Tomando una determinada enzima como patrón es posible tener una idea aproximada de la influencia de los factores: tiempo, temperatura, concentración de enzima, concentración de sustrato, ph, iones, etc., sobre la serie infinita de enzimas que se conoce. Este patrón general, como se comprenderá, varía en forma característica para cada enzima en particular. Par estudiar cada uno de estos factores es necesario que los otros permanezcan constantes, de tal manera que la investigación del factor variable no se vea afectada por la variación que pudieron sufrir los otros. Lo que se pretende en esta práctica es observar el efecto de iones activadores, ph, concentración de enzima, concentración de sustrato, tiempo y temperatura sobre la velocidad de reacción enzimática, tomando como ejemplo la hidrólisis enzimática del almidón y evaluando las variaciones del sustrato transformado y los productos de la reacción enzimática. II. OBJEIVOS Demostrar las modificaciones de las reacciones enzimáticas por acción de diversos agentes físicos a través de la determinación del sustrato residual 8solución yodada) y de los productos (Reactivo Folin Wu) cuyos cambios de color serán de acuerdo a un tubo patrón. III. MATERIALES Y REACTIVOS - Solución de almidón 1% - Tubo de ensayo 13x100 mm - Buffer fosfato 0,1M ph 6,5 - Baño María 37 C - Buffer acetato 0,1M ph 4,6 - Piseta 500mL - Buffer borato 0,1M ph 9,0 - Beaker 400 ml - Solución de cloruro de sodio 2% - Gradilla porta tubos - Amilasa salival 0,25% - Cocina eléctrica - Ácido clorhídrico 0,05N - Pipeta de 5mL - Solución yodada - Pipeta 2mL - Reactivo Folin Wu - Pipeta 1mL - Hielo (2 cubetas llenas) - Pipeta 0,5mL IV. DIAGRAMA EXPERIMENTAL - Armar el siguiente sistema: Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 1

2 Reactivos Solución de almidón 1% Buffer acetato 0,1M ph 4, Buffer fosfato 0,1M ph 6, Buffer borato 0,1M ph 9, Solución de cloruro de sodio 2% 1,4-1,4 1,4 1,4 1,4 1,4 1,4 Agua destilada 2,6 3, Mezclar y colocar los tubos del I al VII al baño María a 37 C por 5 minutos. - Simultáneamente colocar el tubo VIII en baño de agua helada (0-4 C) por 5 minutos. - Agregar el preparado enzimático a los tubos del II al VIII, según se indica y tomar el tiempo. Reactivos Preparado enzimático 0 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,2 0,6 - Controlar el tiempo desde el momento en que el preparado enzimático se agrega a cada tubo. - Mezclar y continuar la incubación. - Los controles de la actividad enzimática por el sustrato residual se realizará en toda la serie de tubos (del I al VIII), a los 20 minutos de incubación. Por los productos formados, se realizará sólo en los tubos III y V a los 20 minutos de incubación. Este control se realizará de acuerdo a los sistemas que a continuación se presentan: 1. Control de la actividad enzimática por el sustrato residual: el control del sustrato no transformado se realiza por la reacción del yodo de la siguiente manera: - Cumplidos los 20 minutos de incubación, sacar los tubos del baño María y luego armar una serie paralela de tubos marcados de i al 8, agregando a cada tubo marcado 0,5 ml de incubado de su correspondiente tubo. Reactivos Incubado correspondiente 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 HCl 0,05 N Solución yodada 0.5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 - Observar y anotar los resultados de las reacciones de cada uno de los tubos, valorando los cambios de coloración. 2. Control de la actividad enzimática por los productos formados: El control de los productos formados se hará en base a la actividad reductora. Esta determinación se hará en los tubos 3 y 5 del incubado a los 20 minutos, de la siguiente manera: - Armar el siguiente sistema : Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 2

3 Componentes 3 5 Incubado de los tubos 3 y Solución cúprica alcalina 1 1 Mezclar y colocar en baño de agua hirviendo por 8 minutos Enfriar los tubos con agua corriente Solución fosfomolibdica 1 1 Agua destilada Observar y anotar los resultados de las reacciones de cada uno de los tubos, valorando los cambios de coloración. V. RESULTADOS Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 3

4 VI. DISCUSIÓN Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 4

5 VII. CONCLUSIONES VIII. BIBLIOGRAFÍA Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 5

6 ESQUEMA DE LA PRÁCTICA Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 6