Población de roedores en zonas aledañas a granjas porcícolas como fuente potencial de enfermedades Zoonóticas. Diego Piedrahita MVZ MSc - PhD

Transcripción

1 Población de roedores en zonas aledañas a granjas porcícolas como fuente potencial de enfermedades Zoonóticas Diego Piedrahita MVZ MSc - PhD

2 Población de roedores en zonas aledañas a granjas porcícolas como fuente potencias de enfermedades Zoonóticas 1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 2 JUSTIFICACIÓN 3 AGENTES DE INTERÉS 4 MATERIALES Y MÉTODOS 5 RESULTADOS PARCIALES

3 Planteamiento del problema Estatus de algunas enfermedades en Colombia? Es necesario determinar la presencia de enfermedades zoonóticas presentes en roedores de granjas porcinas

4 Patógeno estudiado Justificación Especie de roedor País Localización Método Leptospira spp Rattus norvegicus UK Rural Ziehl-Nielsen Cryptosporidium parvum Rattus norvegicus UK Granjas Porcinas IFAT Listeria spp Rattus norvegicus UK Rural Cultivo Trichinella spiralis Rattus rattus Croacia Granjas porcinas Digestión enzimática Toxoplasma gondii Rattus rattus Holanda Granjas porcinas PCR TaqMan Toxoplasma gondii Mus musculus, Rattus norvegicus EE.UU Granjas porcinas MAT Hantavirus Rattus norvegicus Ucrania Rural ELISA Backhans et al., 2012

5 Justificación Trichinella spp. ETA Reemergente Toxoplasma gondii Protozoario Intracelular Reservorio y transmisor de enfermedades. Backans et al, 2012 Leptospira spp Espiroqueta Patógena

6 Trichinella spp. López et al., 2014 ETA Salud Pública 33% en animales silvestres 27% en Humanos y 21% en cerdos Presentación en 26,8% de los países Suramérica: Chile, Argentina, Uruguay, Islas Bahamas (Pozio, 2007) Colombia libre detrichinella?

7 Toxoplasma gondii Protozoo Intracelular obligado. Animales de sangre caliente. Graves pérdidas económicas. 40% de prevalencia a nivel mundial (Dubey, 2004) Colombia 47% (1982) 2008: entre 3,7 y el 89.2 % 2015: 43% por PCR. En carne.

8 Leptospira spp Bacteria que se caracteriza por su flexibilidad, motilidad y forma. Especies: L. interrogans: cepas patógenas L. biflexa: cepas saprófitas, aisladas del medio ambiente. Existen más de 225 serovares

9 Justificación PROPUESTA PARA EL MEJORAMIENTO DEL ESTATUS SANITARIO Y ASEGURAMIENTO DE LA INOCUIDAD DE LA PRODUCCIÓN PORCINA EN COLOMBIA Programa nacional integral e integrado de zoonosis. Incremento consumo de la carne de cerdo en Colombia y el mundo. Calidad e inocuidad mercado interno y externos. TLC con diferentes países. Evaluación de Factores de riesgo para entidades zoonóticas CONPES 3458 de

10 Pregunta de investigación La población de roedores que conviven en zonas aledañas a sistemas de producción porcina de Colombia están infectadas con Trichinella spp, Toxoplasma gondii y Leptospira spp?

11 Objetivo general Determinar la presencia y caracterización molecular para Trichinella spp, Toxoplasma gondii y Leptospira en roedores capturados en zonas aledañas a granjas de producción porcina en Colombia

12 Presupuesto

13 Metodología Laboratorio de parasitología especial

14 Materiales y métodos Donde: N = Total de la población. Zα = 1.96 al cuadrado (si la seguridad es del 95%) p = Proporción esperada q = 1 p d = Precisión (Thrusfield, 2005)

15 Materiales y métodos Materiales y métodos Departamento Número de granjas Número de roedores Antioquia Cundinamarca Valle del Cauca 7 34 Eje Cafetero 6 31 Meta 2 15 Total Captura de roedores en zonas aledañas a granjas de producción porcina en Colombia por departamento junio - diciembre de 2015.

