ScanGel Monoclonal A - B - D Tarjetas Tarjetas
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- Alfonso Medina Poblete
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1 ScanGel Monoclonal A - B - D Tarjetas Tarjetas GELES FORMULADOS CON REACTIVOS MONOCLONALES DE ORIGEN MÚRIDO O HUMANO Confirmación del tipaje ABO/D IVD Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad se hallan bajo un sistema de garantía de calidad desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización de los productos finales. Cada lote de producto final se somete a un control de calidad y sólo se comercializa si está en conformidad con los criterios de aceptación. El fabricante conserva la documentación referente a la producción y al control de cada lote. 17
2 I - UTILIZACIÓN Y PRINCIPIO DE LA PRUEBA Esta tarjeta está estrictamente reservada para uso profesional e in vitro. Designada para Confirmación del tipaje ABO/D, el test combina los principios de aglutinación y filtración en gel. Una tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D permite ensayar 2 muestras. Para cada muestra se deben utilizar tres microtubos : ABO1(A), ABO2(B) y RH1(D). La reacción se obtiene y se lee tras la centrifugación de unos microtubos especialmente diseñados, rellenos de gel impregnado del reactivo específico del antígeno eritrocitario a determinar. La suspensión de glóbulos rojos se deposita en el pocillo de cada microtubo y se centrifuga inmediatamente. Los glóbulos rojos no aglutinados se depositan en el fondo del microtubo, mientras que los aglutinados se retienen por todo el gel en función de su tamaño. Su posición en el gel determina la intensidad de la reacción II - CARACTERÍSTICAS DE LOS REACTIVOS El primer y el cuarto microtubos de la tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D contienen cada uno un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen múrido de especificidad anti-abo1(a). Este anticuerpos se produce a partir de los clon 15750F7. El segundo y el quinto microtubos de la tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D contienen cada uno un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen múrido de especificidad anti-abo2(b). Este anticuerpos se produce a partir de los clon X9. El tercer y el sexto microtubos de la tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D contienen cada uno un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen humano de especificidad anti-rh1(d). Este anticuerpo es una IgM secretada por el clon B9A4-B2A6A6A1A1. Estos dos anti-rh1(d) no permiten la detección del fenotipo RH1 parcial categoría VI (DVI). Estos reactivos contienen azida sódica (< 0,1 %) como conservante. El código del producto y el número de paneles por caja se indican en la etiqueta de la caja. 18
3 III - CADUCIDAD Y CONSERVACIÓN La fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento se indican en la caja. Las tarjetas deben conservarse a temperatura ambiente, de +15 C a +25 C. Las tarjetas deben almacenarse verticalmente, protegidas de las fuentes de calor, en un local con escasas variaciones de temperatura e higrométricas. IV - PRECAUCIONES La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas de laboratorio siguientes : No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar tarjetas que muestren signos de desecación o burbujas, o si la lengüeta de sellado muestra signos de deterioro. Como los reactivos contenidos en los microtubos tienen una naturaleza diferente, es indispensable tomar las precauciones necesarias para no provocar contaminaciones inter-microtubos, especialmente cuando se retira la lengüeta de aluminio y en las etapas de distribución. Utilizar una punta de pipeta para cada muestra. Comprobar la precisión y el correcto funcionamiento de las pipetas y de los otros equipos. Llevar guantes y gafas de protección durante la manipulación de los reactivos y de las muestras. No pipetear directamente con la boca. Evitar las salpicaduras. En caso de salpicaduras, limpiar las superficies manchadas con lejía de 12ºCl diluida al 10% y secar con papel absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá ser desechado en un contenedor especial para residuos contaminados. Producto y fungible que hayan estado en contacto con muestras o reactivos que contenga material de origen humano deben ser descartados una vez descontaminados. Las fichas de seguridad están disponibles bajo petición. V - RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS La sangre debe obtenerse en condiciones de asepsia en un tubo sin o con anticoagulante (EDTA, CPD). Tras la obtención, la prueba debe realizarse lo antes posible. Las muestras que no puedan analizarse rápidamente deberán conservarse entre +2 C y +8 C para ser sometidas a prueba en las 48 horas siguientes. En ningún caso debe observarse hemólisis. No calentar las muestras. 19
4 VI - TÉCNICAS Material suministrado Tarjetas ScanGel Monoclonal A-B-D Material necesario pero no suministrado Medios de suspensión de los glóbulos rojos ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos IH QC 4 x 6 ml Centrífuga : ScanGel Centrifuge Pipetas automáticas o semiautomáticas Puntas de pipetas Tubos de un solo uso Contenedor especial para residuos con riesgo biológico Lejía Guantes de látex Papel absorbente Gafas de protección Controles Controles positivo y negativo : glóbulos rojos encontrados positivos y negativos para el antígeno estudiado. Estos controles deben ser testados simultáneamente con los glóbulos rojos de la muestra a probar para validar la actividad propia del reactivo. IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos. Procedimiento Seguir estrictamente el protocolo propuesto. Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente. Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a probar. VI.1 - Suspensión en ScanLiss a) Previa preparación de la suspensión de globulos rojos 1% para testarse en ScanLiss Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 10 μl del precipitado globular. Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. 20
