LABORATORIO EN EL PACIENTE DIABETICO. Departamento de Bioquímica Clínica Facultad de Farmacia y Bioquímica Universidad de Buenos Aires 2017

Transcripción

1 LABORATORIO EN EL PACIENTE DIABETICO Departamento de Bioquímica Clínica Facultad de Farmacia y Bioquímica Universidad de Buenos Aires 2017

2 Diabetes Mellitus Conjunto de enfermedades metabólicas caracterizadas por hiperglucemia crónica con trastornos del metabolismo de los carbohidratos, de las grasas y de las proteínas que son el resultado de defectos de la secreción de insulina, de la acción de la insulina o de ambas. ADA, OMS,1999

3 CLASIFICACION ETIOLOGICA * Diabetes Tipo 1 * Diabetes Tipo 2 * Otros tipos específicos * Diabetes Mellitus Gestacional (DMG) ADA (1997), OMS (1999)

4 CRITERIOS PARA DIAGNOSTICO DE DIABETES (ADA,OMS ) Síntomas clásicos de diabetes con glucemia al azar 200 mg/dl Glucemia en ayunas 126 mg/dl PTOG: Glucemia 120 min 200 mg/dl HbA 1C 6.5 % (ADA) Diab. Care, vol 40, Sup 1, enero 2017

5 Diabetes mellitus gestacional (DMG) SAD Glu ayunas 100 mg/dl (confirmación) PTOG glu 120 min 140 mg/dl Rev, SAD,Vol 46,Nº Especial:Recomendaciones 2012

6 CATEGORIAS DE RIESGO INCREMENTADO PARA DIABETES (PREDIABETES) GAA (Glucemia en ayunas alterada ): glucemia: mg/dl TGA (tolerancia a la glucosa alterada): glucemia a los 120 min (PTOG): mg/dl HbA 1c : % (ADA) Diab. Care, vol 40, Sup 1, enero 2017

7 SEGUIMIENTO

8 HEMOGLOBINA GLICOSILADA

9 Hemoglobina A1c Muestra: sangre entera anticoagulada con EDTA Utilidad: evaluación del control glucémico durante los últimos dos a tres meses.

10 Molécula de hemoglobina A

11 HEMOGLOBINA TOTAL HbA ααββ 97 % HbA2 ααδδ 2.5 % HbF ααγγ 0.5 % HbA0 No glicosilada HbA1 Glicosilada HbA1a HbA1b HbA1c 90 %

12 Glicosilación proteica no enzimática 1) Formación de una base de Schiff 2) Reordenamiento de Amadori 3) Etapa irreversible (productos AGE)

13 Glicosilación proteica no enzimática

14 Unidades y valor de referencia DCCT -UKPDS NGSP ESTANDARIZACIÓN HPLC: método provisorio Método de referencia Nuevas unidades Certificación

15 Método de referencia Internacional Federation of Chemistry (IFCC): Clinical El método se basa en el clivaje enzimático de la molécula intacta de hemoglobina con una endopeptidasa para obtener los hexapéptidos-n terminales de la cadena β glicados y no glicados. Los péptidos son separados por HPLC y cuantificados por espectrometría de masa. Se expresa la HbA1c como la relación entre los hexapéptidos N-terminal glicados y no glicados. (Consenso 2007 entre Asociación Americana de Diabetes, Federación Internacional de Diabetes, Asociación Europea para el Estudio de Diabetes e IFCC)

16 Valores de referencia HbA1c IFCC / NGSP Valores de referencia HbA1c Límite inferior Límite superior NGSP 4 6 IFCC Unidad % mmol/mol mol

17 METODOLOGIAS POR CARGA: Cromatografía de intercambio iónico Cromatografía líquida de alta performance (HPLC) POR ESTRUCTURA: Cromatografía de afinidad Inmunológicos

18 Cromatografía de intercambio iónico Intercambio catiónico: la fase estacionaria intercambia cationes. La HbA1c tiene menos carga positiva que el resto de las hemoglobinas es la primera que eluye. Se mide la absorbancia del eluato en espectrofotómetro. Mide HbA1c

