Línea Biología molecular y bioquímica de parásitos. 2.3 Estudios sobre el DNA repetitivo de T. cruzi y Plasmodium.

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César Márquez Lucero
hace 5 años
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1 Línea 2 Biología molecular y bioquímica de parásitos Programas 2.1 Caracterización y purificación de fosfolipasas de E. histolytica. 2.2 Biología molecular y bioquímica de parásitos. 2.3 Estudios sobre el DNA repetitivo de T. cruzi y Plasmodium. 2.4 Estudios de algunos determinantes antigénicos de Mycobacterium leprae. Programa 2.1 Caracterización y purificación de fosfolipasas de Entamoeba histolytica. Se trabaja con algunas enzimas proteolíticas y fosfolipásicas de E. histolytica, debido a su posible participación en la invasividad y el efecto citopático de este protozoario. Se caracterizan los factores que afectan su expresión en amibas cultivadas. Con el cultivo masivo de Entamoeba se contará con la biomasa necesaria para la purificación por cromatografía de afinidad de las enzimas mencionadas, que servirán para futuros estudios bioquímicos e inmunológicos. También se pretende estudiar otros aspectos de la biología celular y genética de amibas con la colaboración de otros grupos de la comunidad científica mexicana. Proyectos Purificación y caracterización de las fosfolipasas de E. histolytica. 44

J. Vargas, A. Olvera, A. Alagón y S. Said-Fernández 1985/P/SIDBQ Desarrollo de metodología para el análisis y caracterización de fosfolipasa en bajas concentraciones. J. Vargas y A. Olvera, J.M.

2 J. Vargas, A. Olvera, A. Alagón y S. Said-Fernández 1985/P/SIDBQ Desarrollo de metodología para el análisis y caracterización de fosfolipasa en bajas concentraciones. J. Vargas y A. Olvera, J.M. Polo, E. Reynaud y A. Alagón 1989/P/SIDBQ Programa 2.2 Biología molecular y bioquímica de parásitos. Estudios sobre la organización genética de Entamoeba histolytica: este organismo es un protozoario de interés científico no sólo por ser el agente causante de la disentería amibiana, sino además por sus propiedades biológicas. Muestra un gran polimorfismo tanto a nivel morfológico como bioquímico, pues en diferentes cultivos de una, misma cepa se encuentran variaciones considerables en los niveles de enzimas específicas. Entre distintos aislados (cepas) se observan grandes diferencias en la aparente "patogenicidad" 45

3 para el huésped experimental (el hamster). Nos interesa estudiar a fondo el genoma de este organismo, con el propósito de describir algunas de sus propiedades a nivel de expresión génica. Estamos utilizando las nuevas técnicas de separación de DNA de alto peso molecular por electroforesis en geles de campos eléctricos ortogonales para intentar el mapeo de algunos genes de Entamoeba a nivel de cromosomas, y además investigar posibles rearreglos del genoma tales como los que han sido observados en otros protozoarios. Hemos comenzado a trabajar en la clonación de elementos de DNA repetitivo, y también los genes ribosomales de Entamoeba, los cuales pueden resultar útiles como marcadores de regiones específicas en los cromosomas, y además pueden tener potencial biotecnológico como sondas de diagnóstico. Proyectos Clonación de DNA de elementos repetitivos de E. histolytica. J. Cruz, M.L. Esteves, A. Alagón y P.M. Lizardi 1986/P/SIDBQ Clonación y secuenciación de genes ribosomales de E. hystolytica. M. Zurita, B. Michel, M.L. Esteves, A. Alagón y P.M. Lizardi 1987/P/SIDBQ Clonación de gene s estructurales importantes de E. histolytica. M. Zurita, M.A. Cevallos, A. Alagón y P.M. Lizardi 1987/P/SIDBQ Construcción de un vehículo para transformación estable de E. histolytica. M.A. Cevallos, A. Alagón y Paul M. Lizardi 1989/P/SIDBQ 46

