II Congreso Internacional. de Dengue y Fiebre Amarilla

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Rosario Lara Sosa
hace 5 años
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Dr. Juan A. Bisset Lazcano bisset@ipk.sld.

1 Dr. Juan A. Bisset Lazcano PRIMER REPORTE DEL MECANISMO DE Ache MODIFICADA EN Aedes aegypti DE CUBA II Congreso Internacional Presentación de Dengue y Fiebre Amarilla

2 OBJETIVOS Seleccionar una cepa de Aedes aegypti con el gen de la Acetilcolinesterasa Modificada (AcheM) para la realización de estudios bioquímicos y moleculares de este mecanismo en dicha especie. Analizar el efecto de la selección con proporxur sobre la resistencia cruzada a otros insecticidas y determinar los posibles mecanismos responsables.

3 SANTIAGO DE CUBA CEPAS UTILIZADAS Colectada en el brote de Dengue ocurrido en esta localidad cubana en F1P, F2P, F3P, F4P y F5P Cepas resultantes en cada generación de selección con proporxur. ROCKEFELLER Cepa susceptible de referencia, suministrada por el CDC de Puerto Rico. ATERIALES

4 INSECTICIDAS UTILIZADOS ORGANOFOSFORADOS Temefos Malation Clorpirifos Fenitrotion Fention Pirimifos metil SINERGISTAS DEF PB CARBAMATOS Proporxur ATERIALES

5 LA DETECCIÓN DE LA RESISTENCIA SE REALIZÓ POR LOS BIOENSAYOS DE LA OMS, Larvas de tercer estadío tardío o cuarto temprano son localizadas en copas conteniendo 99 ml de agua y 1 ml de solución de insecticida a la concentración deseada en Acetona. Son evaluadas cinco o más concentraciones con cinco réplicas de cada una en diferentes días. El control es tratado con 1 ml de Acetona solamente. Se determina la mortalidad a las 24 horas después de aplicado el insecticida. MÉTODOS

6 EL PROCESO DE SELECCIÓN SE REALIZÓ A UNA DOSIS DEL 90% OBTENIENDO LAS CEPAS: F1P, F2P, F3P, F4P Y F5P

7 DETERMINACIÓN DE LOS MECANISMOS DE RESISTENCIA In vivo: A través del uso de los sinergistas DEF (Inhibidor de Esterasas) y PB (Inhibidor de las Oxidasas de acción múltiple). In vitro: Pruebas bioquímicas para la detección de Esterasas, Glutatión-S-Transferasas y Acetilcolinesterasas.

8 RESULTADOS

9 Tabla 1. Valor del factor de Resistencia (FR) en SANTIAGO DE CUBA (STC) y en cada generación resultante del proceso de selección con propoxur (F1P, F2P, F3P, F4P y F5P), así como de la cepa ROCKEFELLER. Cepas LC 50 (ppm) FR 50 b STC F1P F2P F3P F4P F5P ROCKEFELLER

10 Tabla 2. Valores de factor de Sinergismo (FS) para SANTIAGO DE CUBA (STC), para la cuarta y quinta generación de selección y ROCKEFELLER. Cepas DEF + propoxur PB + propoxur SANTIAGO DE CUBA F4P F5P ROCKEFELLER

11 Fig 1. Variación de la frecuencia del mecanismo de la AcheM, comparado con los valores de FR 50 obtenidos en cada generación de selección con proporxur FR 50 PROPOXUR SANTIAGO DE CUBA FRECUENCIA Ache (R) F1 F2 F3 F4 F CEPAS FR50 FRECUENCIA AcheM

12 Fig 2. Resistencia cruzada a insecticidas Organofosforados, generada por la selección con proporxur. FACTOR DE RESISTENCIA (FR50) TEMEFOS MALATION CLORPIRIFOS FENITROTION FENTION PIRIMIFOS METIL SANTIAGO DE CUBA F1P F2PP F3PP INSECTICIDAS

13 Tabla 3. Variación de las frecuencias de aparición (%) de Esterasas y GST elevadas, así como AcheM durante las 4 generaciones (F1P, F2P, F3P,F4P y F5P) de selección con propoxur. Cepas Ache(%) Esterasas(%) GST(%) STC F1P F2P F3P F4P F5P

14 CONCLUSIONES

15 Por primera vez se reporta la selección de una cepa de Aedes aegypti que presenta el mecanismo de AcheM.

16 SE OBSERVÓ QUE LA SELECCIÓN CON PROPOXUR GENERÓ: Resistencia cruzada positiva a Fention y Pirimifos metil. Resistencia cruzada negativa a Temefos y Clorpirifos. No se observó cambios en la resistencia a Malation y Fenitrotion.

17 SE OBSERVÓ QUE DURANTE LA SELECCIÓN CON PROPOXUR: El mecanismo de Esterasas elevadas mostró una disminución y se mantuvo, prácticamente invariable, la frecuencia del mecanismo de GST.

18 RECOMENDACIONES

19 RECOMENDACIONES Utilizar esta cepa, como referencia para estudios bioquímicos y moleculares del mecanismo de AcheM en Aedes aegypti.

20 Los Organofosforados temefos y RECOMENDACIONES clorpirifos pueden ser utilizados en esquemas de rotación con el Carbamato propoxur, por el efecto de resistencia cruzada negativa que genera la selección con propoxur a estos insecticidas.

21 SIN EMBARGO, RECOMENDACIONES En los esquemas de uso de insecticidas no debe utilizarse el Carbamato propoxur con fention o pirimifos metil, pues al parecer presentan similares mecanismos de resistencia.

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