5 b) Técnica 1. Identificar la tarjeta con el nombre o el número de muestra correspondiente. Retirar la lengüeta de aluminio de las tarjetas con cuidado para evitar las contaminaciones interpocillos. Resuspender los hematíes anted de usar. 2. Distribuir 50 μl de suspensión globular en el pocillo de cada microtubo de la tarjeta. 3. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centrífuge. 4. Leer las reacciones. VI.2 - Suspensión en ScanSol a) Preparación extemporánea de una suspensión de glóbulos rojos 5% en ScanSol Poner 0,5 ml de ScanSol en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 25 μl del precipitado globular. Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. b) Técnica 1. Identificar la tarjeta con el nombre o el número de muestra correspondiente. Retirar la lengüeta de aluminio de las tarjetas con cuidado para evitar las contaminaciones interpocillos. Resuspender los hematíes anted de usar. 2. Distribuir 10 μl de suspensión globular en el pocillo de cada microtubo de la tarjeta. 3. Centrifugar inmediatamente 10 minutos en ScanGel Centrífuge. El retraso entre el final de la distribución y el principio de la centrifugación no debe exceder los 10 minutos. 4. Leer las reacciones. VII - INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS La tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D debe utilizarse únicamente para confirmar un resultado conocido del grupo ABO/D. En ningún caso puede reemplazar a un grupaje ABO/D completo. La presencia de aglutinados en la superficie o dispersos en el gel corresponde a un resultado positivo. Un sedimento de glóbulos rojos en el fondo del microtubo corresponde a un resultado. Los resultados sólo son válidos si los controles positivo y negativo dan los resultados esperados. 21
6 Una reacción positiva de intensidad inferior a 4+ en un microtubo puede indicar la presencia de un antígeno débil u originarse por una reacción no específica. Debe realizarse entonces un grupaje ABO/D completo. a) Interpretación de los microtubos ABO1(A) y ABO2(B) En la tabla siguiente se presentan los perfiles de los resultados esperados en cada microtubo y su interpretación : Confirmación del tipaje: Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) A + - B - + AB + + O - - b) Interpretación de los microtubos RH1 (D) Un resultado positivo en un microtubo RH1 (D) confirma un resultado conocido RH : 1 (D positivo). VIII - COMPORTAMIENTO a) Comportamiento especifico de los reactivos anti-abo1(a) y ABO2 (B) Se ha evaluado el comportamiento de los reactivos anti-abo1(a) y anti-abo2 (B) en un panel de 1641 muestras no seleccionadas (1.150 donantes, 332 pacientes, y 159 recién nacidos) que se completó con un panel de muestras seleccionadas (antígenos débiles). Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de placa, tubo, microplaca o filtración de gel. Las muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Se comprobó un panel de 17 muestras seleccionadas (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB, A3B, ABf). Todas las muestras fueron detectadas con unareactividad de 1+ a 3+. Los antígenos B adquiridos comprobados no fueron detectados con el anti-abo2(b) de la tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D. Los reactivos anti-abo1(a) y anti-abo2 (B) de la tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D mostraron una buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. b) Comportimiento especifico del reactivo anti-rh1(d) Se ha evaluado el comportamiento del reactivo anti-rh1 (D) en un panel de 1641 muestras no seleccionadas (1.150 donantes, 332 pacientes, y 159 recién nacidos) que se completó con un panel de muestras seleccionadas (antígenos débiles). Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de placa, tubo, microplaca o filtración de gel. Las muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Se ha ensayado un panel de 24 muestras especiales (Ag débiles, variantes y fenotipos especiales). Se ha detectado el conjunto de las variantes y de los fenotipos 22
7 especiales, excepto una muestra de fenotipo RH1 parcial categoría VI (DVI). Fue detectado el 94% de los antígenos RHW1 (D débil) comprobados. Ambos reactivos anti-rh1(d) de la tarjeta ScanGel Monoclonal A-B-D mostraron buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. LÍMITES Los resultados anormales pueden ser consecuencia de : una contaminación bacteriana o química del suero, del plasma, de los glóbulos rojos o del material. una medicación o un estado patológico del paciente que provoque una reacción cruzada. el uso de un medio de suspensión para los glóbulos rojos diferente al recomendado. una preparación de los glóbulos rojos diferente a la recomendada. la presencia de fibrina (imagen de un sedimento celular compacto en el fondo de un microtubo acompañado de una fina banda rosada en la zona superior del gel correspondiente a los glóbulos rojos retenidos por los residuos de fibrina). contaminación entre microtubos. uso de otro procedimeinto del descrito anteriormente. IX - REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Ver la version Inglesa. Con la licencia de DIAMED, S.A., 1785 Cressier-sur-Morat, Suiza 23
8 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2008 Fax.: Code:
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