4 Programa 2.3 Estudios sobre el DNA repetitivo de T. cruzi y Plasmodium. Se sabe que en el genoma de varias especies de parásitos se encuentra DNA de secuencia repetitiva que representa un porcentaje considerable del DNA del núcleo. La secuencia del DNA repetitivo suele ser específica para la especie, lo cual hace que sirva para la identificación taxonómica del organismo. Recientemente se ha demostrado la qetección de diez a treinta células de T. cruzi usando una sonda de DNA de secuencia repetitiva del núcleo de los parásitos, obtenido por métodos de clonación en bacterias. En colaboración con Nadia Nogueira y Antonio González, de la Escuela de Medicina de la New York University, se continúan algunos estudios sobre la estructura de genes repetitivos de T. cruzi. En un proyecto iniciado por P.M. Lizardi en la Rockefeller University, fueron secuenciados cuatro elementos de DNA repetitivo de P. falciparum. Estas secuencias mostraron hibridación específica para la especie, es decir, no forman híbridos con DNA de otras especies de plasmo dio como P. vivax y P. malariae. La utilidad de estas clonas de DNA repetitivo en ensayos diagnósticos de malaria se ha demostrado en pruebas de hibridación con sangre de monos infectados con el parásito. Se continúa este proyecto de investigación en el Centro, y además se ha iniciado un proyecto paralelo cuyo fin es aislar y caracterizar clonas de DNA repetitivo de P. vivax, que es la especie de plasmodio más frecuente en focos de infección de paludismo en México. Se espera que para este parásito también se puedan obtener clonas de secuencia específica para la especie, con similar aplicación práctica en ensayos diagnósticos. Proyectos Clonación de DNA de elementos repetitivos de Plasmodium vivax y su utilización para el mapeo de cromosomas. 1. Tussié, A. Alagón, M.H. Rodríguez y P.M. Lizardi 1986/P/S/DBQ 47

Secuenciación de genes ribosomales de P. vivax. 1. Tussié, A. Alagón, M.H. Rodríguez y P.M. Lizardi 1988/P/SIDBQ Programa 2.4 Estudios de algunos determinantes antigénicos de Mycobacterium leprae.

5 Secuenciación de genes ribosomales de P. vivax. 1. Tussié, A. Alagón, M.H. Rodríguez y P.M. Lizardi 1988/P/SIDBQ Programa 2.4 Estudios de algunos determinantes antigénicos de Mycobacterium leprae. La lepra es una enfermedad causada por microorganismos parasitarios intracelulares (M. leprae), de proliferación muy lenta y para el cual todavía no se ha podido, hasta la fecha, obtener un cultivo in vitro. Hay muy pocos modelos experimentales disponibles para el estudio de la lepra, entre ellos está la posibilidad de cultivar el bacilo en el armadillo, mamífero americano de pequeño porte, que puede ser afectado por el bacilo de la lepra. Es una enfermedad importante en ciertos países, incluyendo México, que cuenta con más de pacientes registrados. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que para cada paciente registrado debe haber de 2 a 3 veces más individuos portadores. La lacra social que acompaña al portador de lepra explica en parte la carencia exacta de datos estadísticos sobre los enfermos. Si bien existe cura mediante aplicación de antibióticos, los programas nacionales de varios países no han podido erradicar la enfermedad; al contrario, el tratamiento inadecuado ha generado bacilos resistentes a algunos de los antibióticos eficaces para su tratamiento. Como en una población normal puede haber portadores sanos, es muy importante desarrollar una prueba que facilite la identificación inequívoca del portador de M. leprae. La clonación de genes obtenida de bancos de cona del parásito ha permitido conocer la secuencia nucleotídica y por ende la secuencia de aminoácidos de algunas proteínas del M. leprae. Parte de este trabajo, así como el mantenimiento de una colonia de armadillo, ha sido realizado por mexicanos de la Escuela de Ciencias Biológicas del IPN. El grupo de trabajo de 1. Possani ha propuesto un proyecto conjunto con los colegas del IPN en el sentido de desarrollar un sistema de diagnóstico que permita identificar la lepra en sus fases 48

6 tempranas de desarrollo, mediante el uso de péptidos sintéticos, diseñados de acuerdo con las secuencias de aminoácidos conocidas. JDroyectos Desarrollo de péptidos sintéticos útiles para diagnóstico de lepra. L.D. Possani, I. Estrada-G., P. Méndez-S., S. Estrada-P., F.-Quesada-P., M.C. Gutiérrez, G.B. Gurrola, C. Balderas y E.S.A. Calderón y S. Contreras 1989/P/SIDBQ 49

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