19 Cromatografía de intercambio iónico: factores que afectan Temperatura ph y fuerza iónica del buffer de elución Intermediarios lábiles Variantes genéticas del Hb (F, C, S) Variantes carbamiladas y acetiladas Triglicéridos Bilirrubina

20 Cromatografía de afinidad Fase estacionaria: ácido borónico que tiene alta afinidad por los grupos cis-glicol. Eluyen primero las Hb no glicosiladas. Las Hb glicosiladas (HbA1 a, HbA1 b y HbA1 c ) quedan retenidas. Mide Hb glicosilada total V.R.: %

21 Cromatografía de afinidad Ventajas: Menos suceptible a la temperatura. No interfieren los intermediarios lábiles. No interfieren las variantes de hemoglobina Desventaja: mide todas las hemoglobinas glicosiladas

22 Método inmunoturbidimétrico (Inhibición de la inmuno aglutinación) Anticuerpo Aglutinador Ausencia de HbA1c aglutinación Anticuerpo HbA1c del paciente Alta dispersión Aglutinador Inhibición de la aglutinación Baja dispersión

23 Reactivo HbA1c método inmunoturbidimétrico

24 Método inmunológico Ventajas: Resultados exactos y precisos. No interfieren las variantes genéticas de Hb. No interfieren los aductos de Hb no glicosilada. Desventaja: No reconoce variantes de Hb (F, C, S)

25 HbA1c Glicación de Hb Turn-over del GR niveles glucémicos velocidad de glicación

26 Factores que modifican el resultado de HbA1c no dependientes de metodología Valores bajos: -Transfusiones de GR Valores variables: Def.de Fe / anemia ferropénica? - Embarazo - Insuficiencia renal - Hemoglobinopatías - Hemodilución - Vitaminas C y E Diab.Care, January Vol 33, Supp 1, J Kidney Dis 2002; 39:

27 Factores que modifican el resultado de HbA1c según la metodología Valores aumentados (cromat. de intercambio iónico) : - Derivados carbamilados - Hipertrigliceridemia - Hiperbilirrubinemia - Derivados acetilados: alcoholismo, altas dosis de aspirina - Variantes de Hb (Hb fetal) Diab.Care, January Vol 33, Supp 1, J Kidney Dis 2002; 39:

28 Factores que modifican el resultado de HbA1c según metodología Valores disminuidos: (mét.inmunológico) - Triglicéridos (método inmunológico)? - Variantes de Hb no reconocidas por el anticuerpo ( F,C,S )

29 FRUCTOSAMINA

30 Fructosamina Proteínas plasmáticas glicosiladas Evaluación del control glucémico 2-3 semanas previas Muestra de elección: suero Rango de referencia: hasta 285 µmol/l

31 Fructosamina Método: reducción del NBT en medio alcalino Fructosamina + NBT FORMAZAN

32 Consideraciones metodológicas: ph de la solución reactiva Hemólisis de la muestra Hiperbilirrubinemia Hipertrigliceridemia

33 Consideraciones fisiopatológicas gicas: Alteraciones del metabolismo proteico (tirotoxicosis, hipotiroidismo) Interferencia por altas cc de IgA - Reacción de IgA con NBT? - Glicación de IgA? Hipoalbuminemia Pérdida renal de proteínas Hepatopatías CLIN. CHEM.33/12, (1987) CLIN. CHEM. 34/12, (1988) CLIN. CHEM. 35/1, (1989)

34 Fructosamina Utilidad: Mujer embarazada Hemoglobinopatías, anemia, alteraciones del turn-over del GR. Post cambio terapéutico o al instalar la terapéutica Evaluación de terapia a corto plazo

35 Seguimiento del paciente DBT Glucemia en ayunas y post prandial HbA1c Fructosamina Péptido C Orina completa Urocultivo Estudio de función renal: urea, creatinina, Cl de creatinina, proteinuria de 24 hs/albuminuria Control lipídico

36 Orina completa Fisicoquímico: - densidad - ph - Hemoglobina - Bilirrubina - Glucosa - Cuerpos cetónicos - Proteínas - Nitritos Microscópico: - Células - Leucocitos - Piocitos - Hematíes - Mucus - Microorganismos - Levaduras - Cilindros - Cristales - Otros

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