16 Materiales y métodos Captura de Roedores y Toma de Muestras

17 Materiales y métodos 555 roedores Identificación Trichinella spp. Toxoplasma gondii Leptospira spp. Digestión enzimática ELISA MAT PCR Polop et al, 2011 PCR Múltiplex Extendido cerebral 8 serotipos Patógenas PCR cerebros Saprófitas Secuenciación

18 Detección de Trichinella spp Chaparro, 2013 Diagnóstico de Trichinella Digestión enzimática de músculo PCR (Controles: T. murrelli, T. 6, T. pseudospiralis, T. spiralis, T. nativa, T. patagoniensis, ) Istituto superiore di sanitá Universidad de Antioquia Gen ITSI, ITSII, ESV ISS Roma, Italia & Unidad de Diagnóstico UdeA, 2014

19 Técnicas - Toxoplasma gondii Serología Extendido cerebrales Prueba molecular ELISA Rat ELISA Kit - LS-F10245, Bioscience, empleando entre μl de suero de roedor dilución 1:10 Técnica de tinción con Giemsa PCR Amplificación del gen B1

20 L. interrogans Técnicas para Leptospira MAT suero de roedor PCR Tejido Renal Icterohaemorrhagiae Pomona Tarasovi Autumnalis Ballum Amplificación del gen 16S rrna Amplificación del gen Lipl32 Canícola Grippotyphosa Bratislava World organization for animal health, 2014

21 Secuenciación Las muestras positivas para Trichinella spp, Toxoplasma gondii y Leptospira spp se enviarán a secuenciar a MACROGEN - korea. Método de Sanger modificado Análisis filogenético: DNA star, Mega 6.0

22 RESULTADOS

23 Resultados 555 roedores Edad Especie Género Adulto 434 (78.2%) Juvenil 121 (21.8%) R. norvegicus 410 (73.9%) R. Rattus 145 (26.1%) Hembra 324 (58,4%) Macho 231 (41.6%) Trichinella spp. Toxoplasma gondii Leptospira spp 100% Negativo Positivo: 69.4% (385/555) 4.5% (25/163) Patógenas Positivo: 29,4% (163/555) 24.9% (138/163) Saprófitas

24 Resultados - Trichinella DEPARTAMENTO NÚMERO DE MUESTRAS RESULTADO DIGESTIÓN ENZIMÁTICA Antioquía 559 Negativo Cundinamarca 181 Negativo Valle del Cauca 176 Negativo Atlántico 32 Negativo Risaralda 16 Negativo Caldas 16 Negativo Eje Cafetero 16 Negativo Santander 8 Negativo Meta 30 Negativo Nariño 16 Negativo Chocó 16 Negativo Huila 8 Negativo Tolima 10 Negativo TOTAL MUESTRAS % NEGATIVAS

25 Resultados - Leptospira RESULTADO DE SEROPOSITIVIDAD A LEPTOSPIRA PATÓGENAS POR LA TÉCNICA DE MAT 21% Positivo Negativo 79% Serología

26 Resultados - Leptospira MUESTRAS POSITIVAS A SEROVARES PATÓGENOS DE LEPTOSPIRA POR LA TÉCNICA DE MAT Meta Antioquia Valle del Cauca Cundinamarca Eje Cafetero Total Muestras Muestras Positivas Serología

27 Resultados - Leptospira PORCENTAJE DE ANIMALES POSITIVOS A SEROVARES DE LEPTOSPIRA PATÓGENAS POR LA TÉCNICA DE MAT 9% 8% 7% 27% L. Icterohaemorrhagiae L. Canícola L. Trassovi L. Pomona 10% L. Grippotyphosa 11% 12% 16% L. Bratislava L. Ballum L. Autumnalis Serología

28 Resultados - Leptospira RESULTADO DE LEPTOSPIRA POR PCR 4% 27% Positivo L. Patógena Positivo L. Saprófita Negativo 69% PCR

29 Resultados - Leptospira 8,0 PORCENTAJE DE POSITIVIDAD POR PCR A LEPTOSPIRA PATÓGENA POR ZONA MUESTREADA 7,0 6,0 7,1 6,7 5,0 4,0 4,8 3,0 3,3 2,0 1,0 0,0 Valle del Cauca Meta Antioquia Cundinamarca Eje Cafetero PCR 0,0

30 Análisis de secuencias de Leptospira. PCR Toxoplasma gondii. Secuenciación T. gondii

31 Agradecimientos Ministerio de Agricultura y desarrollo Rural Asociación Colombiana de Porcicultores-FNP Dra. Jenny Chaparro Dra. Diana Corina Zambrano Estudiante de Maestría Anderson López Universidad de Antioquia: Unidad de diagnóstico; Laboratorio de Parasitología Especial Laboratorio de Referencia de Parásitos de Europa Granjas Porcícolas Rotantes, auxiliares y contratistas del laboratorio de parasitología y microbiología de la Escuela de veterinaria Universidad de Antioquia

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